固相萃取-超高效液相色谱法测定菜籽油中的三种抗氧化剂

2020-10-20杨眉宋明雄业润泽

粮食科技与经济 2020年7期

杨眉宋明雄业润泽

摘要：本文建立了固相萃取结合超高效液相色谱测定粮油中的三种抗氧化剂（BHT、BHA、TBHQ）的方法。样品经乙腈提取和C18固相萃取柱净化，用全自动平行浓缩仪蒸干，用乙腈定容，过滤后进入高效液相色谱测定，外标法定量。结果表明，三种抗氧化剂线性关系良好（R>0.999），加标回收率为100.4%～100.8%，精密度RSD为1.53%～1.63%。本方法简便快捷，结果更加准确，并成功应用于实际粮油样品中三种抗氧化剂的测定。

关键词：固相萃取-超高效液相色谱法;菜籽油;固相萃取;三种抗氧化剂

中图分类号：TS227

作者简介：杨眉，女，硕士，研究方向为粮油监测分析工作。

现如今加工业发展迅速，大部分食品及药品中都含有人工合成抗氧化剂。其中，丁基羟基茴香醚（butylated hydroxyanisole，BHA）、二丁基羥基甲苯（butylated hydroxytoluene，BHT）和特丁基对苯二酚（tert-butyhydroquinone，TBHQ）是我国允许使用的三种食品中抗氧化剂。抗氧化剂作为食品添加剂，可以帮助对抗食品变质，防止油脂及制品、饼干、罐头等含油脂食品的酸败。经调查和统计研究，发现食品中添加抗氧化剂会导致人体患上前列腺癌等一系列相关疾病，因此对这三种抗氧化剂的使用有着一定的限制。近年来，对食品中抗氧化剂的分析检测有不少研究报道[1-5]，随着现代分析检测技术的发展，目前多为气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法和液相色谱-质谱法等[6-8]。这些方法大多数涉及复杂的样品前处理，操作比较复杂，耗费试剂较多，处理过程容易造成待测成分损失而使测定结果产生误差，样品量大时，耗费时间较多，难以满足日常工作需要，因此寻求一个简便而快速的测定这三种物质的分析方法十分有必要。本文在总结国内外各种分析方法的基础上建立一种简单实用，能够同时测定粮油中BHA、BHT和TBHQ的方法，该方法简便可靠，便于实验室日常操作。

1 材料与方法

1.1 仪器

Ultimate 3000高效液相色谱仪：配有紫外检测器和变色龙工作站，赛默飞世尔科技（中国）有限公司;C18色谱柱：250mm×4.6mm×5μm，美国安捷伦公司;Raykol Fotector Plus全自动固相萃取仪、Raykol EVA-60全自动氮吹平行浓缩仪：睿科集团股份有限公司;离心机：转速不低于4 000r/min，北京时代北利离心机有限公司;分析天平：感量0.1mg和0.01mg，梅特勒-托利多。

1.2 主要试剂和材料

1.2.1 试剂

乙腈（色谱纯）、甲酸（色谱纯）、甲醇色谱纯）、正己烷（分析纯）、无水硫酸钠（分析纯）、BHA、BHT、TBHQ标准品均购于北京坛墨质检公司。

1.2.2 材料

固相萃取柱：C18柱，2 000mg/12mL。

2 试验部分

2.1 样品前处理

提取：称取1g新鲜滇雪菜籽油试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，并添加5mL乙腈饱和正己烷溶液溶解样品，振荡10min后，静置15min。再加入5mL正己烷饱和乙腈溶液涡旋提取6min，4 000r/min离心6min，样品分层后，收集乙腈层于25mL试管中，再重复使用6mL正己烷饱和乙腈溶液提取2次，合并提取液，待净化，同时做空白试验。净化过程：在C18固相萃取柱中装入2.5g无水硫酸钠，用5mL甲醇活化，再以10mL乙腈平衡萃取柱，弃去流出液，将之前合并的提取液上柱，弃去流出液后，再以5mL乙腈和甲醇的混合溶液洗脱，收集所有洗脱液于试管中，50℃氮吹至干。加入2mL乙腈定容，用0.22μm有机相微孔滤膜过滤，用于测定。

2.2 标准溶液的配制

2.2.1混合标准中间液

取三种抗氧化剂的单标，用乙腈稀释。中间储备液的浓度为1 000mg/L。中间储备液在-20℃冰箱中冷冻保存。

2.2.2 工作标准溶液

取适量的混合标准中间液，依次稀释成浓度为2.0mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L、10.0mg/L的工作标准溶液。

2.3 仪器方法

2.3.1 液相色谱方法

色谱柱：C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm;流动性A：0.5%甲酸水溶液，流动相B：甲醇;洗脱梯度：0～2min，流动相A 45%，2～8min，流动相A从45%降至5%，8～14min，流动相A 5%，14～14.1min，流动相A从5%增至45%;柱温：35℃;进样量：50;检测波长：280nm。

3 试验结果和讨论

3.1 标准曲线

以浓度为2.0mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L、10.0mg/L混标溶液，建立标准曲线，以峰面积对应各标准物质的质量浓度，进行线性回归，试验结果呈现良好的线性关系，相关系数均大于0.999，三种抗氧化剂的线性方程和色谱图见表1和图1～图2。

3.2 方法精密度

配制浓度为8.0mg/L的三种抗氧化剂混合溶液，同条件下进样7次得出RSD在1.53%～1.63%，7次平行试验数据和色谱图见表2和图3。

3.3 样品加标回收率

选择新鲜的滇雪菜籽油作为样品，检测其中含有的BHA、BHT、TBHQ，试验结果表明新鲜的滇雪菜籽油中未含有三种抗氧化剂。以此菜籽油为空白样品基质，进行样品加标试验，测定回收率，平行测定4次，空白样品加标回收率在100.4%～100.8%，结果见表4，色谱图见图4～图6。

4 结束语

本文建立了固相萃取-超高效液相色谱法测定粮油中BHA、BHT、TBHQ三种抗氧化剂的方法，该方法前处理操作简单方便，减少了有机溶剂的使用和接触，回收率好（100.4%～100.8%），精密度高（1.53%～1.63%）、方便快捷，能满足粮油样品中三种抗氧化剂的检测。

参考文献：

[1]林春晓，钟伟燕，李红华，等.食用油脂中抗氧化剂BHA?BHT检测样品的前处理方法[J].职业与健康，2005，5（21）：179-181.

[2]菜新华，钱小君.油脂抗氧化剂的研究进展[J].粮食与食品工业，2013，20（4）：33-36.