中肋骨条藻规模化培养及在中国明对虾育苗中的应用

文/侯仕营 董济军 刘朋 刘振华 李锡勇 王磊

本文将养殖生产中发现的中肋骨条藻分离、保存，并进行室内水泥池规模化培养，指数生长状态可维持72h，实现了短期内大量繁殖。中国明对虾幼体投喂实验表明，利用4万个cell/mL中肋骨条藻投喂组与未投喂组比较，Z3～M1变态发育所需时间缩短24h，Z1～Z3期变态发育成活率分别为93.3%、68%，差异显著。利用中肋骨条藻所育中国明对虾苗活力强，变态期成活率高，育苗周期短，具有良好的经济效益。

中肋骨条藻隶属硅藻门、中心硅藻纲、圆筛藻目、骨条藻科、骨条藻属，属于温带、热带海洋硅藻类，从北极到赤道、从外海高盐度到沿海低盐度水团均有分布。中肋骨条藻富含海产动物幼体生长发育所需的高度不饱和脂肪酸、必需氨基酸等营养物质，是中国明对虾、日本囊对虾、梭子蟹等虾蟹类育苗初期的优质生物饵料，因其繁殖速度快，易于收获，被广泛应用。自然环境中筛选的中肋骨条藻，具备较强的环境适应能力，经过实验室纯化后，在饵料车间规模化培养操作简单，生长繁殖速度快，不易污染，可在短时间内培养大量藻株，能够满足水产动物规模化育苗生产需要。

中国明对虾工厂化育苗，密度高、产量高、效益好，可有效防控疾病，提高育苗成活率，降低养殖成本。同时，工厂化育苗对饵料、水质要求较高，提供适口、足量、营养丰富的饵料已成为中国明对虾工厂化育苗成功的关键因素。

一、藻种来源

2018年4月，乳山市瑞力水产品养殖场室外南美白对虾养殖池，水温14℃，盐度22，pH值8.3，目测池塘水色为浅褐色，镜检发现中肋骨条藻密度较高。取样后，在山东省海洋经济藻类资源开发与利用工程技术协同创新中心采用微吸管分离法多次分离培养，得到中肋骨条藻藻株，置于F/2＋Si培养液中，温度为20℃，盐度25，光照强度3000lx～6000lx，日光暗比12L:12D，进行不充气扩大培养，扩大培养的藻种保存于藻种库。

二、培养池及设施设备

（一）二级培养池

培养车间顶部为透明波纹玻璃钢瓦，培养池为玻璃钢育苗池，编号为1号～4号，池规格为2m×2m×0.8m。

（二）三级培养池

培养车间长度为30m，顶部为透明塑料大棚，设有遮阳网，可根据需要调节光照强度。培养池为东西走向水泥池，池号为5号～17号，池规格为2m×8m×0.8m。

（三）其他设备

涡旋增氧机、沉淀池、砂滤罐、消毒配水池、海水锅炉、水泵、pH计、分光光度计、显微镜等。

三、中肋骨条藻的培养

（一）培养用水处理

自然海区海水沉淀，二次砂滤，用300目筛绢网过滤，注入消毒配水池备用。

（二）培养池准备

培养池内加入5cm海水，用漂白粉（有效氯含量为30%）80mg/L～100mg/L清洗，并保存消毒10h以上。注入90cm经沉淀过滤的海水，漂白液（有效氯30%）15mg/L消毒，用淀粉碘化钾检查余氯，并加入Na2S2O3消除余氯，加入用消毒海水配制的F/2＋Si培养液。

（三）接种

在光线达到5000lx以上时，上午8:00～10:00，用消毒的抽水泵将指数生长期的中肋骨条藻藻液接种到相应的培养池，培养池水位控制在1m左右，二级、三级培养接种比例为1:20～1:30。

（四）日常管理

1.充气

利用涡旋增氧机持续充气，增氧机功率为2.2kW·h，充气至微沸腾，延长中肋骨条藻指数生长期，避免藻体下沉进入衰竭期，防止藻液表面产生菌膜。

2.控光

光照度在1000lx～15000lx时中肋骨条藻均可正常繁殖生长，为配合养殖生产顺利开展，在光照度高时要利用遮阳网调节，从而控制中肋骨条藻繁殖生长速度。

3.控温

采用保温、加热、通风、热交换器等措施，调节中肋骨条藻培养温度，使温度保持在20℃～24℃。

4.调pH

培养池pH控制在7.5～8.5，镜检发现中肋骨条藻细胞数达到200万个cell/mL以上时，加大充气量降低pH，当pH值高达9.0以上时，可通过添加30mg/L的醋酸调节，延长指数生长期。

