肿瘤浸润性树突状细胞在口腔部鳞状细胞癌组织中的表达及价值

周湘，杜宁，刘昕

口腔部的鳞状细胞癌是临床较为常见的一种头颈部的恶性肿瘤，有较强的浸润性［1-2］，极易发生血行转移及粘膜下的扩散等，预后不良。近年，关于免疫系统与肿瘤发病的相关性研究不断进展，恶性肿瘤的免疫治疗法逐渐推广［3-4］，研究发现肿瘤浸润性树突状细胞可将恶性肿瘤病人体内的上述特异性物质呈递至T淋巴细胞，促进T淋巴细胞的增殖分化、诱导细胞毒性T 细胞等生成，对恶性肿瘤的免疫耐受发挥调节作用并抑制癌细胞生长［5-6］，也有研究发现某些恶性肿瘤病人体内肿瘤浸润性树突状细胞生成减少、未分化细胞较多、表达水平出现异常等［7］。本研究旨在探讨口腔部鳞状细胞癌病人癌组织中肿瘤浸润性树突状细胞的表达及其价值，为该类恶性肿瘤免疫学发病机制及免疫治疗等提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2017 年6 月至2018 年6 月河北省儿童医院收治的口腔部鳞状细胞癌病人进行研究，纳入标准：符合口腔部鳞状细胞癌的诊断标准；年龄范围18～75 岁；本次入院前未进行手术、放化疗、分子生物学等治疗；未使用免疫调节剂类药物进行治疗。排除标准：合并其他部位或脏器的恶性肿瘤；合并有严重的感染性疾病、免疫性疾病等；伴有心、肝、肾等多器官的功能障碍；本次治疗为口腔部鳞状细胞癌复发再次入院；研究过程中自动退出的。

根据上述标准，共纳入50例口腔部鳞状细胞癌病人作为本研究的观察组，选取50 例同时期来我院进行治疗的口腔良性肿物病人作为本研究的对照组。本研究已通过本院医学伦理委员会的审议［伦审（2017）11号］，研究对象均签署本次研究的知情同意书。比较两组病人的性别、年龄及合并症等一般资料，均差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 口腔部鳞状细胞癌与口腔良性肿物病人各50例一般资料比较

1.2 方法入院后进行肿瘤组织切除术治疗，观察组取部分肿瘤组织标本，对照组取良性肿物组织标本，行免疫组织化学染色，方法如下：用石蜡包埋标本后进行切片、脱蜡、孵育等，再经蒸馏水冲洗后浸泡于PBS 溶液中，进行抗原修复后添加一抗（白细胞抗原1a 单克隆抗体、白细胞抗原83单克隆抗体）置于37 ℃条件下孵育2 h，再经PBS溶液冲洗后添加二抗，再次冲洗后滴入工作液置于37 ℃条件下孵育20 min，最后用PBS 溶液冲洗后加入显色剂，经过10 min 显色反应后再次冲洗、复染，最后将切片脱水，透明后封片，在显微镜400 倍镜头下随机选取五个视野对肿瘤浸润性树突状细胞进行计数，取均值作为该组织的肿瘤浸润性树突状细胞密度计数［8］。另取两组病人的部分标本，在RPMI1640 培养基中经过消化等形成细胞悬液，使用流式细胞仪（型号为Epics XL，美国Beckman coulter 公司生产）计数肿瘤浸润性树突状细胞的MHC-Ⅱ阳性细胞比例和CD54 阳性细胞比例。

1.3 观察指标观察组病人肿瘤的TNM 分期、肿瘤组织直径、分化程度及有无淋巴结转移等；计数肿瘤浸润性树突状细胞阳性表达情况、MHC-Ⅱ阳性细胞比例和CD54阳性细胞比例。

1.4 统计学方法采用SPSS 22.0统计学软件对本研究的数据进行统计处理分析，计量资料采用±s表示，采用成组t检验；计数资料采用χ2检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组肿瘤组织中肿瘤浸润性树突状细胞的表达水平、表型与病人临床病理特征的相关性观察组肿瘤TNM 分期为Ⅲ期的肿瘤浸润性树突状细胞密度、MHC-Ⅱ阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例及CD54阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例均明显低于Ⅰ/Ⅱ期（P＜0.05）；肿瘤组织的最大直径≥5 cm的肿瘤浸润性树突状细胞密度、MHC-Ⅱ阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例及CD54阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例均明显低于肿瘤组织直径＜5 cm 的病人（P＜0.05）；观察组肿瘤分化程度不同的病人上述指标相比均差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 口腔部鳞状细胞癌50例肿瘤组织中肿瘤浸润性树突状细胞的表达水平、表型与病人临床病理特征的相关性比较/±s

