不同产地锁阳水溶性部位HPLC指纹图谱及含量测定研究

2020-11-19顾志荣孙岚萍钱倩吴国泰石磊许爱霞葛斌

中国中医药信息杂志 2020年11期

顾志荣，孙岚萍，钱倩，吴国泰，石磊，许爱霞，葛斌

顾志荣1，孙岚萍2，钱倩1，吴国泰3，石磊1，许爱霞1，葛斌1

1.甘肃省人民医院，甘肃兰州 730000；2.甘肃中医药大学，甘肃兰州 730000；3.甘肃省中药药理与毒理学重点实验室，甘肃兰州 730000

建立12个产地锁阳水溶性部位的HPLC指纹图谱、3种成分同时测定及主成分分析（PCA）评价方法。采集5个省（区）12个市（区/州/旗）的95批锁阳，提取水溶性部位。采用WondaSil C18-WR色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），以甲醇-0.1%甲酸水溶液（9∶91）为流动相，流速0.8 mL/min，柱温30 ℃，检测波长258 nm，进样量10 μL，建立HPLC指纹图谱及没食子酸、原儿茶酸、儿茶素含量测定方法。对12个产地锁阳水溶性部位的指纹图谱进行相似度分析，以指纹图谱共有峰峰面积为变量建立PCA模型，进行质量评价与产区鉴别，采用载荷分析寻找不同产区样品共有峰差异。12个产地锁阳水溶性部位HPLC指纹图谱的主要色谱峰一致，共指认出16个共有峰，除阿拉善左旗、阿拉善右旗、和田样品外，其余产地样品指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9。没食子酸、原儿茶酸、儿茶素分别在0.022～0.330、0.002～0.030、0.080～1.200 μg范围内线性关系良好，相关系数分别为0.999 8、0.999 3、0.999 4，平均加样回收率分别为100.54%、99.82%、99.62%，RSD分别为1.71%、1.95%、2.07%。锁阳水溶性部位没食子酸、原儿茶酸、儿茶素含量分别为0.031 3～7.031 6、0.025 5～0.396 3、0.003 5～0.793 4 mg/g。PCA可将锁阳样品按12个市级产区、5个省级产区进行质量评价与归类分析，载荷分析筛选出导致不同产地锁阳水溶性部位整体质量差异的5个化学成分。本研究建立的分析方法稳定、准确、可靠，可用于不同产地锁阳的综合质量评价及产区鉴别。

锁阳；水溶性部位；高效液相色谱法；指纹图谱；同时测定；主成分分析

锁阳为锁阳科植物锁阳Rupr.的干燥肉质茎，是一种寄生于蒺藜科白刺属植物根部的沙生药材，功效补肾阳、益精血、润肠通便[1]。锁阳含有黄酮类、三萜类、多酚类、有机酸类、多糖类、鞣质及多种人体必需氨基酸[2]，具有抗氧化[3]、抗衰老[4]、抑制前列腺增生[5]、抑制骨吸收[6]、保护神经损伤[7]、增强性功能[8]、抗骨质疏松[9]等药理作用。近年来，锁阳的功能保健食品发展亦备受关注，如锁阳油饼、锁阳茶、锁阳酒、锁阳咖啡等。锁阳主要分布于内蒙古、新疆、甘肃、青海、宁夏等地区的沙漠和半沙漠地带，产地分布辽阔、东西跨度大，生态因子差异明显[10]。不同的生态因子会影响药用植物的物候规律、生长发育、物质合成、能量代谢等生理作用，从而通过影响次生代谢产物（有效物质）而导致药材质量及临床疗效产生差异[11]。

迄今，锁阳均为野生品，但其生长环境恶劣，资源储量小，加之具有突出的补益及功能保健作用，导致市售锁阳存在掺杂、混用、乱用等现象。另外，2015年版《中华人民共和国药典》锁阳仅以醇溶性浸出物为质控成分[1]，无其他有效成分、指标成分或有效部位的含量测定，因此其内在质量评价与质量控制是目前存在的难题之一。本研究基于多产地、大样本建立锁阳水溶性部位的HPLC指纹图谱及3种有效成分的同时测定方法，建立主成分分析（PCA）模型进行综合质量评价与产区鉴别，寻找不同产区锁阳的指纹图谱差异峰，为其物质基础研究与质量控制提供依据。

