一例地方猪保种场猪伪狂犬净化案例

瞿蕾

（江苏省常熟市动物疫病预防控制中心 215500）

伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒 （Pseudorabies virus，PrV）引起的多种家畜急性传染病,会造成妊娠母猪流产、死胎,公猪不育,新生仔猪大量死亡,育肥猪呼吸困难、生长停滞等危害。此外,猪作为该病的自然宿主和主要贮存宿主,患病猪会持续不断地向外界排毒,影响整个生猪养殖场的生猪生产,给养殖场造成巨大的经济损失。对于地方保种场而言,一旦种猪大规模感染,将影响整个地方猪种的生存,后果极其严重。

常熟市牧工商有限公司主要开展“二花脸” 猪种的培育和保护工作,公司在2014 年被原农业农村部评为国家级二花脸猪保种场,现有二花脸母猪85 头,公猪15 头,6 个家系。为进一步提升种猪的质量,我们利用3 年的时间指导常熟市牧工商有限公司对公猪、母猪、生长猪实施采血检测、隔离淘汰等技术措施,同时严控生物安全体系,完成对该场的猪伪狂犬净化任务,从很大程度上提升了场内种猪健康水平。

1 材料与方法

1.1 目标猪场

常熟市牧工商有限公司。

1.2 试验材料

1.2.1 疫苗

伪狂犬gE 缺失活疫苗（Bartha-k61 株）,生产厂商为南农高科。

1.2.2 诊断试剂及诊断方法

伪狂犬免疫抗体gB 蛋白ELISA 抗体检测试剂盒和野毒抗体gE 蛋白ELISA 抗体试剂盒为美国IDEXX 公司产品。血清样品的检测步骤和结果判定均按照试剂盒说明书(说明书略)。

1.3 检测对象

公猪、母猪、生长猪。

1.4 试验方法与内容

1.4.1 生猪伪狂犬病流行病调查

了解目标猪场不同种猪群的健康状态、免疫情况、免疫保护水平和感染状况,以此准确评估目标猪场伪狂犬病感染状况。

1.4.2 净化步骤

1.4.2.1 目标猪场普查采样

公猪群：全部采样。

生产母猪群：随机采集样本40 份。

生长猪群：100～120 日龄的生长猪随即采集样本20 份、150～160 日龄生长猪随机采集样本20 份。

根据普查结果分析猪群伪狂犬病的感染情况,针对不同程度的感染选择相对应的控制净化方案：种猪群普查结果分析：阴性群、稳定控制群（种猪阳性率10%以下）、风险感染群（种猪阳性率10%～30%）和严重感染群（种猪阳性率30%以上）；通过对生长猪群的监测可以分析、评估猪伪狂犬病的风险程度和控制情况。

1.4.2.2 监测控制方案

（1）低阳性场

①繁殖猪群（公猪和母猪）：全群采样检测,野毒抗体gE阳性的猪只立即淘汰处理,1 个月后再次进行繁殖猪群全群检测,野毒抗体gE 阳性继续淘汰,间隔4～6 个月后再次全群检测,检测不到野毒抗体gE 阳性则假定为阴性场。

②生长猪（后备公猪、后备母猪）逐头进行野毒抗体gE和伪狂犬免疫抗体gB 检测,确保野毒抗体gE 阴性且疫苗免疫水平达标。

③繁殖群完成淘汰后,经产母猪按10 倍的比例、全部公猪、20 周龄左右生长猪随机选取30 份进行野毒抗体gE 和伪狂犬免疫抗体gB 检测,监测猪群野毒感染情况,同时评估疫苗免疫效果。

（2）高阳性场

①公猪：野毒抗体gE 阳性的猪只立即淘汰处理,1 个月后再次进行繁殖猪群全群检测,野毒抗体gE 阳性继续淘汰,间隔4～6 个月后再次全群检测,检测不到野毒抗体gE 阳性则假定为阴性场。

