基于液相色谱-质谱技术的乳腺癌转移相关代谢标志物的筛选

霍红旗，吕佰瑞，王海东，刘爱民

【摘要】目的：研究液相色谱-质谱技术在乳腺癌转移相关代谢标志物筛选方面的应用效果。方法：从本院2018年2月-2020年2月收治乳腺癌患者中选择80例纳入观察组（40例发生转移与40例未发生转移），同时选择40名乳腺健康体检者纳入对照组，均实施液相色谱-质谱技术的乳腺癌转移相关代谢标志物的筛选，分析筛查结果。结果：通过构建模型与分析，从健康人员到乳腺癌未转移、乳腺癌转移者，有8项相关代谢标志物出现明显升高。结论：基于液相色谱-质谱技术可构建模型，并通过乳腺癌转移相关代谢标志物的筛选为乳腺癌转移提供依据。

【关键词】乳腺癌;病灶转移;液相色谱-质谱技术;模型;代谢标志物

【中图分类号】R587.2;R741.044 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6525（2020）08-0-01

乳腺癌在女性恶性肿瘤中有较高的发病率，也是严重威胁患者生存质量的重大疾病。尽管关于乳腺癌的研究较多，但是乳腺癌发病率、死亡率仍然较高[1]。本研究通过基于液相色谱-质谱技术的乳腺癌转移相关代谢标志物的筛选模型建立与分析，旨在为乳腺癌转移预测与干预提供依据，现就相关资料分析如下。

1资料与方法

1.1一般资料

从本院2018年2月-2020年2月收治乳腺癌患者中选择80例纳入观察组（40例发生转移与40例未发生转移），同时选择40名乳腺健康体检者纳入对照组，均为女性。观察组转移者：年龄32-74岁、平均年龄（45.59±4.25）岁，其中：12例肺转移、18例肝转移、6例骨转移，4例出现两个以及两个部位以上转移。观察组未转移者：年龄30-75岁、平均年龄（45.45±4.28）岁。对照组：年龄31-76岁、平均年龄（45.55±4.23）岁。乳腺癌患者预测生存期≥3个月，三组人员年龄资料差异较小，满足可比性（P>0.05）。

1.2方法

检查仪器与试剂有：质谱仪、高效液相色谱仪、甲酸、乙腈、蒸馏水、相关标准质控品等。

将100μL血清标本解冻，然后与400μL甲醇混合，离心处理后，将上层清液真空离心蒸干，获取干粉。等样本体积水和乙腈混合（V/V=95/5），然后溶解干粉，离心处理，通过0.22μm滤膜对上清液过滤，样本检测。将不同标本上样液等体积混合后的溶液作为质控品。

样品分析：色谱柱为选择Thermo Hypersil GOLD柱（50mm×2.1mm×1.9μm），0.1%甲酸的水溶液为流动相A，含0.1%甲酸的乙腈溶液为流动相B，设置流速200μL/min，之后按程序完成梯度洗脱，进样量10μL，4℃，质控溶液中10个进行连续检测，其余则随机插入样品中进行分析。分析过的样品则使用空白代替。获取数据后可进行模型建立，利用MZmine 2.7.2 软件，SIMCA14.1软件，建立模型后实施潜在标志物的鉴定与分析。

1.3观察指标

不同样本组合对应的OPLS-DA模型以标志物鉴定。

2结果

不同组合对应OPLS-DA模型构建情况见表1，通过对代谢标志物进行筛查，筛查后按照实验步骤进行代谢标志物的鉴定。对比标准谱图和二级质谱图搜索，乳腺癌未转移者与健康对照组有31项指标有差异，而乳腺癌转移组与乳腺癌未转移组则有23个代谢标志物存在差异，经鉴定，共有8个代谢物可作为病情发展的参考指标，包括溶血磷脂酸（18∶1）、溶血磷脂酰胆碱（18∶0）、胆碱、溶血磷脂酰胆碱（20∶3）、磷酸二羟丙酮、番石榴酸、芥酸、L-氢化乳清酸。

3讨论

引起乳腺癌患者死亡率较高的一个重要原因便是乳腺癌转移，通过对乳腺癌转移的早期预测与干预对延长乳腺癌患者生存时间至关重要[2]。

随着对乳腺癌研究的深入，代谢异常同乳腺癌患者病情发生、进展等存在密切相关性。常规肿瘤标志物检测对乳腺癌转移的特异性与灵敏度较低[3]。代谢组织学研究进展为乳腺癌转移提供了更多依据[3]。通过代谢学指标对健康人员、乳腺癌未转移者、乳腺癌转移者指标进行分析，进一步鉴定发现血磷脂酸（18∶1）、溶血磷脂酰胆碱（18∶0）、胆碱、溶血磷脂酰胆碱（20∶3）、磷酸二羟丙酮、番石榴酸、芥酸、L-氢化乳清酸等表达同乳腺癌转移以及病情发展密切相关，其水平升高者出现乳腺癌转移。与吴静等[4]研究结论一致。关于不同代谢标志物的具体作用机制以及实际应用价值还需进一步加大研究。

综上所述，基于液相色谱-质谱技术可构建模型，并通过乳腺癌转移相关代谢标志物的筛选为乳腺癌转移提供依据。

参考文献：

[1]成祥君，杨璐，张伟，等.不同分子分型乳腺癌血清肿瘤标志物的表达差异与肿瘤复发转移的影响因素[J].临床检验杂志，2019，37（12）：893-896.

[2]廖东亮.曲妥珠单抗、吉西他滨联合紫杉醇治疗转移性乳腺癌对患者血清肿瘤标志物的影响[J].名医，2019（10）：259.

[3]韩丽乔，张乔轩，黄宪章.液相色譜串联质谱技术定量检测的临床应用现状与挑战[J].中华检验医学杂志，2020，43（10）：945-950.

[4]吴静，杨睿，张磊，等.基于液相色谱-质谱技术的乳腺癌转移相关代谢标志物的筛选[J].天津医药，2018，46（10）：1033-1038.

基金项目：河北省卫健委医学研究课题（编号：20191861）

通讯作者简介：吕佰瑞（1984-），男，河北邯郸人，主管检验师，硕士，主要从事肿瘤的基础研究。