填饲方法和性别对填饲后朗德鹅血清生化指标的影响

杨云周,王惠影,王 翠,刘 毅,龚绍明,程国华,何大乾∗

(1 上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海201106;2 江西省抚州市南丰县畜牧兽医局,抚州344500)

养鹅生产中通常采用填饲方法生产鹅肥肝,在填饲过程中,朗德鹅肝脏脂肪代谢活动显著增加[1],血液生化指标发生剧烈的变化,如血脂等含量急剧增加[2-3],而肝脏本身却极少发生严重损伤[4]。 由于填饲期间血液生化指标变化模式与人类脂肪肝具有相似性,家鹅也被视为一种潜在的研究人类脂肪肝的动物模型。 脂肪肝及相关疾病已经成为人类健康的一个重大威胁[5],研究鹅肝超强的脂肪变性耐受能力机制,特别是肝重(脂肪沉积程度)与易检血液生化指标的关系,可以为人类脂肪肝研究提供启示。 血液生化指标的变化可以反应肝脏生理状态或病变程度,同时也是研究肝脏抵抗重度脂肪变性能力的重要间接指标,在人类医学中通过测定某些血液生化指标反应肝脏功能早已成为常规诊疗手段。 目前,影响填饲后朗德鹅血清生化指标的因素还未见报道。 本试验研究填饲方法和性别对其血清生化指标的影响,以期找到合适的血清生化指标用于朗德鹅种群的肥肝生产性能选育。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选择260 只70 日龄朗德鹅进行填饲试验,所有鹅只随机分为机械组和手动组,每组两名工人,各填饲130 只鹅。 机械组采用气泵机填饲,根据鹅体重设定填饲料量;手动组采用传统螺旋进料机,由熟练工人在填饲过程中自行决定填饲料量。 填饲料主要成分为煮熟的玉米,同时添加油脂、食盐、益生菌等添加剂。 机械组填饲粉碎玉米,而手动组填饲整粒玉米。 填饲前3 d 为预饲期,所有鹅只可自由饮水和采食,填饲期间根据鹅只健康状态和体重增长等因素调整填饲料量和填饲周期,填饲结束后所有个体集中屠宰并收集血液制备血清,血清置于-25 ℃冰箱保存。 胴体冷却后取出完整肝脏,测定肝质量(下称肝重),剔除血肝个体。

1.2 性别鉴定

利用性染色体基因CHD1 的长度特异性进行性别鉴定,引物(Forward:5’-TGCAGAAGCAATATTACAAGT-3’,Reverse:5’-AATTCATTATCATCTGGTGG-3’)在家鹅Z 染色体上的扩增长度为466 bp,而在W 染色体上扩增长度为326 bp,因此公鹅(ZZ)扩增产物在琼脂糖胶电泳图上只显示一条带,而母鹅(ZW)同时显示两条带[6],可据此判断公母。

1.3 血清生化指标测定方法

AST(天冬氨酸转氨酶)、ALT(丙氨酸转氨酶)、TBIL(总胆红素)、DBIL(直接胆红素)和TBA(总胆酸)等指标采用比色法测定,GLU(血液葡萄糖)和VLDL(极低密度脂蛋白)含量采用放免法测定。 比色法所用试剂盒和仪器型厂商分别为中生北控股份有限公司及深圳迈瑞BS-420 全自动生化仪,放免法所用仪器为西安核仪器厂XH-6020 全自动放免仪,测定工作均在北京华英生物技术研究所完成。

1.4 统计分析

采用R 语言中t检验函数分析不同分组组间表型差异及显著性水平,采用psych 包中corr.test 函数计算Pearson 相关系数及显著性水平以分析血清生化指标与肥肝重的相关性。

2 结果与分析

2.1 填饲方法对填饲后朗德鹅血清生化指标的影响

填饲试验结束后淘汰体重过低及死亡的个体,手动组91 只和机械组118 只朗德鹅可以用于后续数据分析。 由表1 可见,不同填饲方法的朗德鹅血清生化指标间存在显著差异。 机械组的朗德鹅肝重、AST、ALT、TBIL、DBIL、VLDL 显著或极显著高于手动组,TBA 极显著低于手动组。 GLU 含量在组间无显著差异,机械组稍高于手动组。

