丹参通脉胶囊对血瘀大鼠的影响

徐涛 马淑媛 孙付军 王桂芝

[摘要] 目的 实验观察丹参通脉胶囊对Wistar大鼠血小板聚集功能、组织型纤溶酶原激活剂（t-pA）及其抑制物（PAI）活性的影响，探究丹参通脉胶囊对缺血性脑血管疾病的治疗机理。方法 于2009年1—4月选取Wistar大鼠48只，随机分为4组，分别为空白对照组、丹参通脉胶囊2 g·kg-1组、丹参通脉胶囊1 g·kg-1组、血塞通片54 mg·kg-1组，每组12只，对比研究各组大鼠的血小板聚集功能;于2009年5—7月选取Wistar大鼠60只，随机分为5组，分别为空白对照组、模型组、丹参通脉胶囊2 g·kg-1组、丹参通脉胶囊1 g·kg-1组、血塞通片54 mg/kg-1组，每组12只，对比研究各组大鼠组织纤溶酶原激活剂（t-PA）及其抑制剂（PAI）的活性。結果 运用丹参通脉胶囊的小鼠血小板聚集功能M丹参通脉胶囊2 g·kg-1组为（42.16±16.34），丹参通脉胶囊1 g·kg-1组为（49.58±20.33），均低于空白对照组（69.52±19.77）（P<0.05）。丹参通脉胶囊2 g·kg-1组和丹参通脉胶囊1 g·kg-1的小鼠t-pA活性分别为（2.11±0.62）IU/mL和（1.68±0.53）IU/mL均高于模型组的t-pA活性（0.96±0.37）IU/mL（P<0.001），其PAI活性分别为（0.21±0.11）AU/mL和（0.24±0.13）AU/mL均低于模型组的PAI活性（0.41±0.13）AU/mL（P<0.001）。结论 丹参通脉胶囊能明显降低血小板聚集率，抑制血小板聚集功能，并能明显增强t-PA活性、降低PAI活性，且与用药剂量相关。

[关键词] 丹参通脉胶囊;脑缺血;血小板聚集;t-PA;PAI

[中图分类号] R28          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2020）08（c）-0004-04

[Abstract] Objective To experimentally observe the effects of Danshen Tongmai Capsules on the platelet aggregation function， tissue-type plasminogen activator （t-pA） and its inhibitor （PAI） activities in Wistar rats， and explore the effects of Danshen Tongmai Capsules on ischemia Therapeutic mechanism of sexual cerebrovascular disease. Methods From January to April 2009， 48 Wistar rats were selected and randomly divided into 4 groups， namely the blank control group， the Danshen Tongmai capsule 2 g·kg-1 group， and the Danshen Tongmai capsule 1 g·kg-1 group， Xuesaitong tablet 54 mg·kg-1 group， 12 rats in each group， to compare and study the platelet aggregation function of rats in each group; 60 Wistar rats were selected from May to July 2009， randomly divided into 5 groups： blank control group， model control group， Danshen Tongmai Capsule 2 g·kg-1 group， Danshen Tongmai Capsule 1 g·kg-1 group， and Xuesaitong Tablet 54 mg·kg-1 group， 12 rats in each group， comparative study of the activity of plasminogen activator （t-PA） and its inhibitor（PAI） in each group of rats. Results The platelet aggregation function of mice using Danshen Tongmai Capsules was （42.16±16.34） in the Danshen Tongmai capsule 1 g·kg-1 group and （49.58±20.33） in the Danshen Tongmai capsule 1 g·kg-1 group， which were lower than （69.52±19.77） in the blank control group （P<0.05）. The t-pA activity of mice in the Danshen Tongmai capsule 2 g·kg-1 group and Danshen Tongmai capsule 1 g·kg-1 group were （2.11±0.62）IU/mL and （1.68±0.53）IU/mL， respectively， which were higher than those of the model group （0.96±0.37）IU/mL（P<0.001）， the PAI activities of （0.21±0.11）AU/mL and （0.24±0.13）AU/mL were lower than those of the model group by （0.41±0.13）AU/mL （P<0.001）. Conclusion Danshen Tongmai Capsule can significantly reduce the platelet aggregation rate， inhibit platelet aggregation function， and can significantly enhance the activity of t-PA and reduce the activity of PAI， which is related to the dosage.

