超高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中氯霉素类兽药残留量研究

□ 徐秋艳 江苏权正检验检测有限公司

1 实验材料准备

该实验选用的超高效液相色谱—串联质谱仪，为1290UHPLC6400QQQ型制，另配置ST8R 型冷冻离心机、LPVortex Mixer 型涡旋振荡仪。选用精度分别为十万分之一、百分之一的电子天平，超声波仪型制Ultrasonic Cleaner，并采用瑞士BUCHI 公司生产的旋转蒸发仪、德国IKA 公司生产的高速匀浆机。

该实验选用的试剂有甲醇、乙酸乙酯、浓度为29%左右的氨水、无水硫酸钠等。另外该实验需用超纯水，提前制备。

该实验选用市场随机购买的生猪肉，氯霉素类物质选用纯度高于98.8%的标准品。

2 实验操作过程

2.1 配制标准溶液

选择氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考等3 类药物的标准品各5.0 mg，分别放置于容量瓶中，使用甲醇将其稀释至50 mL 刻度位置，由此得到三瓶标准储备溶液，其浓度均100 μg/mL。在实验操作前，可由此标准储备溶液作为基础液，向内加超纯水用以稀释，可达所需浓度。

2.2 仪器条件

对色谱条件进行调试，将甲醇与水的体积比例调至2 ∶3；实验流速调至每分钟1 mL；样品进量数值调至20 μL；色谱柱数值调至C18（3 mm×100 mm），并将色谱柱温度调至恒定35 ℃。仪器运行原理见图1。

图1 仪器运行原理

对质谱条件做出调试，离子源的运行形式为电喷雾，扫描方式则为负离子扫描，其中采用多反应监测的方式，确保实验数据稳定。该离子源的额定电压设置为3.5 kV，雾化压力定为45 psi；干燥气体的每分钟流量为5 L，气体温度维持恒定300 ℃；鞘气每分钟流量11 L，鞘气温度恒定在250 ℃。

2.3 处理猪肉样品

取猪肉1 kg，去皮，绞碎并匀浆1 min，称取已匀浆试样(5.00+0.05) g，置50 mL 聚丙烯离心管中，加入3 g无水硫酸钠，乙酸乙酯10.0 mL，氨水0.3 mL，涡旋2 min，超声处理5 min，离心5 min，取上清液2 mL至25 mL 鸡心瓶中，45 ℃旋转蒸发至干[1]。残渣涡旋静置分层，取下层溶液过滤膜后，供液相色谱—串联质谱测定。

2.4 氨水影响试验

取3 类药品物质标准液，将其提取后匀浆，该步骤原理是加入氨水量不同，将会对各物质的定量离子平均峰的面积产生影响，以此判断氨水浓度、数量对该实验过程的影响范围及对实验结果的影响效果。该步骤下选用的氨水浓度为28%～30%，选用量为0 ～0.5 mL，设置等量区间为5 段。

2.5 回收率与精密性试验

在猪肉样品中加入不同浓度的标准溶液，其中每个浓度下设置6 个平行因素，并按照样品的处理方式，去制备加标的溶液样式。氯霉素与氟苯尼考的溶液浓度区间相同，分别为0.1、0.3 和1.0 μg/kg，而甲砜霉素的溶液浓度设置为0.5、1.5 和5.0 μg/kg。该步骤操作目的为探究加标回收率和该法下的数据精密性，分析相对标准偏差。

3 研究结果讨论

3.1 氨水影响试验的结果

实验可知，当改变氨水浓度和添加量时，将影响氯霉素类药物的提取数据，且影响较大，因此在使用该法测定时，需将氨水浓度固定，并着重确定添加量的具体数值。为增加提取效率，应将0.3 mL 或0.4 mL 作为氨水添加量，若综合考虑不同物质的提取效率，则选用0.3 mL 氨水作为猪肉样品提取液。

3.2 回收率与精密性结果

分析实验回收率，可知在空白猪肉样品中3 种氯霉素类药物添加水平为0.1 ～5.0 μg/kg 时，平均回 收率为90.8%～108.2%。分析该法下的实验精密性，可知相对标准偏差为2.4%～9.8%（n=6），回收率和精密度结果均较好。

4 结论

综上，采用超高效液相色谱—串联质谱方法，对猪肉中的氯霉素类药物进行含量测定，通过实验可知该法的应用效果良好，能在简便操作下，将药物含量检出，且检出限较低，能实现低含量的检出目的。其中发现氨水可影响实验进度，因此实验过程中需对其进行良好运用，另外实验分析回收率、精密性效果较好，该实验方法满足了实验室中的检测要求。