1 仪器与试药

岛津LC-16型高效液相色谱仪（日本岛津仪器有限公司，配置SIL-16型自动进样器、SPD-16型检测器、CTO-16型柱温箱、LabSolutions化学工作站），AL204型1/1万电子天平（瑞士Mettler-Toledo公司），DZF-6090型真空干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）。

对照品没食子酸（批号CHB171107，含量≥98%）、原儿茶酸（批号CHB170822，含量≥98%）、儿茶素（批号CHB170313，含量≥98%），成都克洛玛生物科技有限公司。甲醇、甲酸为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。95批锁阳样品，采集于甘肃、内蒙古、新疆、青海、宁夏5个省（自治区）的12个市（地区/州/旗），经甘肃中医药大学药学院中药鉴定教研室李硕副教授鉴定为Rupr.的干燥肉质茎，见表1。将样品晒至干透，粉碎，过80目筛，冷藏备用。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用WondaSil C18-WR色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液（9∶91），流速0.8 mL/min，等度洗脱，柱温30 ℃，检测波长258 nm，进样量10 μL。

2.2 混合对照品溶液制备

分别精密称取没食子酸、原儿茶酸、儿茶素对照品适量，以纯化水超声使完全溶解，制成浓度分别为0.11、0.01、0.40 mg/mL的混合对照品溶液，于4 ℃保存备用。

2.3 供试品溶液制备

取样品粉末约2.0 g，精密加入纯化水10 mL，称定质量，超声提取（功率500 W，频率40 kHz）60 min，放冷，再称定质量，补足减失的质量，离心，上清液经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

表1 95批不同产地锁阳样品信息

产地批次编号海拔/m 气候类型甘肃省张掖市肃南县（ZY）8 1～81475～3154温带大陆性气候甘肃省酒泉市瓜州县（JQ）12 9～201063～1590温带大陆性气候甘肃省酒泉市金塔县（JQ）921～291233～1421温带大陆性荒漠气候甘肃省酒泉市敦煌市（DH）730～36 958～1815暖温带干旱性气候甘肃省武威市民勤县（WW）737～431293～1545温带大陆性干旱气候内蒙古阿拉善盟阿拉善左旗（AZ）1044～53 789～1541中温带大陆性气候内蒙古阿拉善盟阿拉善右旗（AY）654～591299～1503温带大陆性气候宁夏石嘴山市平罗县（SZS）560～641103～1247温带大陆性气候新疆喀什地区喀什市疏附县（KS）565～691229～1312暖温带大陆性干旱气候新疆阿勒泰地区阿勒泰市（ALT）970～78 813～1003温带大陆性气候新疆和田地区和田县（HT）879～862875～3436温带极端干旱荒漠气候青海省海南藏族自治州同德县（HN）587～912926～3266高原大陆性气候青海省海西蒙古族藏族自治州格尔木戈壁滩（HX）492～952815～2833荒漠、半荒漠大陆性气候

2.4 方法学考察

2.4.1 空白溶剂考察

取纯化水，按“2.1”项下色谱条件分析，结果表明溶剂无干扰。

2.4.2 精密度试验

取样品（1号）供试液，按“2.1”项下色谱条件，连续进样6次，记录色谱图。以12号峰为参比峰，16个共有峰的相对保留时间RSD为0.02%～2.11%，相对峰面积RSD为0.00%～2.23%，结果表明仪器精密度良好。

2.4.3 重复性试验

取同一样品（1号）6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图。以12号峰为参比峰，16个共有峰的相对保留时间RSD为0.01%～1.97%，相对峰面积RSD为0.02%～2.75%，结果表明该方法重复性良好。

2.4.4 稳定性试验

取样品（1号）供试液，按“2.1”项下色谱条件，分别于0、2、4、8、12、16、20、24 h进样，记录色谱图。以12号峰为参比峰，16个共有峰的相对保留时间RSD为0.00%～2.03%，相对峰面积RSD为0.00%～2.76%，结果表明供试品溶液在24 h内比较稳定。

2.5 指纹图谱建立

利用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012版）建立指纹图谱及对照图谱[12]，见图1、图2。共指认16个共有峰，通过比对紫外吸收图及对照品色谱图，确定了没食子酸（1号峰，＝4.193 min）、原儿茶酸（6号峰，＝7.744 min）、儿茶素（14号峰，＝17.063 min）3个成分。12号峰与相邻峰的分离度好、峰面积较大、较稳定，故作为参比峰，16个共有峰相对保留时间RSD为0.01%～2.27%。

