一例猪瘟的诊断与分析

熊 杰，蒋成伟，张昕彤，蒲杨柳，陈富忠，胡生富，魏春梅

(1.四川省攀枝花市动物疫病预防控制中心，四川 攀枝花 617000；2.四川省攀枝花市动物卫生监督所，四川 攀枝花 617000；3.河南省武陟县农业农村局，河南 武陟 454950)

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒引起的，急性、烈性和高度接触性传染病，以高热、出血和白细胞缺损为主要特征[1]。临床表现有：病猪体温高达42 ℃，皮肤发绀，耳、鼻、腋下出现明显紫斑[2]，结膜发炎；部分猪发生呕吐，初期便秘，后期腹泻，粪便带粘液或血液；怀孕母猪可出现流产、产死胎、弱胎和木乃伊胎。典型病理特征有全身性出血，“麻雀蛋样”肾(雀斑肾)，脾脏出血性梗死灶，回肠末端及盲肠出现纽扣状坏死、溃疡，纤维素性肺炎等。世界动物卫生组织(OIE)将其列入必须上报的动物疫病目录，我国将其列为一类动物疫病，是《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》明确的优先防治病种[3]。本文就2019年2月某养猪场发生猪瘟的发病情况、临床症状、病理变化、实验室诊断提出思考和分析。

1 发病情况及临床症状

攀枝花某养猪场，存栏生猪68头；2018年12月-2019年1月，陆续从场外购入仔猪40头。2019年2月初，猪陆续发病，出现发热、体表发绀、呼吸困难等症状，10天内死亡24头，死亡率达22.22%。

2 病理变化

对濒临死亡的病猪进行解剖，发现颌下淋巴结水肿，腹股沟淋巴结水肿出血，肠系膜淋巴结水肿，肺心叶发生胰变，肾脏表面出现针尖状坏死点，回肠、大肠粘膜面出现康麸样溃疡面，回盲瓣出现钮扣状溃疡，胃粘膜出血、坏死，小肠和膀胱内膜出血。主要病理变化见图1-图4。

图1 皮肤发绀

图2 肺脏胰变

图3 大肠纽扣状溃疡、坏死

图4 淋巴结出血、肿大

对临床症状和病理变化分析，初诊为猪瘟或非洲猪瘟病毒感染；现场采集肝、肾、淋巴结、脾、肺、全血，实验室进行荧光定量RT-PCR和荧光定量PCR检测。

3 实验室诊断

3.1 样品处理及核酸提取

将现场采集的肝、肾、淋巴结等组织研磨匀浆后，8000 rpm离心2 min取上清液，按照核酸提取说明书，采用吸附法，提取组织DNA和RNA。

3.2 荧光定量RT-PCR和荧光定量PCR检测

对提取的RNA，按照北京世纪元亨猪瘟病毒通用型实时荧光RT-PCR检测试剂盒(生产批号：CSF20181128P)说明书，进行猪瘟病毒(CSFV)检测；将提取的DNA，按照北京世纪元亨非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测试剂盒(生产批号：ASF20181005P)说明书，进行非洲猪瘟病毒(ASF)检测。

4 结果

4.1 猪瘟病毒(CSFV)检测结果

阳性对照CT值≤30，出现特异性扩增曲线，阴性对照无CT值并且无特异性扩增曲线，实验结果成立。所有被检样品CT值≤30并出现特异性扩增曲线，表明所有样品为CSFV阳性(图5、表1)。

4.2 非洲猪瘟病毒(ASF)检测结果

阳性对照CT值<30并出现特异性扩增曲线，阴性对照无CT值并且无特异性扩增曲线，实验结果成立。所有被检样品无CT值且无特异性扩增曲线，表明所有样品ASF阴性(图6、表1)

图5 猪瘟病毒(CSFV)实时荧光RT-PCR扩增曲线

图6 非洲猪瘟病毒(ASF)实时荧光PCR扩增曲线

表1 检测结果

5 讨论与结论

我国于2007年-2017年将猪瘟免疫列入强制免疫计划[4]，经过10年的强制免疫，全国猪瘟疫情得到了有效控制。丁亮等2018年对全国21个猪场63份样品进行猪瘟抗原检测，样品阳性率为6.35%[5]；杨汉春等2019年采用RT-PCR方法对全国252份临床病料进行检测，猪瘟病毒核酸阳性检出率为3.97%，与2018年(9.42%)相比，明显下降[6]；王赛赛牧通网数据显示，2019年检测了全国32个猪场共70份病料，猪瘟病毒核酸阳性检出率为5.7%[7]。这些资料表明，我国近年生猪养殖场猪瘟病毒检出率较低，但仍有部分猪场存在发生猪瘟疫情的风险。

猪瘟易与其他疫病混合感染，并且与非洲猪瘟、高致病性猪蓝耳病、猪丹毒等疫病相似，从临床症状、解剖病变很难区别，必须采取实验室诊断方法进行鉴别诊断。目前猪瘟的实验室诊断方法主要有病毒分离鉴定、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析试验、环介导等温技术(LAMP)、荧光抗体试验(FAT)、RT-PCR、实时荧光RT-PCR和微滴式数字PCR等方法[8,9]，实时荧光RT-PCR方法用时短、特异性强、灵敏度高、是目前普遍采用的猪瘟病毒快速诊断方法。目前市场上适用于猪病的荧光定量检测试剂盒种类齐全、价格适中，并且有同时完成猪瘟和高致病性猪蓝耳病等多种常见猪病病原检测的多重荧光RT-RCR检测试剂盒，能有效缩减检测时间，适用县级以上兽医实验室。另外，各地政府应加大对基层兽医实验室设施设备的投入和技术人员的培养，一旦发现疫情,能第一时间做出诊断并采取行动，大大降低疫情扩散风险，将农户和养殖场的损失降到最低。