HPLC法测定芍药花瓣中紫云英苷的含量

李洪芹，马昌豪，王泽海，罗盼生*

(1.菏泽学院，山东 菏泽 274015；2.菏泽市食品药品检验检测研究院，山东 菏泽 274015)

芍药(PaeonialactifloraPall.)是毛茛科芍药属多年生宿根草本植物，原产于东南亚，其根可以入药，是中药材白芍和赤芍的重要来源，具有重要的药用价值，同时具有较高的观赏价值[1]。菏泽作为芍药的四大主产区之一，具有悠久的种植历史，其品种多、花色丰富、花型多变。相关文献[2-4]研究表明芍药富含黄酮、单萜类、三萜及甾体类化合物，此前研究多集中芍药的根中的各类成分和药理作用，并未对花瓣的质量情况进行研究，在前期对芍药花瓣的指纹图谱研究基础上，采用高效液相色谱法对芍药花瓣中的紫云英苷含量进行测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-2030高效液相色谱仪、XS-105电子天平(梅特勒公司)、FRQ-1006HT超声波清洗器(杭州法兰特)

1.2 试药

紫云英苷(批号：CIV-471295、纯度为98.96%)购于斯坦福标准物质，乙腈(色谱纯，默克化工)、磷酸(色谱纯，天津科密欧)。

1.3 样品

样品来自于菏泽曹州牡丹园，经菏泽市食品药品检验检测研究院罗盼生主任医师鉴定为毛茛科植物芍药的花瓣。

2 方法与结果

2.1 方法学验证

2.1.1 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-3柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。

流动相：以乙腈为流动相A，0.1%磷酸水溶液为流动相B，按照表1进行梯度洗脱。

表1 梯度洗脱

检测波长：347 nm，流速：1 mL/min。理论塔板数按紫云英苷峰计算，应不得低于3000，结果见图1。

图1 HPLC色谱图

2.1.2 供试品溶液制备

称取芍药花瓣粉末(新鲜花瓣，50℃干燥至恒定重量，粉碎，过3号筛)1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入65%乙醇50 mL，称定重量，超声处理30 min(功率250 W，频率40 kHz)，冷却至室温，用65%乙醇补足失重，滤过，取续滤液，即得。

2.1.3 对照品溶液制备

称取紫云英苷对照品8.42 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，作为储备液，精密量取储备液3 mL置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，作为对照品溶液。

2.1.4 线性关系考察

精密量取紫云英苷对照品储备液3 mL至10 mL量瓶中，在2.1.1色谱条件下分别进样2、8、10、15、20、30 μL，以峰面积值为纵坐标(y)，进样量(μg)为横坐标(x)绘制标准曲线，并进行回归，得标准曲线为y=18353.21x-16289.01(r=0.9997)，结果紫云英苷在0.05～0.75 μg范围内线性关系良好。

2.1.5 精密度考察

在2.1.1色谱条件下，精密吸取对照品10 μL，连续进样6次，测定峰面积，紫云英苷的RSD为0.63%，表明仪器具有良好的精密度。

2.1.6 重复性考察

取芍药干燥花瓣的粉末，按照2.1.2项下供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液，参照2.1.1项色谱条件下测定，结果紫云英苷的质量分数的 RSD为1.20%。表明该方法具有良好的重复性。

2.1.7 稳定性考察

取供试品溶液一份，分别在2.1.1项色谱条件下于2、12、36、48 h进样，测定紫云英苷峰面积，其RSD为0.81%，表明供试品溶液在48 h内基本稳定。

2.1.8 加标回收率考察

取本次芍药花瓣(紫云英苷含量为0.092%)粉末适量，称取6份，每份0.5 g，精密称定，每份精密加入对照品储备液(0.8332 mg/mL)0.50 mL，参照2.1.2项方法制备供试品溶液，精密吸取上述溶液10 μL，测定加样回收率，结果表明该方法的准确度符合要求。结果见表2。

表2 加标回收率结果(n=6)

2.2 结果

取3份样品，分别按2.1.2项下制备样品溶液，照2.1.1项下色谱条件测定紫云英苷含量，3份样品含量分别为0.092%、0.086%、0.090%。

3 讨论

紫云英苷在347 nm处有最大的紫外吸收，故选择347 nm为检测波长。前期考察了甲醇水系统、乙腈水系统、乙腈磷酸水系统和乙腈甲酸水系统，最终选择乙腈磷酸水系统梯度洗脱，保证紫云英苷的分离度和理论塔板数均符合要求。

近年来，随着对传统非药用部位资源性化学成分的深入研究，传统非药用部位的潜在资源价值逐渐显现并越来越引起人们的高度重视，芍药是中药材赤芍和白芍的来源之一，其花瓣在观赏期过后自然掉落，多作为废弃物进行处理，并未对其再利用。前期研究发现芍药花花瓣中总黄酮含量较高，黄酮具有抗氧化、抗衰老等多种功效，紫云英苷具有抗氧化、促进成骨细胞增殖和分化、对肿瘤细胞的移至作用等药理作用[5-6]，表明芍药花瓣具有潜在的经济价值[7]，对其化学成分及相关药理作用进行深入研究，可以为后续开展芍药花瓣的再利用研究提供技术参考，为芍药种植产业的深加工提供指导方向，为药材生产过程产生的资源储量大、生产成本低的非药用部位及深加工产业化过程产生的药渣等副产物的利用形成产业化、规模化奠定理论基础。