②生长猪（后备公猪、后备母猪）逐头进行野毒抗体gE和伪狂犬免疫抗体gB 检测,确保野毒抗体gE 阴性且疫苗免疫水平达标。

③公猪群完成淘汰后,经产母猪按10 倍的比例、全部公猪、20 周龄左右生长猪随机选取30 份进行野毒抗体gE 和伪狂犬免疫抗体gB 检测,监测猪群野毒感染情况,同时评估疫苗免疫效果。

④经检测,若母猪群的野毒感染率在一个比较低的水平（如10%左右）,则目标猪场伪狂犬净化可参照低阳性场方案进行。

1.4.2.3 结果判定

经检测,目标猪场繁殖猪群野毒抗体gE 连续2 次抽检结果均为阴性,且伪狂犬免疫抗体gB 合格率≥80%,则判定该猪群为净化猪群；否则,按照净化步骤循环进行,直至满足上述要求。

每次样品的采集、检测、阳性猪的处理均应在10d 内完成。

1.4.3 净化维持。

种公猪每年3～4 次进行全群采血检测,确保野毒抗体gE阴性和伪狂犬疫苗免疫水平合格。

后备母猪和后备公猪在入群前必须逐头检测,野毒抗体gE阴性和伪狂犬疫苗免疫水平合格。

每4 个月对生产母猪和生长猪进行采血监测一次,其中生产母猪60 份、130～150 日龄生长猪30 份,野毒抗体gE 和伪狂犬免疫抗体gB 检测,以监测猪群野毒感染情况,同时评估疫苗免疫效果。

1.5 技术措施

1.5.1 免疫常规动物疫病疫苗使用情况

由表1 可知,伪狂犬疫苗为公猪每年1 月伪狂犬2 头份颈后肌注,母猪跟胎4 头份颈后肌注。由于本场为封闭式阴性场,生长猪不做免疫,但考虑到仔猪出售往其他阳性场后极易感染发病,于2017 年9 月开始对部分生长猪进行伪狂犬免疫,断奶后2 头份颈后肌注,30d 后二免。

1.5.2 生猪安全管理措施

自繁自养,不从外场引种。严格的全进全出制度,猪只调入调出前后对栏舍彻底清洗消毒,不同消毒药物交替使用,确保消毒效果。加强检测,淘汰不合格的种猪。严格控制传染源：病猪及时从正常猪群中挑出,进入隔离栏进行治疗,必要时对病猪实施安乐死,防止病毒扩散,死猪进行无害化处理。加强人员、物品、环境消毒,提升发酵效果,使病原微生物始终处于抗体保护之下,提高猪群抗病力,减少易感猪只。同时,加强猪只日常保健,对转群猪及产前产后母猪尤其要注意做好预防保健工作。

1.5.3 病原分离诊断

在试验中若出现有病死猪,及时采集相关病理组织,经合理保存后送到有资质的检测单位,采用荧光PCR 方法对病原学样品进行检测诊断,找出病因,确诊病种。

2 结果与分析

2016～2019 年,我们对目标猪场内各类生猪伪狂犬免疫抗体gB 水平和野毒抗体gE 水平进行了6 次监测。

第1 次：2016 年7～9 月,全场普查,公猪全群采样15 份,母猪全群采样121 份,生长猪随机采样40 份。检测结果显示,母猪群gB 抗体69.42%；公猪群免疫不到位,gB 抗体仅为20.00%；生长猪不进行免疫,无免疫抗体。野毒抗体gE 阳性母猪1 份,其余均为阴性,抗体阳性率为0.83%,抗体阳性母猪立即作淘汰处理。具体结果见表2。

表1 免疫情况登记表

第2 次：2017 年2 月24 日,全场普查,公猪全群采样14份,母猪全群采样125 份,生长猪随机采样20 份。检测结果显示,母猪群和公猪群伪狂犬疫苗免疫水平均有所提高,母猪群gB 抗体98.40%；公猪群gB 抗体57.14%；生长猪不进行免疫,无免疫抗体。野毒抗体gE 均为阴性,抗体阳性率为0.00%。该场假定为阴性场,按维持净化方案实施。具体结果见表3。