图1 95批锁阳水溶性部位HPLC指纹图谱

注：A.混合对照品；B.供试品；1.没食子酸；6.原儿茶酸；14.儿茶素

2.6 指纹图谱相似度评价

求取12个产地锁阳水溶性部位HPLC指纹图谱的共有模式（见图3），以相关系数为指标进行相似度评价[13]，结果见表2。12个产地样品指纹图谱的主要色谱峰一致，但局部可见细微差别；除阿拉善左旗、阿拉善右旗、和田样品外，其余产地样品与对照图谱的相似度均大于0.9。

从12个产地锁阳指纹图谱相似度可以看出，甘肃4个产区武威、酒泉、敦煌、张掖样品的相似性较高（0.944～0.992），但与阿拉善左旗、喀什、和田样品相似性较低（0.892～0.925）；阿拉善右旗、阿拉善左旗及石嘴山样品的相似性较高（0.929～0.953），但与喀什、阿勒泰、和田、海西、海南样品的相似度较低（0.857～0.913）；新疆的3个产区喀什、和田及阿勒泰样品的相似性较高（0.925～0.954），但与其他产区样品的相似度均较低；青海海西、海南样品与甘肃4个产区的样品相似性较高。

图3 12个产地锁阳水溶性部位HPLC指纹图谱共有模式

表2 12个产地锁阳水溶性部位HPLC指纹图谱相似度评价结果（r）

产地ZYJQDHWWAZAYSZSKSALTHTHNHXR ZY1.000 JQ0.9751.000 DH0.9890.9921.000 WW0.9790.9570.9441.000 AZ0.9230.8950.9120.9251.000 AY0.9100.9060.8920.8970.9531.000 SZS0.9110.8960.9010.9160.9290.9411.000 KS0.8920.9080.8930.9170.9130.9040.8961.000 ALT0.9050.9320.9230.8960.8740.8760.8920.9541.000 HT0.8990.9050.8950.8890.8820.8570.8630.9430.9251.000 HN0.9050.8960.8840.9120.9010.9070.9120.8920.9030.9071.000 HX0.9110.8970.9220.9040.8980.9120.8890.8860.9020.9080.9641.000 R0.9370.9060.9150.9170.8990.8970.9040.9210.9140.8930.9180.9091.000

2.7 没食子酸、原儿茶酸、儿茶素含量测定

2.7.1 系统适用性试验

精密量取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10 μL，分别注入色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果理论塔板数以没食子酸、原儿茶酸、儿茶素计算均大于3000，3种成分的色谱峰与相邻峰之间分离度均大于1.5，对称因子为0.95～1.05，样品中其他成分不干扰待测成分的测定。

2.7.2 线性关系考察

精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，以纯化水定容至刻度，摇匀，得系列对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定。以各对照品浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程，结果见表3。可知，没食子酸、原儿茶酸、儿茶素在各自范围内线性关系良好。

表3 3种成分线性关系考察结果

成分回归方程相关系数线性范围/μg 没食子酸Y＝993 773 573X－20 234.850.999 80.022～0.330 原儿茶酸Y＝1 348 134 048X－54 635.900.999 30.002～0.030 儿茶素Y＝21 261 314.39X－20 584.790.999 40.080～1.200

2.7.3 精密度试验

取同一样品（1号）供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，连续进样6次，记录峰面积，计算得没食子酸、原儿茶酸、儿茶素峰面积RSD分别为0.66%、1.53%、1.07%，表明仪器精密度良好。

2.7.4 稳定性试验

取样品（1号）供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别在0、2、4、8、12、16、20、24 h进样，记录峰面积，计算得没食子酸、原儿茶酸、儿茶素峰面积RSD分别为0.92%、1.19%、0.85%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7.5 重复性试验

取同一样品（1号）6份，以“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，计算得没食子酸、原儿茶酸、儿茶素峰面积的RSD分别为1.95%、2.18%、2.67%，表明该方法重复性良好。

2.7.6 加样回收率试验

取已知含量的样品（1号）约2 g，共9份，精密称定，按低、中、高3个水平，分别以待测成分含量的0.8、1.0、1.2倍精密加入混合对照品适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定并计算回收率。结果没食子酸、原儿茶酸、儿茶素的平均加样回收率分别为100.54%、99.82%、99.62%，RSD分别为1.71%、1.95%、2.07%，表明该方法回收率良好，见表4。

