不同厂家黄连羊肝丸的显微鉴别研究

赵闽家，吴 迪，王 旭，杨娜娜，刘树森，徐蓓蕾*

(1.哈尔滨市食品药品检验检测中心，哈尔滨150090；2. 哈尔滨商业大学 药学院，哈尔滨150076)

显微鉴别(microscopic identification)是运用电子显微技术直接观察中成药中原料药粉末的组织、细胞或内含物，借此鉴别中成药处方组成的真实性的一种鉴别方法.大多数的中成药直接用各种中药粉末配制而成，因此可选择粉末鉴定法进行鉴定；有些浓缩丸剂、片剂等是由药材浸膏制备的，其中残留有药材细胞、组织碎片及其它细微特征，因此显微鉴定对其也有一定的应用价值.鉴定时，根据处方和显微观察，选取足以说明在中成药中是该药所专有的特征，作为鉴别依据[1-3].

丸剂、散剂、片剂、胶囊剂等为中成药的常见剂型，所用原料药为部分或全部中药材细粉，因此保留了饮片粉末的显微特征，这类中成药的质量鉴别项下常列有显微鉴别.中成药所含药味多、成分复杂且含量低、成分之间相互干扰大，因此现代化学方法及仪器分析方法常常不能有效测定其质量，而显微鉴别方法则独具优势.《中国药典1977年版》初次记载了“中草药及成方显微鉴别法”，并在各中成药的鉴别项下对其可资鉴别的显微特征作出规定，一些省、市、自治区所编印的《药品标准》也相继增订这方面内容，《中国药典1985年版》收载的中成药对此又有所充实和提高，十余年来证明，显微鉴别法对保证中成药质量行之有效[4-7].

《中国药典2005年版》记载，黄连羊肝丸显微鉴别：纤维束鲜黄色，壁稍厚，纹孔明显，韧皮纤维淡黄色，梭形，壁厚，孔沟细，纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶成片存在于薄壁组织中，种皮栅状细胞一列，长40～72 μm，其下数列细胞含草酸钙簇晶及方晶，油管含黄色或棕黄色分泌物，不规则团块暗灰色，不透明，加酸产生气泡[8].对黄连羊肝丸处方分析可知：黄连、胡黄连为根茎类中药；黄芩、柴胡、龙胆为根类中药；黄柏为皮类中药；密蒙花为花类中药；决明子为种子类中药；木贼为全草类中药；青皮、茺蔚子为果实类中药；石决明为动物类中药.此中成药，由十四味药材组成，这些中药药材经过几千年的医疗实践证明，皆有治疗眼部疾病的作用或保肝、养肝之功效[9-11].羊肝补肝血，养肝阳而治目疾；黄连有清心火、泻肝明目的功效；决明子、茺蔚子可以凉肝明目；胡黄连、黄芩、黄柏、龙胆草的功效为清泻肝火；柴胡、青皮可以舒肝解郁，黄连羊肝丸有清泄肝热而明目之效[12-15].元代的《原机启微》和明代的《证治准绳》曾对此方有过记载，现代医学研究和临床验证表明，黄连羊肝丸属纯中药制剂，价格低廉，安全有效，无毒副作用，可作为病毒性角膜炎早期治疗的首选药物，是治疗眼部疾病的良方.

1 方法与结果

1.1 仪器与材料

显微镜(XSM-20生物显微镜，宁波舜宇仪器有限公司)、干燥箱(XRD-HR760IN，深圳市旭日东电子设备有限公司)、黄连羊肝丸由不同厂家提供(见表1).

表1 不同厂家的黄连羊肝丸

1.2 制片及观察

1.2.1 取样

取不同厂家(或不同批次)的黄连羊肝丸，每盒任选其中3粒蜜丸(或3袋水蜜丸).

1.2.2 脱蜜

取蜜丸，除去外层，切成碎块，加热水(50～60 ℃)，振摇，使药物溶散混悬、炼蜜溶解，静置，倾去上液，在沉淀中再加热水，依上法操作，如此3～4次(至上液基本无色)，最后所得的沉淀物即为样品.可直接取沉淀制片，亦可将沉淀置干燥箱干燥后取样制片进行显微鉴别.

1.2.3 制片

将需要进行显微观察的粉末药材放置于载玻片上，然后轻轻滴入2～3滴的水合氯醛，搅匀，盖玻片必须用镊子沿一侧轻轻放下，以便液体能够自然展匀.使用滤纸将溢出的液体吸拭或从盖玻片边缘补充液体不足的空隙.每个厂家的黄连羊肝丸粉末各制片5个.

