猪流行性腹泻与链球菌混合感染诊断分析

赵海忠，李良华，宋忠旭，孙 华，彭先文，梅书棋

（湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北 武汉 430064）

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV）引起的猪的一种急性、高度接触性肠道传染病，临床上以急性肠炎和伴有水样腹泻、呕吐、脱水迅速、食欲减退为特征。PED于1971年在英格兰首次被发现，20世纪80年代初我国陆续发生本病。2010年10月以后，新的高毒力PEDV毒株引起的PED在全国范围内暴发流行，以各个年龄段的猪均可发病和哺乳仔猪高死亡率为特征，给养猪产业带来了巨大的经济损失[1-2]。

猪链球菌病（Swine streptococcosis）是由多种致病性猪链球菌（Streptococcus suis）引起的一种重要的人畜共患病。猪链球菌病一年四季均可发生，无明显的发病季节，但在天气闷热的夏秋季节为高发期，3～12周龄的仔猪最易感，多呈地方性流行，其在临床上可分为败血症型、脑膜炎型、关节炎型、淋巴结脓肿型等。猪链球菌病是严重危害当前养猪生产的重要细菌类疾病，给养猪业造成较大经济损失[3]。

2019年12月末，湖北某规模化猪场产房仔猪出现吐奶、水样腹泻、脱水等症状，发病率达90%，死亡120余头。笔者经过严谨了解发病情况，结合流行病学调查、临床剖检初步诊断为PED，采样送畜牧兽医研究所实验室进行病原学诊断，实验室检测结果表明PEDV和S.S混合感染可能是引起本次仔猪腹泻的主要原因。采取综合防控措施后，腹泻疫情得到有效控制。本例PEDV混合感染S.S具有实践特异性，其诊断、治疗的有效性对养猪同行具有良好的参考借鉴。

1 发病情况

2019年12月末，气温骤降，该猪场产仔单元1头初胎母猪所产仔猪食欲下降，精神萎靡，先出现呕吐，继而水样腹泻，肛门失禁，边走边拉，粪便中含有小的未消化的凝乳块，呈黄色或白色，粪便恶臭。同产仔单元其它仔猪腹泻快速蔓延，发病率达90%，部分仔猪腹泻脱水、皮肤充血、潮红，共济失调，黏膜发绀，四肢内侧、腹下皮肤发紫，跛行，不愿站立，触压有热痛，驱赶时尖叫，少量病猪出现角弓反张等神经症状。初胎母猪所产仔猪腹泻更严重，部分仔猪脱水死亡，7日龄内仔猪病死率可高达100%（图1）。

2 临床剖检

对临床上6头严重腹泻濒临死亡仔猪进行解剖，其主要病变为：胃底部溃疡、充满大量的未消化的奶酪样物质，肠管呈半透明状，肠壁扩张变薄，内有黄色黏稠液体（图2），肠系膜呈树枝状充血、出血、淋巴结呈索状肿大，脾稍肿大。部分病例可见心包积液增多、呈淡淡的青色，肺脏边缘有黄色纤维素性渗出物，肺间质增宽，肾脏肿大。分别无菌采集发病猪肠道、淋巴结、肝脏、脾脏、肺脏、粪便等病料冷藏保存后立即送实验室进行检测。

3 实验室诊断

3.1 病毒RT-PCR检测

样品送实验室进行腹泻相关病原学检测。采用RT-PCR方法检测PEDV、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（PoRV）。采用多重 RT-PCR方法扩增PEDV M基因、TGEV N基因和PoRV的VP7基因，样品中有PEDV存在时，可扩增出668 bp的片段；样品中有TGEV存在时，可扩增出528 bp的片段；样品中有PoRV存在时，可扩增出333 bp的片段[4]。RT-PCR扩增产物电泳结果见图3，检测结果显示，6份样品中5份扩增出PEDV的M基因668 bp的片段，未扩增出TGEV的N基因528 bp的片段和PoRV的VP7基因333 bp的片段，表明检出PEDV阳性比例为83.3%，TGEV、PoRV均为阴性。

3.2 细菌分离培养

将样品接种血清琼脂平板进行病原菌分离培养，37℃恒温箱中培养24 h，观察菌落形态，菌落呈圆形、表面光滑、中央隆起、边缘整齐、透明、灰白色、针尖大的露珠状小菌落，并产生明显的β型溶血。用接种环挑取典型菌落进行革兰氏染色、镜检，革兰氏染色阳性，菌体呈球形或椭圆形，并呈短链状或成对或单个排列，见图4。

3.3 动物致病性试验

挑取上述单个菌落接种于THB培养基中做增菌培养，37℃温箱培养24 h，将培养菌液混合后腹腔注射10只SPF级小鼠，0.2 mL/只，另设10只小白鼠生理盐水对照，相同条件下饲养，连续观察7 d，攻菌12 h后试验组部分小鼠出现食欲下降、精神萎靡、行动迟缓等临床症状，试验结束共有7只小鼠死亡，对照组10只小鼠均健活。试验结果表明，该链球菌分离菌株具有较强的致病性。

3.4 药敏试验

采用纸片扩散法进行药敏试验。挑取头孢噻呋、阿莫西林、氨苄西林等20种抗生素药敏片，用灭菌镊子把药敏片均匀贴在涂有菌液的平板上，于37℃静置培养24 h，取出观察并记录药敏片抑菌圈直径[5]。药敏性试验结果见表1。结果表明，分离的菌株对氨苄西林、阿莫西林、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、头孢噻呋高度敏感。对链霉素、磺胺嘧啶、环丙沙星、恩诺沙星、四环素、多西环素、多黏菌素B、复方新诺明、林可霉素、庆大霉素、大观霉素耐药。