表4 3种成分加样回收率试验结果

成分取样量 /g样品中含量/mg加入量 /mg测得量 /mg回收率 /%平均回收率/%RSD /% 没食子酸2.000 42.834 22.260 35.136 5101.86100.541.71 2.000 82.837 02.260 35.144 3102.08 1.999 52.835 12.260 35.044 1 97.73 2.001 12.838 62.825 45.682 4100.65 2.000 22.833 72.825 45.613 3 98.38 2.000 62.832 12.825 45.653 0 99.84 2.000 92.836 33.390 56.233 2100.19 1.998 72.832 23.390 56.323 1102.96 2.000 82.831 33.390 56.261 1101.16 原儿茶酸2.001 30.473 10.377 20.850 1 99.96 99.821.95 2.000 90.470 50.377 20.844 7 99.21 1.998 30.472 90.377 20.860 1102.64 2.001 20.472 10.471 40.934 4 98.07 2.000 30.470 50.471 40.950 9101.91 2.001 60.471 60.471 40.935 4 98.39 2.001 00.470 40.565 41.021 6 97.48 1.998 60.473 60.565 41.031 0 98.59 2.001 20.473 20.565 41.050 8102.16 儿茶素2.001 20.488 70.391 40.885 1101.28 99.622.07 2.001 70.483 50.391 40.868 6 98.40 1.999 50.484 40.391 40.875 8100.02 2.001 20.484 80.489 30.982 7101.76 2.000 30.483 50.489 30.959 5 97.28 2.000 70.485 80.489 30.958 8 96.67 2.001 30.485 30.587 01.068 6 99.37 2.001 60.486 50.587 01.067 5 98.99 2.000 80.480 10.587 01.083 8102.84

2.8 样品测定

按“2.3”项下方法制备样品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定各样品中没食子酸、原儿茶酸、儿茶素的质量分数，结果见表5。可知，锁阳水溶性部位中没食子酸、原儿茶酸、儿茶素含量分别为0.031 3～7.031 6、0.025 5～0.396 3、0.003 5～0.793 4 mg/g。

2.9 主成分分析

以指纹图谱共有模式的16个共有峰峰面积为变量，采用PCA对12个市级产区的95批锁阳进行分析[14]。结果表明，前2个主成分的累积贡献率为87.385%，能够反映整体变量的主要特征，其中第一主成分贡献率为61.745%。PCA得分图见图4。整体来看，除9批样品离群外，86批锁阳样品在PCA得分图中可被明显区分为11个区域。除青海省海西、海南2个市级产区未能分开外，其他10个市级产区均能被明显区分，而青海省所产锁阳在省级区域亦可与其他产地明显区分开，说明不同省级、市级产区锁阳在化学成分方面具有一定差异性。

从省级产区来看，锁阳在PCA得分图中体现了较为明显的地域性分布特征，甘肃、内蒙古、新疆、青海、宁夏5个省区样品可完全区分开，表明不同省级产区锁阳水溶性部位在化学成分方面的差异性更为明显。除离群样本外，内蒙古产区锁阳位于PCA得分图的第1象限，宁夏产区锁阳位于第2象限，新疆产区锁阳位于第3象限，甘肃、青海产区锁阳位于第4象限。PCA得分＝第一主成分（[1]）×[1]的贡献率＋第二主成分（[2]）×[2]的贡献率，是对共有峰峰面积大小的综合评价，因此是锁阳质量的直接体现。第1象限锁阳样品[1]、[2]均大于0，因此PCA得分最大，均大于0；第2象限样品[1]＜0，[2]＞0，而[1]的贡献率为61.745%，[2]的贡献率为25.639%，因此PCA得分＜0；第3象限样品[1]、[2]均小于0，因此PCA得分最小，均小于0；第4象限样品[1]＞0，[2]＜0，因此PCA得分＞0。综上可知，内蒙古锁阳样品PCA得分最高、质量最佳，其次为甘肃、青海样品，最后为宁夏、新疆样品。

采用载荷分析进一步探讨不产区锁阳的共有峰差异[15]，见图5，变量重要性投影（VIP）见图6。载荷图中距离原点较远的变量分别为共有峰1、6、11、14、16，而VIP＞1的变量依次为14、11、6、16、1，说明共有峰14（儿茶素）、11、6（原儿茶酸）、16、1（没食子酸）是不同产区锁阳水溶性部位的差异共有峰，是对不同产区锁阳整体质量有主要影响的化学成分，可作为锁阳药材的质量标志物。