[Key words] Danshen Tongmai capsule; Cerebral ischemia; Platelet aggregation; t-PA; PAI

血瘀是血液循行障碍、不流畅的一种状态，临床可引发中风等疾病。丹参 、三七、水蛭、葛根、银杏叶、牡丹皮、芍药等中药在临床上有很好的活血化瘀作用，丹参在抗动脉粥样硬化及治疗心脑血管病方面具有重要作用，更有研究表明，水蛭能够明显抑制大鼠动-静脉旁路血栓和胶原蛋白-肾上腺素诱导的小鼠体内血栓。为了进一步揭示丹参通脉胶囊治疗缺血心血管病的作用和机制，该文于2009年1—4月选取Wistar大鼠48只，随机分为4组，分别为空白对照组、丹参通脉胶囊2 g·kg-1组、丹参通脉胶囊1 g·kg-1组、血塞通片54 mg·kg-1组，对比研究各組大鼠的血小板聚集功能; 于2009年5—7月选取Wistar大鼠60只，随机分为5组，分别为空白对照组、模型组、丹参通脉胶囊2 g·kg-1组、丹参通脉胶囊1 g·kg-1组、血塞通片54 mg·kg-1组，对比研究各组大鼠组织纤溶酶原激活剂（t-PA）及其抑制剂（PAI）的活性。现报道如下。

1  材料与方法

1.1  实验药品

丹参通脉胶囊由丹参、三七、水蛭、三酮（葛根黄酮、 银杏叶黄酮、山楂叶黄酮）、牡丹皮、芍药等药物组成，具有益气活血、通经活络、疏肝解郁的功效， 现代药理研究表明，丹参通脉胶囊具有抗血栓形成、增加脑血流量、改善微循环的药理作用，用于治疗缺血性脑血管病。该药由山东省中医药研究院提供。

对照药：血塞通片（国药准字Z43020992）;规格：50 mg/片，口服，1～2片/次，3次/d。

其他：盐酸肾上腺素注射液（批号：020405）。氨基甲酸乙酯（批号：010307）。

1.2  实验动物

Wistar大鼠：购自山东大学医学院实验动物中心（合格证号：鲁动质字：第200201005号）。

1.3  实验试剂

t-pA、PAI试剂盒（购自红太阳生物科技有限公司，批号：031010）。

1.4  实验方法

1.4.1  对大鼠血小板聚集功能的影响  300～350 g Wistar大鼠，48只，雌雄各半，按体重、性别均衡随机分为4组，分别为空白对照组1 mL/100 g·ig，丹参通脉胶囊（医院内部协定方）2 g·kg-1、1 g·kg-1配成20%、10%的水混悬液1 mL·100 g-1·ig，血塞通片54 mg·kg-1组（阳性对照组）为血塞通片54 mg·kg-1，配成0.54%的水溶液1 mL·100 g-1·ig，每日8：00 am给药，连续7 d，禁食12 h，末次给药90 min后，氨基甲酸乙脂1 g·kg-1（20%溶液，1 mL·100 g-1）腹腔麻醉，剖腹，下腔静脉取血2 mL置于防凝管中，进行血小板聚集实验，

1.4.2  对大鼠血浆t-pA、PAI活性的影响  320～350 g，Wistar大鼠60只，雌雄各半，按性别、体重随机均衡分为5组，分别为空白对照组，模型组，丹参通脉胶囊2 g·kg-1、1 g·kg-1组和血塞通片54 mg·kg-1组。给药情况同2.1所示，给药第6天，皮下注射盐酸肾上腺素0.9 mg·kg-1，1 h后0℃冰水浸泡5 min，冰浴后1 h再次皮下注射同剂量盐酸肾上腺素，给药第7天重复第6天的操作过程，第二次造模后24 h，禁食12 h，末次给药90 min后，氨基甲酸乙酯1 g·kg-1（20%水溶液，1 mL·100 g-1）腹腔麻醉，剖开腹腔，暴露下腔静脉，取2 mL血以0.109 mol·L-1枸橼酸钠1∶9体积抗凝，-4～8℃， 3 000 rpm，离心10 min，分离上清液（血浆），发色底物法测定t-pA、PAI活性。

2  结果

2.1  对大鼠血小板聚集功能的影响

实验结果提示：与空白对照组相比，给药组血小板聚集率差异有统计学意义（P<0.05）。该品能降低血小板聚集率，抑制血小板聚集功能，见表1。

2.2  对大鼠血浆t-pA、PAI活性的影响

实验结果提示：与模型组相比，给药组高、中剂量组可以非常明显地提高t-pA活性，降低PAI活性，与空白对照组比较则差异无统计学意义，丹参通脉胶囊1 g·kg-1组和血塞通片54 mg·kg-1组与模型组相比，差异有统计学意义（P<0.01），同时与空白对照组比较也差异有统计学意义。该品能提高血瘀模型大鼠的t-pA活性，降低PAI活性，且达到正常水平，而降低纤溶酶原含量。见表2。

