猪血液样品的采集技术浅谈

2020-11-20曹立辉朱维高石金朴戎英魁张晓云李彩虹

中国动物保健 2020年8期

曹立辉，朱维高，石金朴，戎英魁，张晓云，李彩虹

（1.正定县动物疫病预防控制中心石家庄 050800；2.正定县动物卫生监督所石家庄 050800；3.正定县农业农村局石家庄 050800；4.河北征宇制药有限公司石家庄 051430；5.河北省动物专用免疫增强剂技术创新中心石家庄 051430）

养猪业在农业生产中占有重要的地位，目前规模养殖场数量在养猪业中的权重越来越大，养猪业的发展不仅使养殖户经济收入增加，对人民生活的改善起到了很大作用。然而猪的疫病仍然是养猪业所面临的重大挑战，旧的传染病、寄生虫病仍然在发生流行的同时，还不断有新的疫病产生和流行。为了科学有效防控猪的疫病和了解掌握疫苗抗体滴度变化，通过对动物血液样本的采集对其进行检测是重要的方法。采血技术高低、采血时机、样品制作、无菌操作等直接或间接决定了检测结果的真实性、可靠性。血液样品检测不仅为下次免疫时间提供了科学依据，而且还能为病原学的检测确诊疫病提供依据。因此，需要求工作人员熟练掌握采样工作程序和采样操作技术。

1 采集猪血液样品的目的

根据检测疫病的目的不同，所需检测血液样本的种类也不同，常分为全血、血浆、血清三种。采集猪的血液，凝固后分离血清，可以用于猪瘟、蓝耳、圆环、伪狂犬、口蹄疫等疫苗项目免疫后的抗体检测。或者使用加入抗凝剂的采血管，使之成为抗凝血，用于一些猪发病后病毒性疫病、细菌病、原虫等抗原检测。血浆可以对非洲猪瘟进行检测。

2 采血方法

猪的前腔静脉位置在两侧第一肋骨与胸骨结合处的前方凹陷处（胸前窝最低处），中大猪可选择最低凹陷处进针采血，猪只越小，前腔静脉越细，采血部位应稍微靠近胸前。

猪的采血方法通常有三种，分别是前腔静脉采血、猪耳缘静脉采血、猪尾根动脉采血。大中猪或者仔猪通常采用前腔静脉采血，成年猪也可采用耳缘静脉采血，而猪的尾根动脉采血在临床上较少应用。

任何采血方法的过程中保持无菌操作，避免血液样品污染，否则影响猪的疫病和抗体检测结果，造成误判误诊，免疫抗体检测不准确不利于数据的分析，影响下次免疫时间的确定。

3 采血所需器械

3.1 采血管

根据采血检测的目的不同，来决定使用什么样的采血器材，可选用5mL、10mL 规格的一次性注射器或采血器（用于免疫、生化类检测），需要抗凝血的可以使用加有EDTA-K2 的真空管（用于血常规、病原检测），不加任何试剂的普通真空采血管和加有促凝剂的真空采血管（用于免疫、生化类）检测。

3.2 采血针头的选择

由于猪的大小不同，前腔静脉的深浅不同，根据猪只的大小选择合适长短的针头。针头太短，达不到前腔静脉，如果针头太长，可能刺破前腔静脉，都会采不到血液。成年大猪：选用配有16×50mm 针头兽用一次性采血器；30kg 以上的中大猪，选用配有12×38mm 针头兽用一次性采血器；10～30kg 小猪，可选用配有9×25mm 针头兽用一次性采血器；10kg 以下乳猪，应选择配有9×20mm 针头（2.5～5mL 一次性采血器所配的一种规格的针头）。

耳缘静脉采血：通常选用一次性使用静脉血样采集针（俗称头皮针）和真空采血管。

3.3 其他器械

猪的金属保定器、75%酒精棉球、3%碘酒、记号笔、保温箱、冰袋（冰冻矿泉水）等。

3.4 人员防护用品

一次性防护服、雨鞋、手套，口罩、护目镜等。

4 猪血液样品的采集

4.1 成年猪的采血

4.1.1 保定猪的保定是采血成功的关键，保定方法有很多种，成年大猪通常采用站立式的保定方法，助手在大猪正前方用猪保定器将猪上颌吊起，向前方上方用力，把猪保定器牢牢固定在猪的栅栏上以免滑脱，以猪前肢刚刚着地为标准，使猪的头颈与水平面呈30～45°为佳，并充分暴露两侧胸前窝（图1）。