表5 95批锁阳样品水溶性部位3种成分含量测定结果（n＝3，mg/g）

编号没食子酸原儿茶酸儿茶素编号没食子酸原儿茶酸儿茶素编号没食子酸原儿茶酸儿茶素编号没食子酸原儿茶酸儿茶素 11.416 80.235 00.244 4 250.322 20.058 40.510 0 493.156 00.049 90.513 6 731.201 30.199 80.063 7 21.179 40.048 60.341 0 260.676 40.069 70.793 4 501.694 70.046 90.423 1 740.300 20.068 20.068 6 33.625 60.045 30.254 8 270.442 90.074 50.518 1 512.292 70.044 60.503 1 751.340 70.112 20.095 0 41.676 70.240 90.147 2 280.882 10.124 10.182 5 521.904 60.044 40.397 6 760.677 60.059 90.044 6 50.732 10.119 10.122 2 290.988 30.205 20.151 2 531.879 80.038 60.546 8 770.654 50.362 80.083 5 60.438 80.159 80.198 1 300.957 40.155 40.223 8 540.492 50.068 10.207 2 780.115 60.076 70.088 6 71.135 00.085 70.577 5 310.918 50.087 70.254 7 550.776 90.072 90.234 6 792.034 50.190 10.167 9 80.351 20.077 40.373 2 321.217 40.089 50.303 8 560.705 20.061 80.219 0 800.862 10.188 90.179 4 90.031 30.086 90.225 1 330.601 30.079 70.236 1 570.962 50.074 60.203 0 810.832 50.182 90.172 1 101.327 10.095 60.417 1 341.103 80.289 10.379 9 580.600 20.080 40.182 8 820.918 00.193 00.193 7 110.394 30.122 10.293 8 351.608 50.396 30.444 8 590.962 40.071 40.181 6 834.430 70.111 00.140 4 120.628 40.351 70.281 4 361.251 20.122 90.420 3 600.376 80.176 80.021 0 843.925 20.112 50.126 7 132.863 80.116 40.157 9 370.121 10.240 90.052 6 610.387 70.190 10.025 9 857.031 60.111 70.086 5 140.776 30.294 60.186 4 380.589 00.082 70.337 4 620.151 40.065 60.043 4 861.150 80.186 20.204 3 150.378 80.179 30.134 3 390.639 70.072 20.500 1 630.599 80.101 20.188 4 870.592 00.086 00.234 0 160.389 00.131 50.200 8 400.483 90.089 60.428 7 640.410 30.185 10.052 8 880.563 80.078 70.222 5 170.674 50.081 90.168 0 410.196 20.074 20.474 8 651.571 50.340 60.103 6 890.550 00.075 90.217 4 180.469 00.093 10.040 8 421.085 10.076 00.444 8 660.730 30.326 90.056 3 900.588 10.080 00.227 4 190.611 00.272 40.298 0 431.208 00.069 50.629 4 670.514 90.231 30.059 7 910.273 10.062 70.102 5 200.167 50.256 80.038 0 442.152 90.058 60.388 2 680.459 30.190 40.054 1 920.314 50.100 30.003 5 210.722 40.206 80.327 5 455.032 60.077 50.434 0 690.473 70.192 10.066 6 930.140 40.054 10.030 2 222.680 40.057 60.310 4 462.043 50.077 20.515 6 701.315 60.149 80.155 7 941.209 00.025 50.228 7 230.819 80.111 70.351 4 470.621 40.077 70.343 6 710.788 40.143 80.028 1 950.234 60.033 40.046 8 241.143 50.102 00.136 6 480.737 70.086 20.309 1 720.568 40.130 20.077 0

图4 12个市级产区锁阳样品PCA得分图

图5 锁阳水溶性部位HPLC指纹图谱共有峰主成分载荷图

图6 锁阳水溶性部位HPLC指纹图谱共有峰VIP分析

3 讨论

本试验对提取溶剂（不同浓度甲醇、不同浓度乙醇及水）、提取方法（不同条件超声及热回流法）、流动相（乙腈-水、乙腈-甲酸水、甲醇-水及甲醇-甲酸水）及其初始比例、等度洗脱与梯度洗脱、检测波长及柱温等进行考察，优选出了最佳条件。其中，以水超声提取所得水溶性部位的色谱图基线平、出峰多、分离效果好，因此对锁阳成分采取水部位研究是较好的选择。对比等度洗脱与梯度洗脱发现，采用梯度洗脱出峰虽比等度洗脱多，但当有机相比例为25%～75%时基线漂移严重，峰形及分离度均不如等度洗脱，且儿茶素难以达到基线分离，因此最终选择等度洗脱进行色谱分离。

