国产盐酸奥洛他定口服制剂质量评价

王立峰，王新亮，张春鸿，刘尧，马郑

作者单位：1辽宁中医药大学附属医院药学部，辽宁 沈阳110032；2大连市药品检验所化学室，辽宁 大连116000

盐酸奥洛他定为新型组胺受体阻断剂。盐酸奥洛他定片用于治疗成人荨麻疹、多种皮肤病引起的瘙痒及儿童的过敏性鼻炎等症［1-2］。本品由日本协和发酵麒麟株式会社（Kyowa Hakko Kirin Co.，Ltd.）研制，2000年12上市，国家为日本。

本品的仿制药已在我国上市。2018年大连市药品检验所承担了盐酸奥洛他定片、胶囊、滴眼剂的国家药品计划抽验课题。本研究评价了国产盐酸奥洛他定口服制剂的质量，经调研，尚未见该制剂相关研究内容的报道。在研究中，我们发现现行质量标准中有关物质检查法存在不科学及落后的缺陷，如未能控制特定杂质、检测波长设置不合理等。为全面评估该仿制品种的安全性和有效性，2018年2—8月我们采用风险控制的理念［3］，首先建立了针对性的有关物质检查法，确定并控制4 个特定杂质，明确杂质的结构和来源，并进一步开展了国产制剂与原研制剂的杂质谱的对比研究。除此以外，还开展了其他探索性研究工作，从而科学评估该国产盐酸奥洛他定口服制剂的质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters e2695 高效液相色谱，配备四元梯度泵和自动进样器；紫外检测器（2489 型），并配备二极管阵列检测器（2998 型，方法建立及强制降解时采用），美国Waters公司生产；MSA225s-100-DA型分析天平，德国Sartrious公司生产。

1.2 试药 对照品：盐酸奥洛他定（批号R058Q0，含量99.9%，美国药典委员会）盐酸奥洛他定杂质B（批号R077Q0，含量100.0%，美国药典委员会）。盐酸奥洛他定杂质C（批号R065M0，含量99.0%，美国药典委员会）。盐酸奥洛他定杂质甲醛衍生物（批号 1-VHP-134-4，含量 97.0%，Toronto Research Chemicals）。盐酸奥洛他定杂质E（批号101099-200901，含量100.0%，中国食品药品检定研究院）。

国产盐酸奥洛他定片、盐酸奥洛他定原料（批号 17103006、17103007、17103009、17053010）。国产盐酸奥洛他定胶囊、盐酸奥洛他定原料（批号171001、170901、170903）。原研制剂：盐酸奥洛他定片（日本协和发酵麒麟株式会社，批号257AGC、269AGG、257AGF、250AGA、246PFK），乙腈（色谱纯，Merck公司生产），实验用水为超纯水，十二烷基硫酸钠（分析纯，河北百灵威精细材料有限公司），磷酸二氢钾（分析纯，国药试剂有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 辛基硅烷键合硅胶色谱柱（Intertsil C8，5 µm，4.6 mm×250 mm 或效能相当）；以0.5%十二烷基硫酸钠的磷酸盐溶液和乙腈的混合溶液为流动相［取十二烷基硫酸钠5.0 g，用0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（加10%磷酸溶液调节pH 至3.5）-乙腈（55∶45）的混合溶液溶解并稀释至1 000 mL］，检测波长为299 nm，柱温为40 ℃。

2.2 供试品溶液的制备 取盐酸奥洛他定片、胶囊内容物，研细，称取粉末适量（约相当于10 mg），置50 mL 量瓶中，加流动相适量，振摇使溶解，再稀释至刻度，摇匀并滤过。取续滤液作为供试品溶液。精密量取供试品溶液适量，用流动相定量稀释成浓度为2µg/mL的溶液，作为对照溶液。

2.3 空白溶液的制备 按处方组成，取空白辅料，照“2.2”项制备方法，制备空白辅料溶液。

2.4 系统适用性溶液的制备 精密称取“1.2”项下的各对照品适量，制成含盐酸奥洛他定200µg/mL，盐酸奥洛他定杂质C、盐酸奥洛他定杂质E、盐酸奥洛他定杂质甲醛衍生物均为2µg/mL 的溶液，作为系统适用性溶液。

