不同检测时间下种猪常温精液精子活力的研究

李 平，唐明宗，申金容，陈大芳，龙清孟，曾 金，张云淞，时 颖，吴光松，李 维

（1.贵州省种畜禽种质测定中心，贵州 贵阳 550018；2.思南县畜牧发展中心，贵州 铜仁 565100；3.开阳县农业农村局，贵州 贵阳 550300；4.贵州省遗传资源管理站，贵州 贵阳 550001）

随着人工授精技术在现代养猪业中发挥出巨大的作用[1]，猪人工授精的成败在很大程度上取决于精液的质量，精子活力是评价精液品质的重要指标[2]。精子的活力是指有效精子占总精子数的百分率，是鉴定精液品质最主要的指标之一，一般情况下，正常精液的精子活力不应低于60%。种公猪精子的活力直接体现繁殖力的强弱，高质量的精液，能够保证母猪的受孕率，降低种猪采精频率，从而延长公猪的使用年限[3]。本研究以国外品种和地方品种为研究对象，检测不同品种猪的精子活力，分析在不同检测时间下精子活力，不同品种猪中差异性的原因。测定猪的精子活力有助于客观评价公猪的精液质量。

1 材料与方法

1.1 试验时间与地点

种猪常温精液检测于2020年6月在贵州省种畜禽种质测定中心进行精液检测室测定。

1.2 试验动物

试验选择健康无疾病的成年种公猪，并具有完整的系谱档案，杜洛克、长白、大约克夏、柯乐猪4个品种各5头份为试验对象。

1.3 仪器设备

精子质量分析系统（Minitube）、恒温预热板、载玻片、盖玻片、移液枪（Eppendorf）。

1.4 检测环境

检测室保持清洁卫生，摆放整齐、安静、无异味。室内配备控温、控湿设施，保证检测环境要求：温度控制在20～22℃，湿度控制在55%～65%。

1.5 试验方法

取两个剂量的常温精液轻轻摇动均匀，分别用移液器吸取精液约20 μL置于载玻片上并加盖玻片，在37℃条件下，用显微镜（200～400倍）观察精子活力。观察每个样片不同液层内的精子运动状态，进行全面评定。计算公式如下：

M为活力；n1为第一视野活力；n2为第二视野活力；n3为第三视野活力。

1.6 数据统计与分析

数据统计采用Excel表格处理，分析采用SPSS软件，检测数据以平均值±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 7 h种猪常温精液精子活力的比较分析

杜洛克、长白、大约克夏、柯乐猪种猪常温精液各5头份在17℃条件下放置7 h精子活力，37℃恒温载物台上苏醒不同时间精子活力比较分析，检测结果见表1。由表1可知，杜洛克猪、长白猪、大约克夏猪、柯乐猪苏醒5 min精子活力高于苏醒3 min，杜洛克猪、长白猪、大约克夏猪、柯乐猪苏醒3 min精子活力高于苏醒1 min。苏醒5 min精子活力顺序依次为大约克夏＞柯乐猪＞杜洛克＞长白。

表1 7 h精子活力的检测

2.2 24 h种猪常温精液精子活力的比较分析

杜洛克、长白、大约克夏、柯乐猪种猪常温精液各5头份在17℃条件下放置24 h精子活力，37℃恒温载物台上苏醒不同时间精子活力比较分析，检测结果见表2。由表2可知，杜洛克猪、长白猪、大约克夏猪、柯乐猪苏醒5 min精子活力高于苏醒3 min，杜洛克猪、长白猪、大约克夏猪、柯乐猪苏醒3 min精子活力高于苏醒1 min。苏醒5 min精子活力顺序为大约克夏＞长白＞杜洛克＞柯乐猪。

表2 24 h精子活力的检测

2.3 48 h种猪常温精液精子活力的比较分析

杜洛克、长白、大约克夏、柯乐猪种猪常温精液各5头份在17℃条件下放置48 h精子活力，37℃恒温载物台上苏醒不同时间精子活力比较分析，检测结果见表3。由表3可知，杜洛克猪、长白猪、大约克夏猪、柯乐猪苏醒5 min精子活力高于苏醒3 min，杜洛克猪、长白猪、大约克夏猪、柯乐猪苏醒3 min精子活力高于苏醒1 min。苏醒5 min精子活力顺序为大约克夏＞长白＞杜洛克＞柯乐猪。

表3 48 h精子活力的检测

2.4 72 h种猪常温精液精子活力的比较分析

杜洛克、长白、大约克夏、柯乐猪种猪常温精液各5头份在17℃条件下放置72 h精子活力，37℃恒温载物台上苏醒不同时间精子活力比较分析，检测结果见表4。由表4可知，杜洛克猪、长白猪、大约克夏猪、柯乐猪苏醒5 min精子活力高于苏醒3 min，杜洛克猪、长白猪、大约克夏猪、柯乐猪苏醒3 min精子活力高于苏醒1 min。苏醒5 min精子活力顺序为大约克夏＞长白＞杜洛克＞柯乐猪。

表4 72 h精子活力的检测

3 讨论

根据《猪常温精液生产与保存技术规范》（GB/T 25172—2010）和《种猪常温精液》（GB 23238—2009）中的定义，精子活力是指在37℃环境下直线前进运动精子数占总精子数的百分率[2]。本研究以不同时间下检测进行判断精子活力，通过试验研究发现精子在37℃下苏醒5 min，精子活力最佳，3 min次之，1 min最差。精子在17℃下保存是处于休眠状态，配种利用进入体内是37℃环境下，通过试验可以判断精子在37℃环境下要苏醒一段时间才可达到最好活力效果，在生产中可以通过先预热常温精液后再进行输配。

本试验采用了4个品种进行对比，无论哪一个猪种，苏醒5 min的精子活力高于苏醒3 min的，苏醒3 min的精子活力高于苏醒1 min的。并且4个品种的精子活力是大约克夏优于其他品种，这可能与大约克夏高繁殖力特性有关。本试验中，根据精子活力检测，大约克夏精子活力最高，其次为长白、杜洛克、柯乐猪，大约克夏猪精子活力高于其他2个外来品种和1个地方品种，可能与大约克夏有中国地方猪的血统有关。当然，不同品种的种公猪的精子活力会因品种、季节、饲养管理等因素有所差异，并且这种差异是客观存在的[4]。关于公猪精子其他运动参数比较以及不同条件下精子相关参数的变化等有待进一步研究和探讨，不同品种的种公猪由于具有的遗传特性区别，其精液品质间的差异是客观存在的。

4 结论

在37℃下苏醒5 min检测杜洛克猪、长白猪、大约克夏猪、柯乐猪精子活力，精子活力效果最高。37℃苏醒5 min精子活力高于苏醒3 min精子活力，37℃苏醒3 min精子活力高于苏醒1 min精子活力，本试验以国外品种和地方品种进行研究，无论哪一个猪种，苏醒5 min的精子活力是最佳的。此研究为检验检测人员在检测精子活力时提供方法参考。对比4个品种精子活力发现，大约克夏猪均优于其他3个品种，本研究得出不同品种猪精子活力的差异为后续的研究提供参考。