除小部分样品归类错误及离群外，PCA能将锁阳药材按照5个省级产区、12个市级产区进行归类，表明PCA适用于锁阳药材的产地鉴别。由PCA得分图可知，地理位置相邻或相近的产区锁阳样品被聚类在一起，且与地理位置相距较远的产区样品较好地分离，表明不同市级、省级产区锁阳在化学成分方面具有差异性。不同市级产区锁阳可通过PCA归属于其所在省级产区中，表明锁阳的内在质量体现了明显的地域性聚集特征。这是由于地理位置互相靠近的产区具有更为相近的环境因子，进一步印证了产地环境因子是锁阳药材品质及道地性形成的主导因素。

载荷分析发现，共有峰14（儿茶素）、11、6（原儿茶酸）、16、1（没食子酸）是不同产地锁阳样品的差异共有峰，是对不同产地锁阳整体质量产生主要影响的化学成分。因此，本研究选择儿茶素、原儿茶酸、没食子酸作为锁阳药材的质量控制指标具有一定合理性，对高效控制锁阳药材质量具有一定指导意义。本试验采集样品涉及产地多、分布区域广、样本量大，增强了研究的代表性与说服力，有利于更全面掌握锁阳药材的资源分布，进行更为科学的综合质量评价。

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Study on HPLC Fingerprints and Content Determination of Water Fraction of Cynomorii Herba from Different Producing Areas

GU Zhirong1, SUN Lanping2, QIAN Qian1, WU Guotai3, SHI Lei1, XU Aixia1, GE Bin1

To establish HPLC fingerprints and simultaneous determination of 3 components and quality evaluation methodsof water fraction of Cynomorii Herba from 12 producing areas based on principal component analysis (PCA).Totally 95 batches of Cynomorii Herba from 12 cities in 5 provinces were collected and water fractions were extracted. HPLC fingerprints and simultaneous determination method of gallic acid, protocatechuic acid and catechin were achieved on WondaSil C18-WR column (4.6 mm × 150 mm, 5 μm), with methanol-0.1% formic acid solution (9:91) as mobile phase for gradient elution. The flow rate was 0.8 mL/min; column temperature was 30 ℃; detection wavelength was 258 nm; injection volume was 10 μL. Fingerprints of water fraction of Cynomorii Herba from 12 producing areas were analyzed for similarity. Taking common peak areas of fingerprints as variables, PCA models were established for quality evaluation and identification of different producing areas. Loading analysis was used to find differences in common peaks of samples from different producing areas.The main peaks of HPLC fingerprints of water fraction of Cynomorii Herba from 12 producing areas were consistent, and 16 common peaks were identified. Except for Alxa Left Banner, Alxa Right Banner and Hetian City, the fingerprint similarities of samples between other producing areas and control fingerprint were greater than 0.9. The gallic acid, protocatechuic acid and catechin showed good linearity relationships within the ranges of 0.022–0.330, 0.002–0.030, and 0.080–1.200 μg; their correlation coefficients were 0.999 8, 0.999 3 and 0.999 4; their average recoveries were 100.54%, 99.82% and 99.62%, with RSD of 1.71%, 1.95% and 2.07%, respectively. The contents of gallic acid, protocatechuic acid and catechin of water fraction of Cynomorii Herba were 0.031 3–7.031 6, 0.025 5–0.396 3, and 0.003 5–0.793 4 mg/g, respectively. The established PCA model could realize quality evaluation and classification of Cynomorii Herba in accordance with 12 city producing areas and 5 provincial producing areas. The loading analysis screened out 5 chemical components that caused differences in the overall quality of Cynomorii Herba from different producing areas.The established analytical method is stable, accurate and reliable, which can be used for comprehensive quality evaluation and identification of producing areas of Cynomorii Herba in different producing areas.

Cynomorii Herba; water fraction; HPLC; fingerprints; simultaneous determination; principal component analysis