5.追加营养盐

追加营养盐的主要品种有（NH4）2SO4、K2H2PO4、Na2SiO4、柠檬酸铁等，比例为N:P:Fe:Si＝10:1:0.1:1，生产过程中根据培养池内藻体浓度和水体无机盐剩余量情况添加。

6.中肋骨条藻生长结果

规模化培养中肋骨条藻生长状况如图1所示，指数生长期可以维持72h，生长速度快，能够满足中国明对虾规模化育苗生产需要。

（五）收获

中肋骨条藻繁殖速度快，数小时内可出现明显的水色变化，藻体老化，镜检可见细胞中空等现象，应在藻体生长旺盛期培养水呈现浓褐色开始收获投喂使用。生长状况良好的中肋骨条藻每隔24h收获1/2，补充过滤海水至浅褐色，加入营养盐进行连续培养。

四、中肋骨条藻在中国明对虾育苗中的应用

（一）无节幼体期接种

中国明对虾无节幼体发育到II期时接入中肋骨条藻，浓度为3万～4万个cell/mL，接种时间一般在上午8:00～10:00。

表1 Z1～Z3期变态发育的成活率

（二）溞状幼体期投喂

中肋骨条藻作为中国明对虾育苗饵料，可单独投喂，也可与其他藻类、蛋黄、豆浆、配合饲料等搭配投喂。中国明对虾溞状幼体期每天投喂中肋骨条藻量为4万个cell/mL，Z1期仅投喂中肋骨条藻，Z2期辅助投喂虾片0.4g/万尾，Z3期每尾虾辅助投喂1个～2个卤虫无节幼体或10个～20个轮虫，分8次投喂。

在育苗池边用12个50L的塑料桶同步开展育苗试验，育苗桶内充气、光照、温度、水质等条件与育苗池保持一致，每个桶加育苗用水45L，每桶投入健康的中国对虾Z1期幼体5000尾。1号～3号桶为一组平行试验，投喂饵料与育苗池保持一致；4号～6号桶为一组平行试验，投喂中肋骨条藻2万个cell/mL，其余条件与育苗池保持一致；7号～9号桶为一组平行试验，投喂中肋骨条藻1万个cell/mL，其余条件与育苗池保持一致；10号～12号桶为一组平行试验，Z1期、Z2期投喂虾片0.5g/万尾，Z3期每尾虾投喂15个～20个轮虫。

（三）幼体生长状况

1.幼体变态发育所需时间

Z1～Z3变态发育所需时间，接入中肋骨条藻的1号～9号桶和未接入的10号～12号桶，Z1～Z3期变态发育所需时间均为4天，无显著差异。Z3～M1变态发育所需时间，1号～6号桶平均2天，7号～9号桶平均2.5天，10号～12号桶平均3天，差异显著。

2.幼体成活率

Z1～Z3期变态发育的成活率如表1所示。1号～3号桶平均成活率为93.3%，4号～6号桶平均成活率为90.9%，7号～9号桶平均成活率为79.9%，未投喂中肋骨条藻的10号～12号桶平均成活率68%。投喂中肋骨条藻量为4万个cell/mL的1号～3号桶与未投喂中肋骨条藻的10号～12号桶，平均成活率差异显著。

五、讨论

（一）中肋骨条藻培养

中肋骨条藻规模化的培养受到培养液配方、藻种纯化程度、接种密度、培养池水搅动、光照、温度、pH、营养盐等多种因素的影响，要确保规模化培育的成功需要注意以下几点：藻种纯化度要接近100%，才能确保之后培养的纯度，提高成功率；接种密度不能过低，确保中肋骨条藻种类的优势生长；光照强度在理化因子中尤为重要，光照强度过低会影响中肋骨条藻的生长，光照强度过高会使藻体短时间内繁殖过剩，导致快速老化，需要配套遮阳网等遮光设备调节光照度；每天定时镜检藻体生长状况，根据生长状况调整管理措施；加强消毒工作，避免交叉生物污染。

（二）中肋骨条藻在中国明对虾育苗中的应用

中国明对虾无节幼体II期接入中肋骨条藻，能够降低水体透明度、调节水质，避免幼体出现应激反应。中肋骨条藻富含对虾幼体发育所需的高不饱和脂肪酸，使对虾苗种从Z3～M1变态发育所需的时间显著缩短，说明中肋骨条藻是中国明对虾的优质饵料，能够缩短幼体发育时间。

1号～3号桶与10号～12号桶相对比，对虾苗种Z1～Z3期变态发育期的平均成活率差异显著，中肋骨条藻能够明显提高中国明对虾溞状幼体成活率。究其原因，中肋骨条藻是参与构建生物絮团的重要组分，在育苗过程中合理应用，不但为中国明对虾提供了优质营养元素，也起到净化水质、抑制有害菌繁殖等重要作用，能够有效减少疾病发生，提高养殖生物成活率。