第3 次：2017 年6 月26 日,全场普查,公猪全群采样13份,母猪全群采样120 份,生长猪全群采样35 份。检测结果显示,母猪群gB 抗体98.33%；公猪群gB 抗体38.46%；生长猪不进行免疫,无免疫抗体。野毒抗体gE 均为阴性,抗体阳性率为0.00%。具体结果见表4。

第4 次：2017 年12 月5 日,生长猪全群采样30 份,该批生长猪已于2017 年9 月进行伪狂犬疫苗注射。检测结果显示,生长猪gB 抗体93.33%,免疫有效。野毒抗体gE 均为阴性,抗体阳性率为0.00%。具体结果见表5。

第5 次：2018 年10 月17 日,全场普查,公猪全群采样10 份,母猪全群采样105 份,生长猪随机采样40 份。检测结果显示,母猪群gB 抗体91.43%；公猪群gB 抗体90.00%；生长猪gB 抗体57.70%。野毒抗体gE 均为阴性,抗体阳性率为0.00%。具体结果见表6。

第6 次：2019 年6 月26 日,全场普查,公猪全群采样15份,母猪全群采样85 份,生长猪随机采样40 份。检测结果显示,母猪群gB 抗体92.94%；公猪群gB 抗体86.67%；生长猪gB 抗体2.50%。野毒抗体gE 均为阴性。具体结果见表7。

从以上检测结果可以看出,前4 次检测gB 抗体母猪群基本达到70%,免疫合格；公猪免疫不到位,群体免疫合格率均低于70%；生长猪不进行免疫,无免疫抗体。从第5～6 次检测结果可以看出,公猪、母猪免疫均有效,群体免疫合格率达到92%。野毒抗体gE 抗体检测连续5 次检测均为阴性,整个猪群无伪狂犬野毒感染,目标猪场伪狂犬病净化成功。

表2 第一次PrV-gB 和PrV-gE 抗体检测结果

表3 第2 次PrV-gB 和PrV-gE 抗体检测结果

表4 第3 次PrV-gB 和PrV-gE 抗体检测结果

表5 第4 次PrV-gB 和PrV-gE 抗体检测结果

表6 第5 次PrV-gB 和PrV-gE 抗体检测结果

表7 第6 次PrV-gB 和PrV-gE 抗体检测结果

3 讨论与小结

要净化伪狂犬疫病必须具备以下4 个条件：一是要有符合实际且行之有效的净化方案,净化方案必须对净化过程中随时可能出现的各种情况做出估计,并提出相应的解决方法；二是要建立严格的生物安全制度和措施,不从场外引种、全进全出,封闭式饲养；三是要落实各项防疫措施,有效的防控措施不仅能促进整个净化过程顺利开展,在净化完成后更是保证猪只不受该病毒感染的重要措施；四是要有坚决果断的处理机制,一旦发现野毒感染阳性猪只要立即淘汰,防止病原扩散。

由于任何检测都不可能确保100%准确,其中的人为操作因素、试剂因素都会对检测结果造成一定误差或误判,所以检测过程要进行多次检测或邀请多个检测机构检测,以减少误差带来的误判。

在对目标猪场开展伪狂犬病净化前,必须对其进行伪狂犬阳性率的抽查,对阳性率处于不同阶段水平的情况选取不同的净化方案。第一次抽查结果显示,本次净化的猪场生猪属于阴性群,按照低阳性场控制方案进行净化。若抽检结果为风险感染群（种猪阳性率10%～30%）和严重感染群 （种猪阳性率30%以上）,则需按高阳性场控制方案进行净化。

后备猪如何引入也是影响目标猪场伪狂犬净化成功与否的关键点。必须在确保后备猪是伪狂犬感染阴性时才可以引进。

尽管本场已完成伪狂犬的净化,全场封闭式管理,作为阴性场可以不使用伪狂犬疫苗。但就目前国内形势而言,大部分猪场为伪狂犬阳性,猪只体内存在伪狂犬病毒。如果这些猪场进购本场仔猪,在生长过程中随着母源抗体下降,仔猪极易感染发病。因此,伪狂犬疫苗的免疫必须同步开展,并且严格按照免疫程序开展防疫工作,全方位阻断猪伪狂犬病的传播途径。