图1 中猪的保定

4.1.2 采血保定完成后先用碘酊由里向外对右胸前窝进针部位进行消毒，再用70%酒精棉球消毒，采血人员右手持一次性采血器（选用16×50mm 针头），另一只手把右腿向外挪动，采血器针头朝右侧胸前窝最低且垂直凹底部方向进针（图2），一边进针一边稍用力回抽注射器，采血人员觉有负压感，直到前腔静脉血液流入注射器，则标志已刺入血管，然后轻轻抽动注射器内芯，一般采集5mL 血液即可。取出注射器，按压止血，用碘酒消毒后，去掉猪保定器，解除保定。

图2 中猪的采血部位

4.2 中大猪的采血

4.2.1 保定中大猪采血可采用站立式保定，方法同大猪保定方法相同。也可采用仰卧式保定，但是需要多人保定，费力费时，不易采用。

4.2.2 采血消毒和采血方法同大猪相同，采血人员使用一次性采血器（选择12×38mm 针头）。

4.3 仔猪和小猪的采血

4.3.1 保定一般仔猪（30kg 以下）采取仰卧保定方式。其中一助手尽量抓握两后肢向后牵引，另一助手下压下颌骨使头部贴地，做到两前肢与体中线基本垂直。此时，两侧第一对肋骨与胸骨结合处的前侧方会出现两个明显的凹陷窝。

4.3.2 采血保定完成后先用碘酊有里向外对右胸前窝进针部位进行消毒，70%酒精棉球消毒进针部位，采血人员手持装有正确针头（9 号针头）的一次性注射器（10～30kg 小猪，通常选用针头9×25mm，进针2～2.5cm；10kg 以下乳猪，通常选用针头9×20mm，进针1～2cm），向一侧凹陷窝（首选右侧）处，微偏向中央及胸腔方向，有回血即可采血，通常2～3mL 即可。采血完毕，迅速拔出采血针管，另一手拿干棉球紧压针孔处，防止出血，等不出血后应涂擦碘酒消毒。

4.4 猪耳缘静脉采血（适用于大猪）

4.4.1 保定大猪通常采用站立式保定，饲养员用保定绳在大猪正前方将其上颌吊起，向前方用力，以猪前肢刚刚着地不能踏地为准，要求尽可能吊得高一点，使猪的头颈与水平面呈30～40°为宜。

图3 小猪的仰卧采血

4.4.2 采血助手用手指捏压耳根部静脉血管，用酒精棉球擦拭耳静脉局部，使静脉充盈、怒张。采血者用左手的食指和中指从耳根下将耳托起，拇指把注射点皮肤展平，右手持采血针（针头与血管呈30～45°）刺入，当针尖刺入血管，将采血针放平，根据血管走向深入，当看到回血后，将采血针另一端插入真空采血管，采集3～5mL 血液。采集完毕后迅速拔出采血针，用干棉球按压止血，并用碘酊消毒采血部位。

5 前腔静脉采血技术要点

5.1 针头选择

根据猪的大小选用不同型号的针头。

5.2 做好保定

根据猪体大小，采用不同保定方式。猪保定后应相对稳定，不能骚动、后缩及左右摇摆。

5.3 进针部位

选择准确的进针部位，由于左侧靠近膈神经，故多在右侧进行采血。

6 血液样本的处理、保存及运输

6.1 血液样本的处理

6.1.1 血浆的制备在采血器内加入适量的抗凝剂，采血后，反复颠倒采血器，使抗凝剂与血液充分混匀，静置或经过离心使血细胞下沉后，上清液即为血浆。

6.1.2 血清的制备首先将采集的血液样本置室温或4℃半小时。待血液凝固后2000～3000 转/min 离心5～10min，上清液即为血清。收集血清，贴上标签备用。

6.2 血液样本的保存与运输

将所采集的血液样本对应的猪耳号用标签纸/胶布条标注于相应的采血管上，吸入部分空气，旋紧顶端针帽，底端活塞处用医用胶布将两端固定，约呈45°室温或4℃斜放静置半个小时，使血清析出。填写送检样本登记表。将装有血清样本的注射器装入原包装袋中，将注射器和送检样本信息表一同装入密封袋中，再将血清样本倾斜放入带有冰袋的样本箱中，用胶带密封样本箱，准备送检。