荧光PCR探针熔解曲线技术检测结核分枝杆菌对五种抗结核药物耐药性的研究

焦娜

【摘 要】 目的：对荧光PCR探针熔解曲线技术检测结核分枝杆菌对五种抗结核药物的耐药性进行研究。方法：本次研究从本院在2019年1月到2019年12月间收治的患者中进行抽样，选取了60株结核分枝杆菌临床分离株，采用PCR探针溶解曲线法，对结核分枝杆菌对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇以及福喹诺酮类药物的耐药性进行检测。结果：在采用比例法药敏试验作为金标准之后，在采用荧光PCR探针熔解曲线法进行检测之后发现，结核分枝杆菌对利福平耐药性的敏感度为95.45%，特异度为94.35%，一致率为94.67%，Kappa值为0.87;对乙胺丁醇耐药性的敏感度为85.74%，特异度为92.53%，一致率为91.45%，Kappa值为0.68;对异烟肼耐药性的敏感度为90.56%，特异度为96.14%，一致率为94.22%，Kappa值为0.88;对氟喹诺酮类药物耐药性的敏感度为93.65%，特异度为96.24%，一致率为956.04%，Kappa值为0.82;对链霉素耐药性的敏感度为89.67%，特异度为92.68%，一致率为92.17%，Kappa值为0.75。结论：在当前的临床中，通过采用荧光PCR探针溶解曲线法对结核分枝杆菌对五种药物耐药性进行检测，具有良好的效能，能够为医生的用药提供必要的指导。

【关键词】 结核分枝杆菌;耐药性;荧光PCR探针熔解曲线技术

结核病作为一种严重的传染病，对人们的生命安全产生了巨大的威胁。而随着抗结核药物的广泛应用，许多结核病患者出现了耐药性，这就对疾病的预防与治疗带来了不利的影响[1]。耐多药结核病指的是患者同时对两种或以上的一线抗结核药物产生耐药性，使得患者的治疗成本升高，延长治疗周期，对治疗效果产生了严重的影响。这就需要对患者进行治疗的过程中，必须要进行准确的诊断与治疗，从而为患者的疾病治疗提供可靠保障。因此，本研究在选取60位患者作为样本的基础上，对荧光PCR探针熔解曲线技术检测结核分枝杆菌对五种抗结核药物的耐药性进行研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本次研究从本院在2019年1月到2019年12月间收治的患者中进行抽样，选取了60株结核分枝杆菌临床分离株。在此次研究中选取的临床分离株，在进行硝基苯甲酸生长试验进行鉴定之后，均为结核分枝杆菌[2]。在研究当中，使用的试剂与仪器为RFP、EMB、INH、Sm、左氧氟沙星以及PNB含药培养基，同时选用4%的NaOH溶液以及各种耐药突变检测试剂盒。选用的仪器为SLAN-96S型实时荧光定量PCR仪以及BY-R18型低温高速离心机。

1.2 方法

在此次研究当中，需要按照《结核病诊断实验室的检验规程》，采取简单法分枝杆菌固体培养，使用移液枪，吸取1-2ml的标本，放入到离心管当中，然后加入1-2倍4%的NaOH溶液，进行震荡之后，得到痰标本液化，在放到室温环境当中放置15min，将其置入到37℃的恒温培养箱当中，孵育4-8周[3]。采用荧光PCR探针溶解曲线法耐药突变检测试剂盒中的相关说明书，开展相应的检测工作[4]。

1.3 统计学方法

采用的统计学处理工具为SPSS18.0，使用比例法药敏试验作为金标准，对荧光PCR探针溶解曲线法的敏感度、特异度、一致率以及Kappa值进行计算。

2 结果

在采用比例法药敏试验作为金标准之后，在采用荧光PCR探针熔解曲线法进行检测之后发现，结核分枝杆菌对利福平耐药性的敏感度为95.45%，特异度为94.35%，一致率为94.67%，Kappa值为0.87;对乙胺丁醇耐药性的敏感度为85.74%，特异度为92.53%，一致率为91.45%，Kappa值为0.68;对异烟肼耐药性的敏感度为90.56%，特异度为96.14%，一致率为94.22%，Kappa值为0.88;对氟喹诺酮类药物耐药性的敏感度为93.65%，特异度为96.24%，一致率为95.04%，Kappa值为0.82;对链霉素耐药性的敏感度为89.67%，特异度为92.68%，一致率为92.17%，Kappa值为0.75。

3 讨论

耐多药结核病指的是患者同时对两种或以上的一线抗结核药物产生耐药性，使得患者的治疗成本升高，延长治疗周期，对治疗效果产生了严重的影响[5]。在采用比例法药敏试验作为金标准之后，在采用荧光PCR探针熔解曲线法进行检测之后发现，结核分枝杆菌对利福平耐药性的敏感度为95.45%，特异度为94.35%，一致率为94.67%，Kappa值为0.87;对乙胺丁醇耐药性的敏感度为85.74%，特异度为92.53%，一致率为91.45%，Kappa值为0.68;对异烟肼耐药性的敏感度为90.56%，特异度为96.14%，一致率为94.22%，Kappa值为0.88;对氟喹诺酮类药物耐药性的敏感度为93.65%，特异度为96.24%，一致率为95.04%，Kappa值为0.82;对链霉素耐药性的敏感度为89.67%，特异度为92.68%，一致率为92.17%，Kappa值为0.75。

综上所述，在当前的临床中，通过采用荧光PCR探针溶解曲线法对结核分枝杆菌对五种药物耐药性进行检测，具有良好的效能，能够为医生的用药提供必要的指导。

参考文献

[1] 李智颖， 卢楠， 魏家玮， et al. Sigma E基因对耻垢分枝杆菌五种药物敏感性的影响及机制研究[J]. 中国人兽共患病学报， 2019， 35（2）：131-137.

[2] 刘艳， 古丽比克·木拉提， 玛力亚木·阿布力提甫， et al. 荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药基因的结果分析[J]. 中国防痨杂志， 2018（9）.

[3] 马进宝， 杨翰， 任斐， et al. 三种分子生物学方法检测结核分枝杆菌耐药性的效能分析[J]. 中国防痨杂志， 2019， 41（4）.

[4] 杨敏， 于潞， 吴长新， et al. 高分辨率熔解曲線检测结核分枝杆菌对利福平耐药性研究[J]. 中国预防医学杂志， 2019（3）：161-164.

[5] 贺楚峰， 冯永， 冯永， et al. 实时荧光PCR熔解曲线法在非综合征型耳聋基因检测中的应用研究[J]. 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志， 2019， 54（4）：286.