鸡油菌多糖对小鼠有氧性运动疲劳恢复作用*

李苗苗

（安阳学院，河南 安阳 455000）

鸡油菌（Cantharellus cibarius）属于鸡油菌目（Cantharellales），也称杏黄菌或者黄丝菌[1]，其肉质呈杏黄色或枇杷黄，味微甜，有杏仁香气[2]。鸡油菌中含有丰富的胡萝卜素和VA、VC，以及钙、铁、磷等矿物质类元素。属性较平和、味甘，有明目清肝的功效，还有助于肠胃吸收并且利肺，甚至还能美容养颜抗衰老[2]。鸡油菌多糖属于天然活性产物，受到很多科研人员的青睐。有研究表明该菌有抗氧化、抗衰老和增强免疫力的作用，还能抗病毒和防辐射并有降血糖的功效[3]。

采用热水浸泡法提取鸡油菌多糖，研究其对超氧自由基负离子和羟基自由基的清除作用，可为医药和食品领域中鸡油菌的应用提供理论依据。

1 试验材料和方法

1.1 鸡油菌多糖提取

1.1.1 提取鸡油菌多糖的流程工艺

1）试验材料

新鲜野生鸡油菌于8月采自云南楚雄南华县（N24°58′28.88″，E100°48′15.27″）。

2）多糖制备

在鸡油菌的粉末中加入一定比例的蒸馏水，混合搅拌均匀；按预设的温度、时间、pH、液料比进行提取；在4 000 r·min-1，10 min的条件下离心得到上清液；测定样品的多糖；浓缩处理；醇沉；测量粗多糖得率。

1.1.2 热水浸提法

浸提时间、温度、pH、液料比，是热水浸提法提取多糖时的主要影响因素。对这四类因素试验，设置浸提时间分别为0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h；浸提温度分别为 40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃；液料比分别为 10 mL·g-1、15 mL·g-1、20 mL·g-1、25 mL·g-1、30 mL·g-1、35 mL·g-1；pH 分别为4、5、6、7、8、9。研究在这些条件下，鸡油菌多糖得率，得到最适合的提取条件。

分别将200 g烘干的鸡油菌子实体用粉碎机粉碎至细粉末状。将粉碎的菌粉末放入2 000 mL的烧杯中，加入1 500 mL蒸馏水搅拌，浸泡过夜，在95℃的恒温水浴锅内恒温水浴6 h。收集上清液，用10 000 r·min-1室温离心20 min。将沉淀加蒸馏水再进行2次恒温浸提。将3次离心后的上清液收集，得到鸡油菌多糖的粗提液，低温保存备用。

1.1.3 真空浓缩

将3次离心后的多糖的粗提液用旋转蒸发仪进行浓缩。将上清液添加到旋转蒸发瓶内，温度调至65℃，转数调至6 000 r·min-1后，打开冷凝装置，开启真空泵抽至真空后加热进行浓缩。浓缩直至液体呈浓稠状即可停止浓缩，用烧杯收集待用。

1.1.4 醇沉除蛋白质

采用醇沉法，将无水乙醇加入盛放浓缩液的烧杯中，边加边用玻璃棒搅拌，加至无水乙醇与粗糖浓缩液体积比为4∶1为宜。静置24 h，收集沉淀，烘干，然后用蒸馏水溶解沉淀，蛋白质在经无水乙醇处理，再烘干后，己变性不溶于水，多糖成分会继续在水中溶解，将混合沉淀充分溶解后，10 000 r·min-1离心20 min，弃不溶物，收集溶液再次烘干，获得鸡油菌粗多糖的粗多糖。

1.1.5 分离纯化鸡油菌多糖

将鸡油菌多糖的提取液浓缩至料液比1∶4，再加入4倍体积的浓度为95%的乙醇，沉淀12 h后进行干燥处理得到粗多糖。Sevag法对粗多糖进行脱蛋白处理，用打孔来吸附树脂使其脱色，然后通过DEAF-52离子交换柱做分离处理，得到CP1和CP2峰。把主峰CP2通过Sephadex G-100柱做纯化，再经过收集、干燥，得到鸡油菌多糖[4]。

1.2 有氧性运动疲劳恢复试验

1.2.1 试验动物

体重为130 g～150 g，SPF级别的Wistar雄性小白鼠，来自中国农业大学，合格证编号SCXK-(京)2016-0011。

1.2.2 试验仪器设备和试验试剂

普通、高脂2种饲料，美国ReserachDiets公司；载脂蛋白（ApoAl）、高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）、载脂蛋白-B（ApoB）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），甘油三酯（TG），总胆固醇（TC）试剂盒，上海钰博生物科技有限公司；鸡油菌多糖CCP，购自盐城市芝庆堂生物科技有限公司；Anthos 2010型酶标仪，安图斯（贝思）酶标仪公司；BW-TDM 709型动物跑台，安徽正华生物仪器设备有限公司；UV-2350型紫外-可见分光光度计，尤尼柯（上海）仪器有限公司。

1.2.3 训练运动的方法

根据Wistar雄性小白鼠在运动时候的状态，选出与之运动方式符合的跑台，使其斜度达5°，使小白鼠在运动时的速度达到18 m·min-1，每日1次，每次50 min，坚持运动30 d。