表1 链球菌药敏性试验结果

4 诊断结果

综合场内发病情况、临床剖检、病原学检测，此次仔猪腹泻疫情主要为PEDV与S.S混合感染所致。

5 综合防控

5.1 紧急免疫

全群种猪接种猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗（科腹净）1头份+猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗（科泻宁）2 mL，一边一针，间隔2周后，加强免疫科泻宁2 mL；2～3日龄哺乳仔猪同步免疫科泻宁1 mL。同时使用猪链球菌三价灭活疫苗2 mL对猪群进行免疫。

5.2 生物安全措施

对发病猪舍进行隔离，产房腹泻母猪提前断奶，禁止将腹泻后未完全康复的母猪带入产房；及时处死无治疗价值的病猪，对于15日龄以上发病仔猪立即采取母子分离寄养于健康哺乳母猪，用干粉消毒剂掩盖仔猪的呕吐物和拉稀的粪便，并及时清理，降低环境载毒量，切断水平感染[6]。加强消毒，场区大环境每日消毒1次，舍内使用“仔力健”干粉消毒剂喷粉消毒，过道铺撒石灰，保持舍内干燥。发病单元清空后，及时清洗消毒，干燥后再用甲醛熏蒸，空栏10 d以上。

5.3 对症治疗

对腹泻仔猪主要应用抗生素和口服补液盐来进行对症治疗，使用1%左右口服补液盐（添加适量蒙脱石散）3～10 mL，较严重病例同时肌注2～5 mL注射液（黄芪多糖+头孢），连用3 d；同窝未发病仔猪预防用药1次，剂量减半；严重脱水仔猪及时进行补液（维生素C 1 mL+复合维生素B 1 mL+恩诺沙星1～3 mL+5%葡萄糖盐水20～60 mL）。同时在饲料中添加药物，每吨分别添加10%阿莫西林600 g+复方黄芪多糖500 g+电解质多维1 000 g；恢复阶段仔猪料中添加益生菌、奶粉等，修复胃肠道功能，提高胃肠道健康，增加采食量，促进仔猪生长。

5.4 精细化饲养管理

首先改善饲养环境，保持舍内环境温湿度在猪只适宜范围内，注意通风换气，保持产房相对干燥，营造舒适猪舍小环境。其次合理有效护理，产前2 h预热保温箱，使箱内温度33℃左右，后期温度适当降低。提供优质全价饲料，保持临产母猪良好体况，保证母猪产后乳汁充足；用温热毛巾热敷母猪乳头，辅助仔猪固定奶头，及时吃够初乳。最后，做好猪群管理，实行全进全出和批次化生产，降低饲养密度。

6 讨论

6.1 科学合理免疫是防控PED最有效措施之一。免疫后产生高水平保护性IgA抗体是PED免疫成功的关键[7]，需定期开展免疫抗体监测，掌握猪群健康动态。该场免疫程序不科学，猪群未产生足够的保护性免疫抗体，同时气温骤降冷应激，诱发猪群发生PEDV和S.S混合感染。科学合理的免疫程序尤为重要，选择与本场匹配度高的PED疫苗，采取普免+跟胎免疫相组合免疫方案，每年9月份普免科腹净1头份+科泻宁2 mL，间隔4周后加强免疫科泻宁2 mL；母猪产前40 d免疫科腹净1头份+科泻宁2 mL，一边一针，产前20 d加强免疫科泻宁2 mL。活苗与灭活苗联合使用临床保护效果较好[8]，母猪在临产时初乳中含抗PEDV抗体最高，刚出生的仔猪吃了初乳后可获得高滴度母源抗体，从而有效防止PED发生。

6.2 定期进行病原监测和抗体检测，建立预警机制。引起仔猪腹泻的因素很多，一旦发现产房仔猪腹泻，尽快采样送检，快速进行病原学鉴别诊断，确定发病原因，采取针对性防控措施。最新流行病学调查研究结果显示，PEDV、S.S等病原体常常发生混合感染，导致猪群病死率上升[9]。该猪场送检的病料中检测出PEDV和S.S，S.S感染可能破坏了仔猪的免疫系统、加重了PED疫情并且降低了PED疫苗免疫效果，这可能是哺乳仔猪长时间腹泻并造成大量死亡的主要原因[10]。因此，在混合感染高发的态势下，采取科学有效的综合防控措施更为重要，特别要做好初胎母猪管理。对猪群定期采集样品进行监测，优化免疫程序，加强生物安全管理，做好饲养管理和卫生消毒工作，定期进行猪群保健，将疾病发生的几率降低到最低限度，减少不必要的经济损失。

6.3 猪链球菌的耐药特性呈上升趋势，对很多常规药物具有耐药性。本研究发现，链球菌分离菌株对11种临床常用药物全部耐药，其耐药程度相当严重，猪链球菌耐药已成为全球性问题。李文娴等报道2017年河南省8株猪链球菌对恩诺沙星、环丙沙星高度敏感[11]，但本次试验链球菌分离菌株对环丙沙星、恩诺沙星均产生了耐药，需要引起养殖场重视。临床防治猪链球菌病时，应根据本场药敏试验结果选择高敏药物，科学、规范、合理用药。