靶向配体DPE-PEG2000-TAT的合成
2020-10-21王姣牟萍李培峰
王姣?牟萍?李培峰
摘要:目的:将TAT修饰在DSPE-PEG2000-NHS长链的末端,反应合成靶向化合物DSPE-PEG2000-TAT,来提高药物靶向性。结果:采用此方法能够很好的制得功能性磷脂共轭化合物DSPE-PEG2000-TAT,并且操作简单,用时少,减少浪费节约成本。
关键词:穿膜肽;靶向配体
将药物制成靶向制剂,不但可以提高药物在肿瘤部位的浓度,使药物的功效增大;还可以降低其他部位的血药浓度,使药物的副作用降低,从而使药物的利用率大大增加[1]。细胞穿膜肽几乎能够穿过所有与之相接触的细胞胞膜,并且对细胞膜没有损伤作用[2]。最理想的方法是将靶头与PEG长链的末端相连,既可以起到长循环的作用,又可以有效的靶向作用到肿瘤细胞[3, 4]。
1 试验方法
按照摩尔比为1:1的比例称取功能化磷脂材料DSPE-PEG2000-NHS和TAT各2mg置于西林瓶中,加入2ml的无水DMF溶解,利用N-甲基吗啉调节酸碱度至pH值为9.0。室温搅拌36小时后转移至透析袋中(MWCO, 3500 Da),用去离子水透析36小时,除去反应溶剂,将样品冷冻干燥后放于-20℃冰箱中保存备用。
2 试验结果
2.1 MALDI-TOF-MS测定
本试验通过MALDI-TOF-MS测定产物的分子量,进而来确定产物。本试验使用2, 5-二羟基苯甲酸作为MALDI-TOF-MS法的基质。结果见图1。
如Figure 1 A和 Figure 1 B所示,DSPE-PEG2000-NHS的平均相对分子质量约为2895.35 Da,反应产物中DSPE-PEG2000-TAT的平均相對分子质量约为4290.54 Da。
2.2讨论
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)简称飞行时间质谱常用于混合物、生物大分子的测定[5]。通过上述方法测得了DSPE-PEG2000-NHS与DSPE-PEG2000-TAT的平均相对分子质量,由反应路线可知,合成产物的分子量计算公式如下:MDSPE-PEG-TAT=MDSPE-PEG-NHS + MTAT-MNHS。DSPE-PEG2000-TAT与DSPE-PEG2000-NHS之间的分子量差约为1395.19Da,再考虑到发生合成反应时有基团-NHS离去,与TAT的分子质量1555.16 Da相近而吻合,从而判定TAT与DSPE-PEG2000-NHS发生反应的摩尔比例是1:1。
3.结果
本试验成功合成了一种靶向性载体材料DSPE-PEG2000-TAT,可将其修饰于脂质体表面作为靶向分子,制备TAT修饰他莫昔芬与紫杉醇脂质体。通过MALDI-TOF-MS对合成产物DSPE-PEG2000-TAT进行测定,结果符合实际操作的要求,可以证明本试验采用此方法操作简单,用时少,减少浪费节约成本,能够很好的制得功能性磷脂共轭化合物DSPE-PEG2000-TAT。
参考文献:
[1]孙春萌.细胞穿膜肽的研究进展[J].中国药学杂志.2013,48(14):1143-1147.
[2]范博.细胞穿膜肽在药物递送系统中的研究进展[J].药学学报.2016,51(2):264?271.
[3] Shin M C,Zhang J,Min K A,et al.Combination of antibody targetingand PTD-mediated intracellular toxin delivery for colorectal cancer therapy[J].J Control Release,2014,194:197-210.
[4] Dietz G P,B?hr M.Delivery of bioactive molecules into the cell:the Trojan horse approach[J].Mol Cell Neurosci,2004,27(2):85-131.
[5] Lee ES,Gao Z,Kim D,et al.Super pH-sensitive multifunctional polymeric micelle for tumor pH(e)specific TAT exposure and multidrug resistance[J].J Control Release,2008,129:228?236.
通讯作者:牟萍