1.2.4 显微观察

将制备好的片子放在显微镜载物台上，对黄连羊肝丸进行显微鉴定，检出其所含的14种药物成分，排除交叉，避免各药物相互干扰，对其中各药物具有鉴别价值的显微特征进行观察并拍照.

1.3 结果与讨论

1.3.1 各药材显微特征

1)黄连石细胞鲜黄色，测量其直径平均值在25～64 μm之间，纹孔小，孔沟细，少数石细胞壁较薄而胞腔较大.

2)胡黄连棕色块随处散在，黄棕色，形状、大小不一.

3)黄芩韧皮纤维微黄色.呈梭形，显微测量其长度平均值在51～200 μm之间，直径约9～33 μm.

4)黄柏晶纤维鲜黄色，成束存在.柴胡油管管道中含黄棕色条状分泌物.

5)龙胆草酸钙针晶不规则散在于薄壁细胞中或充塞于细胞一角.

6)青皮中果皮薄壁组织呈无色，细胞形状不规则，有的细胞中可见到淡黄色无定形或类圆形橙皮甙结晶，结晶大小不一.

7)木贼的内皮层细胞表面观呈长方形，壁微波状弯曲，有光泽.

8)茺蔚子内果皮厚壁细胞呈黄棕色.底面观(内表面观)胞间层不易被观察到，纹孔排列疏松，存在不规则形状裂纹，胞腔形似类圆形，多见方晶.

9)决明子的种皮栅状细胞，无色，横断面观细胞1列，呈长方形.

10)密蒙花极易见其特征结构星状毛，体部具有2细胞，基部细胞并列存在，每个细胞具有2分叉，分叉长度相当或一长一短，先端逐渐尖锐.石决明不规则团块暗灰色，不透明.

11)夜明砂昆虫的触角显微可见.动物类的显微特征可鉴别动物类用药羊肝的存在.(见图1～3)

图1 表1中不同厂家的黄连羊肝丸样品

图2 表1中不同厂家的黄连羊肝丸样品

图3 表1中不同厂家的黄连羊肝丸样品

1.3.2 专属性特征

黄连、黄芩、黄柏、龙胆中均含有石细胞.黄连石细胞大多呈类圆形，直径25～64 μm，纹孔小，孔沟细；黄芩石细胞直径24～48 μm，孔沟有分叉；黄柏石细胞大多呈分枝状，形大；龙胆石细胞少见，纹孔裂缝状，有的胞腔内含细小针晶.因此，可以根据所含石细胞特点的不同进行黄连的鉴别.黄连与黄芩中均含有韧皮纤维.黄连韧皮纤维较粗短，长136～185 μm，直径27～37 μm.黄芩韧皮纤维长51～200 μm，直径9～33 μm.通过显微测量法可鉴别黄芩.

1.3.3 结果

对黄连羊肝丸处方进行分析，其组成药物共14种，避开交叉，排除干扰，在不同厂家的黄连羊肝丸粉末所制的片子中，均可见各药材的主要显微特征.说明已购买的各厂家黄连羊肝丸中药味无缺失现象，表明其质量在显微鉴别结果上无明显差别，若要进一步进行质量控制，可以结合理化鉴别和含量测定的方法.

2 讨 论

以往文献鉴定黄连羊肝丸的质量，通常只对黄连和黄芩的主要成分小檗碱及黄芩苷进行鉴别和含量测定，此法只能确定中成药中某味或某几味药的指标性成分的含量高低，不能全面的检测处方中的所有原料药的有无，尤其对于没有标准品的中药，检测难度更大.本文采用显微鉴别方法，具有操作简便、结果准确的特点，可以快速、简便的对中成药进行质量控制，能够测定制剂处方中原料药组成的真实性，是中成药鉴定中的主要手段之一.

中成药的显微鉴别是在粉末药材显微鉴定的基础上，通过排比、分析，选定中成药原料药材中可资鉴别的显微特征作为检定的依据，具有一定专属性，且制剂的原料药材均为整体和批量磨粉入药，避免了个体差异和取材部位不同的影响，保证了显微特征检出的重现性.本研究所用的显微鉴别法，可以宏观全面的把握中成药的质量，完善了中药制剂的质量控制标准，进一步较全面地补充了药典中对于中成药显微鉴别的内容，为今后中药制剂的质量标准制定起了示范性作用.