图1 高效液相色谱图：A为系统适用性溶液，B为胶囊剂供试品溶液，C为空白溶液

2.5 测定法 精密量取对照溶液和供试品溶液各50µL，分别注入液相色谱仪，记录至主成分保留时间的2 倍。供试品溶液色谱峰如有杂质峰，在相对保留时间为0.4 处的杂质（杂质A），应不得大于对照溶液主峰面积的0.4 倍（0.4%）；在相对保留时间为0.9 处的杂质（杂质C），应不得大于对照溶液主峰面积的0.4倍（0.4%）；在相对保留时间为1.5处的杂质（杂质E），峰面积乘以0.22，应不得大于对照溶液主峰面积的0.4 倍（0.4%）；盐酸奥洛他定E-异构体（采用对照品定位），峰面积乘以0.77，应不得大于对照溶液主峰面积的0.4 倍（0.4%）；其他单个杂质面积不得大于对照溶液主峰面积的0.2 倍（0.2%），杂质总量不得大于对照溶液主峰面积（1.0%）。

2.6 色谱条件的建立 盐酸奥洛他定原料药的有关物质测定方法已有报道［4-6］。USP40［7］中收载了本品原料药的有关物质方法，并控制了杂质B、杂质C、杂质E、杂质甲醛衍生物。但该法需分别在两种色谱系统下测定，操作繁琐。本研究建立了同时测定上述4种已知杂质的有关物质方法，4种已知杂质均能基线分离并准确定量。强制降解实验研究进一步说明，4种杂质均为降解产物，因此建议增订入制剂的质量标准中进行定量控制。系统适用性溶液图谱见图1。

2.7 方法学验证

2.7.1 专属性实验 强制降解试验：（1）酸破坏试验：称取盐酸奥洛他定约5 mg，并置于25 mL 量瓶中，加 1 mL 的盐酸溶液（0.01 mol/L），室温放置0.5 h，加碱液中和处理，即得。（2）碱破坏试验：取盐酸奥洛他定约5 mg，并置于25 mL 量瓶中，加1 mL的氢氧化钠（0.01 mol/L），室温放置0.5 h，加酸液中和处理，即得。（3）氧化破坏试验：取盐酸奥洛他定约5 mg，并置于25 mL 量瓶中，加1 mL 0.5%过氧化氢溶液，室温放置2 h，即得。（4）光照试验：取本品裸片，置于4 500±500 lx 照度下放置5、10 d，照供试品溶液制备方法，即得。（5）高温破坏试验：取本品裸片，置于70 ℃空气浴中分别放置5、10 d，精密称取本品细粉（相当于本品5 mg）照供试品溶液制备方法，即得。（6）高湿试验：取本品制剂，置于温度25 ℃，相对湿度90%，分别放置5、10 d，照供试品溶液制备下方法。分别取上述溶液各50 mL，进样分析。强制降解结果表明：在氧化条件下，杂质C与相邻杂质分离度为1.2。在其他降解条件下，分离度均大于1.5，二极管阵列检测器结果显示各已知杂质纯度角小于纯度阈值，说明峰纯度良好，并且各杂质不干扰主峰的测定。上述研究结果说明专属性良好。

2.7.2 线性关系考察 精密称取盐酸奥洛他定对照品10.20 mg，置于25 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，得线性关系溶液。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归。结果表明：在0.254～254.2µg/L 的浓度范围内，浓度与峰面积的呈良好的线性关系。线性方程：Y＝2.32×105X+6 462，r＝0.999 7。

2.7.3 定量限 取线性关系项下的对照品贮备溶液逐级稀释，直至约为信噪比的10 倍，作为定量限浓度。测得定量限浓度为0.127µg/mL。

2.7.4 精密度实验 取对照溶液连续进样6 针，测得峰面积的RSD 值，结果RSD%小于0.8%，说明本法精密度良好。

2.7.5 稳定性实验 将本品供试品溶液，室温放置2、4、6、8、12、24 h后依法测定，供试品溶液四个已知杂质峰面积RSD 小于5.0%，主峰峰面积RSD 小于1.0%，也未发现其他新杂质。说明本品24 h内稳定。

2.7.6 测定结果 采用本研究实验条件，对原研制剂及国产制剂有关物质进行检测，进行杂质种类和数量的对比研究。结果见表1。结果表明，国产片剂与原研制剂的杂质水平基本一致，但国产胶囊剂杂质水平高于原研制剂。

表1 原研制剂及国产制剂有关物质测定结果/%

3 有效性、质量可控性评价

经文献调研本品为BCS1 类或BCS3 类的药物。在溶出度研究中，盐酸奥洛他定片以水为介质，在桨法50 转的条件下迅速崩解，基本在5 min 内可释放85%以上，属于非常快速溶出。胶囊剂在小杯法中的释放稍慢，但在15 min内也可达到80%的溶出量。依据相关指导原则［8-9］，本品为速释制剂，溶出不为本药物吸收的“限速步骤”。因此，本研究将溶出度检查项视为中低风险因素，未纳入质量评价指标。但是为更好反应制剂厂家工艺水平，我们开展国产制剂的批间溶出度考察，并与原研制剂溶出曲线的对比研究，结果显示国产片剂与原研制剂溶出曲线基本一致，批间溶出度差异较小。质量标准方面，仿制药质量标准均存在一定缺陷。如有关物质检查中未控制特定杂质、检测波长设定不合理等。其中胶囊剂中的溶出度检查法为小杯法，为我国药典特有，且该法易受漏槽条件等因素影响。随着我国加入ICH 及国际化的不断深入，该检查法应逐渐替代。因此本研究进一步开展了小杯法与桨法的对比研究，发现桨法同样适合本品溶出度检查，因此建议更改为桨法。