3  讨论

丹参通脉胶囊在降低血小板聚集率方面效果显著，且有独特优势。运用丹参通脉胶囊2 g·kg-1的小鼠血小板聚集功能M为（42.16±16.34），丹参通脉胶囊1 g·kg-1的小鼠血小板聚集功能M为（49.58±20.33），空白对照组的小鼠血小板聚集功能M为（69.52±19.77），运用血塞通的小鼠血小板聚集功能M为（65.96±17.91），丹参通脉胶囊对小鼠血小板聚集率有较好的降低作用，且优势显著，并且高剂量的丹参通脉胶囊疗效要更好。朱志平等[1]研究通脉益智方对大鼠血小板聚集率的影响，结果空白对照组血小板聚集功能M 为（40.18±20.72），通脉益智方组血小板聚集功能M为（29.25±23.9）（P<0.05），与该研究结论一致。运用丹参通脉胶囊2 g·kg-1的小鼠t-pA活性（2.11±0.62）IU/mL，运用丹参通脉胶囊1 g·kg-1的小鼠t-pA活性（1.68±0.53） IU/mL，均明显高于模型组的（0.96±0.37）IU/mL（P<0.001），且丹参通脉胶囊2 g·kg-1的小鼠t-pA活性明显高于血塞通组（1.50±0.47） IU/mL（P<0.01）;运用丹参通脉胶囊2 g·kg-1的小鼠PAI活性（0.21±0.11）AU/mL，运用丹参通脉胶囊1 g/kg的小鼠PAI活性（0.24±0.13）AU/mL，均明显低于模型组的（0.41±0.13）AU/mL（P<0.001），且丹参通脉胶囊2 g·kg-1的小鼠PAI活性明显低于血塞通组（0.25±0.09）AU/mL（P<0.05）。从这个结果中可以看出，丹参通脉胶囊能很好地提高血瘀模型大鼠的纤溶酶原激活剂t-pA活性，降低纤溶酶原抑制剂PAI活性。高剂量丹参通脉胶囊可使血瘀模型大鼠的t-pA活性达到正常水平。王海丽等[2]以茜草炭治疗急性血瘀模型大鼠，结果模型组大鼠t-PA值为（10.53±2.04）μg/L，PAI值为（851.62 ±78.97）ng/L，茜草炭正丁醇部位组大鼠t-PA值为（13.53±1.05）μg/L，PAI值为（586.17±42.32）ng/L，证明茜草炭正丁醇部位能显著提高血瘀模型大鼠t-pA活性、降PAI活性（P<0.05），与该研究结论一致。

丹参通脉胶囊由丹参、三七、水蛭、三酮（葛根黄酮、 银杏叶黄酮、山楂叶黄酮）、牡丹皮、芍药等药物组成。丹参在抗动脉粥样硬化及治疗心脑血管病方面疗效显著，其主要作用机制在于丹参提取物的抗血小板聚集作用。体外研究结果表明[3-6]，丹参能缩短血栓长度、降低血栓重量，升高6-酮-前列腺素F1α水平，降低内皮素、血浆血栓素B2水平，抑制胶原和二磷酸腺苷（ADP）诱导的血小板聚集，有效改善凝血功能，丹参和丹参提取物还对促进血管内皮结构和功能恢复、改善局部微循环具有良好疗效。水蛭能抑制肾上腺素、ADP、花生四烯酸或胶原等诱导的血小板聚集，对实验性大鼠、小鼠体内血栓的形成有明显的抑制作用。水蛭能降低纤溶酶原抑制剂（PAI）的活性，使纤溶酶原激活剂（t-PA）的活性提高，降低血小板黏附性[7-9]。葛根可以直接扩张脑血管以增加脑血流量，从而增加脑细胞的供血供氧以稳定脑血管功能。葛根素可明显改善脑梗死大鼠的神经功能，并可改善神经细胞凋亡。同时，葛根中有效成分葛根素可抑制D-半乳糖诱导的蛋白糖基化反应，大豆苷可抑制脑组织中促凋亡基因表达并防止突触体钙超载，有效减少海马神经元凋亡和神经细胞毒性损伤，均可达到保护脑神经的功效[10-12]。银杏叶提取物能够抑制缺血后变异基因的表达，防止脑缺血再灌注的神经元细胞衰老、损伤和死亡。黄酮类物质可以减少炎症因子产生，促进ATP的合成，抑制钙离子内流，清除自由基，减少神经细胞的凋亡，对脑血管和神经系统具有较好的保护作用[13-14]。山楂叶也有很好的抗凝抑制血小板聚集作用。其在体内、外均能非常显著地抑制胶原或ADP诱导的兔血小板聚集。此外，静脉注射山楂叶制剂30 min后，全血比粘度显着下降。从中医角度讲丹参通脉胶囊可以益气活血、通经活络、疏肝解郁。从现代药理分析丹参通脉胶囊可以抗凝、抑制血小板、改善循环、抗血栓。国内外研究资料表明[15-16]脑血管病的发病与组织型纤溶酶原激活剂（t-pA）及组织型纤溶酶原抑制物（PAI）活性变化密切相关。t-Pa、PAI的动态平衡维持血管完整性和疏通血流通道。

综上所述，该实验表明丹参通脉胶囊可以抑制血小板聚集，提高t-pA活性，降低PAI活性，从而验证了丹参通脉胶囊抗栓、抗血小板聚集的理论。

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（收稿日期：2020-05-28）