1.2.4 对动物做分组处理

随机选出50只小白鼠，平均分成5组。分别是A组（空白对照组）、B组（高脂模型）、C组（耐力运动组）、D组（鸡油菌多糖组）、E组（耐力运动+鸡油菌多糖组），做为期30 d的试验[5]。对5组小白鼠分别处理，A组用正常饲料喂养；B组用高脂饲料喂养；C组、E组每天做50 min的跑台运动，维持30 d；D组、E组每一天都按照60 mg·kg-1的量注射鸡油菌多糖；对B组、C组每一天都按照60 mg·kg-1的量对其注射以生理盐水。最后1次注射完毕和结束运动之后，做12 h的禁食处理，再把小白鼠麻醉，从其腹部的主动脉里抽血，对血清分离，测定出其LDL-C和HDL-C，ApoB和ApoAl，SOD、MDA和GSH-Px以及TC和TG含量。

2 试验结果

2.1 对TC、TG、HDL-C及LDL-C水平的影响

高脂模型小鼠在鸡油菌多糖结合耐力运动对TC、TG、HDL-C及LDL-C水平的作用，见表1。

由表1可知，鸡油菌多糖组结合耐力运动综合影响下表现较好，明显地降低TC、TG及LDL-C水平，明显提高HDL-C水平，高脂血脂在注射鸡油菌多糖组和耐力运动的影响下显著降低。

2.2 对ApoAl和ApoB含量的影响

高脂模型小鼠在鸡油菌多糖结合耐力运动下ApoAl和ApoB含量的作用，见表2。

表1 鸡油菌多糖结合耐力运动对高血脂小鼠TG、TC、HDL-C、LDL-C的水平影响Tab.1 Effects of Cantharellus cibarius polysaccharide combined with endurance exercise on the levels of TG,TC,HDL-C and LDL-C in hyperlipidemia mice

表2 鸡油菌多糖结合耐力运动对高血脂小鼠ApoA1、ApoB含量的影响Tab.2 Effects of Cantharellus cibarius polysaccharide combined with endurance exercise on the content of ApoA1 and ApoB in hyperlipidemia mice

由表2可知，相较于高脂模型组，鸡油菌多糖组ApoB含量，降低ApoAl含量；相较于空白对照组，显然，高脂模型组的ApoAl含量减小，ApoB含量增加。由表1看，其效果在鸡油菌多糖组结合耐力运动综合影响下明显提升，同时对ApoAl和ApoB含量影响很大，降低ApoAl含量，提升ApoB含量。

2.3 对SOD、MDA含量的影响

高脂模型小鼠在鸡油菌多糖结合耐力运动下SOD及MDA含量的作用，见表3。

由表3可知，高脂模型组的MDA含量高于对照组，与正常对照组相比，B组、C组、D组、E组小鼠的肝脏SOD活性和GSH-Px活性均显著低于正常组的值，而其肝匀浆的MDA含量却显著高于正常组的值（P＜0.05）。鸡油菌多糖可显著提高小鼠肝SOD活性和GSH-Px活性（P＜0.05），降低小鼠肝匀浆MDA含量，说明鸡油菌多糖在小鼠体内发挥了显著的抗氧化作用。相较于高脂模型组，鸡油菌多糖组较高脂模型组SOD活力上升，耐力运动组较高脂模型组SOD活力上升，MDA含量显著下降，说明高脂血症小鼠抗氧化能力在注射鸡油多糖和耐力运动组的作用下呈积极效果。

表3 鸡油菌多糖结合耐力运动对高血脂小鼠SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响Tab.3 Effects of Cantharellus cibarius polysaccharides combined with endurance exercise on SOD,GSH-PX activity and MDA content in hyperlipidemia mice

3 讨论与结论

通过测量小鼠机体内的甘油三醇、总胆固醇来判断其内部血脂的高低。由TG和TC的含量推断小鼠血脂含量高，会对小鼠的机体运动造成不利，导致多种疾病发生。TG和TC的相对含量超标越多，高脂血症就会越严重。研究分析发现，患高脂血症的几率和HDL-C成正相关的关系，研究结果与预期的试验设计是相同的[5]。在动脉粥样硬化逐渐形成和慢慢发展的过程中，LDL-C通过破坏收缩血管和舒张血管物质的平衡来促进血栓形成；而LDL-C的氧化修饰可以被HDL-C抑制，使得动脉粥样硬化的进展被延缓[6]。因此通过分析HDL-C和LDL-C的浓度，找出其与耐力运动之间的相关性。

试验结果说明，耐力运动结合鸡油菌多糖组有相对比较明显的正向效果，使HDL-C水平明显提高，LDL-C、TC、TG的水平明显地降低。所以，将耐力运动结合鸡油菌多糖，可以明显降低高脂血症血脂。

HDL-C的载脂蛋白是ApoAl，脂质类成分在ApoAl的协助下被转运，以及消除类脂、胆固醇等有关的一些物质[7]。LDL-C的载脂蛋白是ApoB，胆固醇类物质在ApoB的协助下发生醇化反应[8]。试验结果表明，耐力运动结合鸡油菌多糖，提高了ApoB含量，降低了ApoAl含量。SOD对机体有着重要的作用，SOD具有抗氧化活性和抗衰老作用，基体内的自由基可以被SOD清理。脂质过氧化的最终产物是MDA，是反映机体脂质过氧化水平的灵敏指标[9]。高脂血症在机体作用的最终产物是MDA，高脂血症的病情严重与否可以通过MDA含量的大小来检测，MDA还能阻止细胞内外物质的流通和细胞膜的通透性[8-10]。GSH具有抗氧化和防衰老作用，是一种机体内自由基清除剂[10]。

综上所述，耐力运动结合鸡油菌多糖组的效果最显著，能够提高SOD活力和GSH活力，降低MDA。所以，通过耐力运动和注射鸡油菌多糖，提高机体抗氧化水平的效果最好。