4 讨论

4.1 杂质谱的分析 为更好阐述杂质的来源，我们开展了杂质的来源和降解途径研究，结果见表2。研究表明，盐酸奥洛他定具有比较好的化学性质稳定性。相对来说，光照条件对本品的降解影响最大，且以杂质E 的增加最大。光照同时还可产生杂质B、杂质甲醛衍生物以及未知杂质，提示本品的生产、检测、贮藏、运输等环节应注意光照的影响。强制降解试验（氧化、酸、碱破坏）研究表明，本品在氧化条件下产生杂质C，提示本品的贮存条件应注意氧化。研究还发现杂质C 性质不稳定，容易发生二次降解。

表2 杂质的结构、来源、降解途径分析

对原料药的检测发现了杂质E。进一步从工艺的角度判断，该杂质也可在工艺中产生，即是工艺杂质也是降解产物，研究表明本品原料药的标准也应注重该杂质的控制。

4.2 色谱条件的确定 在确定特定杂质后，建立方法时参考并重现了现行法定标准：国产片剂质量标准（标准号YBH04732014）；原研片剂质量标准（标准号JX20160058）；胶囊剂质量标准（标准号YBH2382005）；滴眼剂质量标准（标准号YBH06602008）；原研滴眼剂质量标准（标准号JX20130147）；USP40；JP17。通过对上述标准的重现，原研片剂质量标准能够较好分离几种杂质。但方法需加入内标物，未采用校正因子定量。本研究对方法进行了优化并采用加校正因子的定量方式。考察了C8和C18色谱柱对分离的影响，结果C8柱的保留时间较长，使得杂质C与主峰有更好的分离度。离子对试剂影响方法的选择性，对分离效果有重大影响。研究考察了离子对试剂的种类和浓度，考察了庚烷磺酸钠和十二烷基硫酸钠对分离度的影响。结果表明十二烷基硫酸钠的分离效果更好。又进一步比较了十二烷基硫酸钠的生产厂家，发现进口试剂的分离效果优于国产制剂，增加十二烷基硫酸钠浓度至0.5%时，特定杂质均实现了基线分离。为确定方法的检测波长，我们测定了4 种特定杂质的最大吸收波长。分别为杂质B 300 nm，杂质C 271 nm，杂质E 299 nm，杂质甲醛衍生物296 nm，因此最终确定为299 nm。在该波长下，能够兼顾各杂质灵敏度的要求。在限度的确定上，本研究参考USP40现行标准，符合FDA 相关指导原则［10-11］及ICH［12-13］，并结合法定检验数据结果。综上，拟定限度能够反应本品质量，保证本品安全性。

4.3 耐用性考察 采用Hypersil gold C8（4.6 mm×150 mm）色谱柱考察了系统适用性溶液，各杂质峰位未发生改变，但是分离效果不如250 mm 色谱柱。结果说明本法应使用250 mm 色谱柱。进一步考察了柱温对分离的影响。当升高柱温至45 ℃，保留时间有所缩短，但对分离度无明显影响，为延长色谱柱寿命不采用高柱温。

5 结论

本研究建立了盐酸奥洛他定口服制剂的有关物质高效液相色谱方法。本法优势为在同一条件下测定4 种已知杂质，具有方便、快速的特点。方法学验证结果表明本法符合我国药典技术要求［14］。通过强制降解及影响因素试验，4 种杂质均为制剂的降解产物，因此建议在制剂标准中控制。通过与原研制剂进行杂质对比研究，结果表明国产片剂杂质种类和数量均不大于原研制剂，且未发现超过报告阈值的未知杂质。因此，国产片剂杂质谱与原研制剂一致。国产胶囊剂杂质水平高于原研制剂，说明应提高国产胶囊剂产品质量。通过开展有关物质的对比研究，能够客观揭示国产制剂的安全性。在有效性和质量可控性研究中，基于风险控制的理念，建议提升和统一有关物质的检查法，并将胶囊剂中溶出度检查法由小杯法改为桨法。

综上，本研究表明：从杂质谱等方面考察，国产盐酸奥洛他定片质量为“好”，国产盐酸奥洛他定胶囊质量为“一般”。本研究结果及其他相关文献表明［15］，现行胶囊剂质量标准应进行必要提升。