壮药青风藤总生物碱对类风湿关节炎模型大鼠PDGF、PAF表达的影响

曹知勇 张青槐 庞宇舟

广西壮瑶药工程技术研究中心/广西中医药大学，广西 南宁 530200

类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一种类风湿因子侵犯滑膜、关节的慢性免疫性疾病，最明显的病理反应是对机体关节和骨质的破坏。同时，它也能引起全身性的并发症，如肺炎、泌尿系感染、口腔溃疡等。然而由于对于类风湿关节炎的病机病因认识并不彻底，导致类风湿关节炎的治疗，差异性较大。目前行之有效的治疗RA的药物分为4大类:NSAIDs、DMARDs、糖皮质激素及植物药制剂[1]，可是都易形成耐药性。类风湿关节炎的发病过程常常伴随着血细胞的变化，尤其以血小板的活化最为相关。血小板生长因子(PDGF)和血小板活化因子(PAF)作为血小板活化后的产物，是RA过程中血小板活化的标准性指标[2]。青风藤是防己科植物青藤(Sinomeniumacuturn)及毛青藤(Sinameniumacutum)的干燥藤茎，是壮药龙钻通痹方的主要组成药物，能通“龙路”“火路”，临床上多用于治疗类风湿关节炎，且疗效显著。青藤碱是壮药青风藤的主要化合物，具有抗炎、抑制移植物排斥、抗肿瘤以及抑制免疫等药理作用[3]。但对RA患者的血小板的影响机制还不明确。本实验就此现状，望探究出青藤碱在治疗类风湿关节炎的过程中对血小板因子PDGF、PAF表达的影响。

1 材料

1.1 实验动物 SPF级健康(SD)大鼠40只，8～10周龄，雄性，体质量(180±20)g(湖南斯莱克景达,SCXK(湘)2016-002)，适应性喂养5天后开始实验。

1.2 材料 青风藤干燥藤茎(购于广西中医药大学第一附属医院，经韦松基鉴定为防己科植物青藤藤茎(Sinomeniumacuturn)；天然牛Ⅱ型胶原蛋白、完全弗氏佐剂、P-选择素检测试剂盒、PECAM-1检测测试盒购自与南宁市鹏碧实验室器材经营部。

2 方法

2.1 分组与造模 将40只SD大鼠随机分为空白组8只以及造模组32只，将溶于醋酸的牛Ⅱ型胶原蛋白先于4 ℃低温保存过夜，第2 d与完全弗氏佐剂以等体积乳化，乳化成功后，对模型组大鼠背部及尾部多点行皮下注射，诱导类风湿关节炎模型；空白对照组大鼠注射等量0.9%氯化钠溶液[4]。

2.2 造模评分 按照关节指数评分标准对类风湿关节炎模型大鼠进行评分，首次注射后每3 d称重1次，每周固定两名实验员记录关节肿胀评分。

2.3 给药 造模后第21 d进行关节评分，评分>4分即认定为造模成功。成模大鼠随机分为模型组(n=8)和青藤碱低剂量组、青藤碱中剂量组、青藤碱高剂量组。分组后开始给药：青藤碱组灌胃给予青藤碱的混悬液，低剂量组给药青藤碱5 mg/kg/d；中剂量组给与10 mg/kg/d；高剂量组给药20 mg/kg/d。模型组与对照组灌胃等量0.9%氯化钠溶液；灌胃剂量按照10 mL/kg/d，每天1次，持续28 d。

2.4 实验取材 造模成功后，行第一次眼眶取血，离心保存血清。第二轮取血于实验结束后；此次取血先禁食一夜，次日于大鼠眼眶取血。ELISA法测定血清中PDGF、PAF水平，操作方法严格按试剂盒说明书操作。

3 结果

3.1 各组大鼠足关节指数的变化 造模后，大鼠多关节肿胀明显，并伴有明显红肿；给药后，大鼠关节明显好转。给药第7、14、21 d时，壮药青藤碱高剂量组足关节指数评分明显低于模型组(P<0.05)，第28 d显著低于模型组(P<0.01)；给药第7、14、21、28 d，壮药青藤碱中剂量组关节指数明显下降，关节肿胀改善情况优于模型组(P<0.05)；给药第14、21、28 d，壮药青藤碱低剂量组关节指数下降，关节肿胀改善情况优于模型组(P<0.05)。见表1。

表1 类风湿关节炎模型大鼠关节指数的变化情况

3.2 各组大鼠血清PDGF、PAF的表达情况 给药后，壮药青藤碱高剂量组和空白组大鼠血清PDGF、PAF的表达显著下降，且低于模型组(P<0.01)；壮药青藤碱中、低剂量组大鼠血清PDGF、PAF的表达明显下降，且低于模型组(P<0.05)。见表2。

表2 壮药青风藤总生物碱对类风湿关节炎模型大鼠PDGF、PAF表达的影响

4 讨论

RA在我国的发病率仅约为0.35%，但由于我国人口基数大，患病总人数超500万，严重影响人民身心健康，甚至在某些地区，患者中存在很高的抑郁率，给患者家庭和社会带来了巨大负担。类风湿关节炎的发病和多种炎症因子相关，如肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、IL-4[5]、IL-6、IL-17[6]、IL-10、IL-1[7]、IL-1β[8]等。董文哲等[9]研究发现，血细胞血小板的计数变化和RA的关系尤为密切，血小板的激活和类风湿关节炎的炎症反应呈正相关；而血小板的激活必然会分泌PDGF和PAF，导致PDGF和PAF在类风湿关节炎炎性反应中呈现高表达[10]。

壮医认为，RA属于壮医“发旺”(壮名：Fungcaep)范畴。该病的主要发病机理为风、寒、湿、热等毒邪乘虚侵入人体，阻滞“龙路” “火路”，使气血运行不畅，痹阻于筋骨肌肉、关节所致；治疗当祛风除湿，行气消肿止痛。壮药龙钻通痹方是壮医治疗活动期RA的经验方，该方遵循壮医主帮配伍的组方原则。由飞龙掌血、大钻、八角枫、两面针、青风藤、九龙藤等组成，能疏通“龙路”“火路”之瘀滞，直接祛邪外出，恢复天、人、地三气的同步运行，从而达到治疗目的。

青藤碱是壮药青风藤治疗类风湿关节炎主要有效的化学成分，现代临床及实验发现，青藤碱治疗类风湿关节炎的临床效果显著，对类风湿发病过程中的各种炎性因子都有一定的影响。如能降低细胞因子IL-1、IL-6[14]、IL-1、IL-17[15]、TNF-α等的表达；还能上调IL-4[16]的表达，从而减轻类风湿关节炎的滑膜增生和骨破坏。但是对类风湿关节炎发病过程中血小板的影响情况却研究不多。

本实验发现，青藤碱对类风湿关节炎模型大鼠的血小板因子PDGF和PAF有抑制作用，并能有效缓解大鼠关节肿胀，达到治疗类风湿关节炎的效果。但在药物浓度上有一定的要求。