表1 填饲方法对朗德鹅血清生化指标的影响Table 1 Effects of overfeeding methods on serum biochemical indexes of Lande geese

2.2 性别对朗德鹅血清生化指标的影响

实验动物性别鉴定结果显示,手动组31 只母鹅、60 只公鹅,机械组60 只公鹅、58 只母鹅。 由表2 可见,手动组内仅VLDL 在性别间存在显著差异,表现为母鹅显著高于公鹅,其他指标无显著差异;机械组内性别间所有测定指标均无显著差异。

表2 性别对朗德鹅血清生化指标的影响Table 2 Effects of gender on serum biochemical indexes of Lande geese

2.3 朗德鹅血清生化指标与肝重的相关性分析

所测定的7 项指标中有4 项(AST、ALT、GLU 和VLDL)已见诸报道[2-3],因此,本研究仅分析新测定的胆红素(BIL)和总胆酸(TBA)与肝重的相关性。 由表3 可见,虽然填饲方法不同,但TBIL、DBIL 以及TBA均与填饲后鹅肥肝重呈显著正相关,其中DBIL 与鹅肥肝重相关系数最高,在手动组及机械组中分别达到0.46 和0.36。

表3 朗德鹅血清生化指标与鹅肥肝重的相关性Table 3 Correlation between fatty liver weight and serum biochemical indexes of Lande geese

3 讨论

朗德鹅从国外引进后同样面临“引种-退化-再引种-再退化”的窘境[7],倘若能够利用分子或生化标记开展选育工作,可以延缓引进种群的性能退化,为企业增加效益。 血清生化指标作为反应肝脏功能的间接指标,其自身也是一项十分重要的表型性状,研究影响血清生化指标的因素,及其与鹅肥肝重的相关性,能为后续开展鹅肥肝生产及朗德鹅选育工作提供帮助。 本试验测定了TBIL、DBIL 和TBA 等多项生化指标,并分析了填饲方法和性别对这些指标的影响,及其与鹅肥肝重的相关性。

随着国内鹅肥肝产业的快速发展,填饲方法也在不断改进。 相较于传统填饲方法,自动化填饲使用粉碎玉米,理论上更有助于鹅消化日粮,吸收更多能量,从而产生更大的鹅肥肝。 本试验表明,机械组平均鹅肥肝重显著高于手动组,且机械组VLDL 水平极显著高于手动组,相应地,机械组中具有抗氧化作用的胆红素和转氨酶水平也显著高于手动组,胆红素和转氨酶水平的升高意味着鹅肝脏损伤在急剧增加,同时也表明鹅肝脏在蓄积大量脂肪的同时启动了自我保护机制以抵抗肝损伤。 较早的研究表明,性别对填饲后鹅肝重没有显著影响,公鹅仅稍高于母鹅,原因之一是公母鹅体重差别并不显著[8],而体重是影响鹅肥肝重最重要的表型指标。 在本试验中,性别对肝重亦无显著影响,但手动组中母鹅VLDL 水平极显著高于公鹅,表明填饲期内母鹅肝脏分泌转运出更多脂肪,这可能是手动组中母鹅肝重低于公鹅的一个原因。 相反,在机械组中,公鹅VLDL 水平更高,其平均鹅肥肝重则低于母鹅,这也再次表明群体内对于合成脂肪的分布模式是影响鹅肥肝重的一个重要原因[9]。

研究填饲后鹅血清生化指标的重要意义之一是希望找到与鹅肥肝重具有显著相关的指标,并将其作为一个表型性状用于鹅肥肝高产个体的选择[2]。 本试验中新测定的胆红素和总胆酸均与鹅肥肝呈显著正相关,都是潜在的可用于选种工作的生化标记。

综上,填饲方法是影响鹅肥肝重及血清生化指标的重要因素,血清生化指标中的直接和间接胆红素以及总胆酸等3 项生化指标可以作为生化标记用于肥肝高产个体的选择。