表2 口腔部鳞状细胞癌50例肿瘤组织中肿瘤浸润性树突状细胞的表达水平、表型与病人临床病理特征的相关性比较/±s

类别TNM 分期Ⅰ/Ⅱ期Ⅲ期t 值P 值肿瘤最大直径≥5 cm＜5 cm t 值P 值分化程度中/低分化高分化t 值P 值例数 2 8 22 24 26 21 29肿瘤浸润性树突状细胞密度8.65±1.42 7.61±1.43 2.561 0.014 7.14±1.85 9.07±2.11 3.427 0.001 7.93±1.65 8.33±1.82 0.797 0.429 MHC-Ⅱ阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例/%7.46±1.95 5.31±1.80 4.042 0.000 5.42±1.84 7.73±1.85 4.423 0.000 6.44±1.97 6.87±1.91 0.775 0.442 CD54阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例/%8.21±1.86 6.62±2.11 2.784 0.008 6.34±2.06 8.47±1.91 3.794 0.000 7.11±1.86 7.75±1.83 1.212 0.231

2.2 两组病人肿瘤浸润性树突状细胞的表达水平及表型比较观察组肿瘤浸润性树突状细胞密度明显低于对照组，MHC-Ⅱ阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例明显低于对照组，CD54阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例明显低于对照组，见表3。

表3 口腔部鳞状细胞癌与口腔良性肿物病人各50例肿瘤浸润性树突状细胞的表达水平及表型比较/±s

表3 口腔部鳞状细胞癌与口腔良性肿物病人各50例肿瘤浸润性树突状细胞的表达水平及表型比较/±s

组别对照组观察组t 值P 值例数 5 0 50肿瘤浸润性树突状细胞密度9.68±2.38 8.27±2.11 3.135 0.002 MHC-Ⅱ阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例/%9.79±2.58 6.67±2.20 6.507 0.000 CD54阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例/%9.83±2.54 7.46±2.31 4.881 0.000

3 讨论

研究发现机体免疫系统的功能紊乱与恶性肿瘤的发生发展密切相关［9-10］，本研究探讨口腔部鳞状细胞癌病人肿瘤组织内肿瘤浸润性树突状细胞的表达情况，与良性肿物对照组相比，观察组病人的肿瘤浸润性树突状细胞的密度、MHC-Ⅱ阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例及CD54阳性肿瘤浸润性树突状细胞比例均明显下降，观察组病人TNM分期较高、肿瘤直径较大的病人上述指标下降更明显。

20 世纪30 年代加拿大研究人员首次提出树突状细胞这一名称，作为免疫系统内重要的组成部分，该类细胞具有强大的抗原呈递功能［11］，对肿瘤细胞具有较强的杀伤性，使体内共刺激分子能够大量表达、促进T淋巴细胞增殖分化［12-14］。研究发现，肿瘤浸润性树突状细胞在识别肿瘤组织的相关性抗原时能表达出MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子，诱发MHC-Ⅰ类限制性细胞毒性的T细胞免疫反应、MHC-Ⅱ类限制性CD4+T 辅助性细胞l 细胞相关反应等［15-16］。肿瘤浸润性树突状细胞分泌的主要细胞因子是白细胞介素1（IL-1）、白细胞介素12（IL-12）等，可致体内Th1/Th2 失衡，甚至出现Th1 细胞的漂移，促使大量细胞毒性T细胞的生成［17］。T淋巴细胞在肿瘤浸润性树突状细胞的促进下聚集于肿瘤组织周边，使抗血管生成的IFN-γ 和IL-12 等大量合成，减少肿瘤组织中血管的生成［18］。随着研究的不断深入，发现恶性肿瘤病人体内肿瘤浸润性树突状细胞表达水平下降，其中MHC-Ⅱ阳性及CD54阳性的肿瘤浸润性树突状细胞明显减少、不成熟的细胞增多，对机体免疫系统的抗原呈递、激活功能下降［19-20］，影响恶性肿瘤病人的预后水平，本研究的结果与前人研究成果一致，口腔部鳞状细胞癌病人癌组织内肿瘤浸润性树突状细胞的密度下降、MHC-Ⅱ阳性及CD54 阳性的细胞比例降低，且随着TNM 分期及肿瘤直径的增大，肿瘤浸润性树突状细胞的表达水平更低。

综上可见，口腔部鳞状细胞癌病人癌组织内肿瘤浸润性树突状细胞的表达水平降低，且与癌组织TNM分期、直径大小等有关。