不同切制方法对丹参饮片质量的影响

冯建明 燕蔚 王志强 许秋双 滕萌萌 杨晓娜 宁宝生 李天祥

〔摘要〕 目的 考察3种切片方法（鲜品切片、半干切片、闷润切片）对丹参饮片质量的影响，拟筛选适宜的切片方法。方法 建立不同产地3种丹参切片方法高效液相指纹图谱，进行相似度评价和正交偏最小二乘法分析;采用HPLC-UV法对丹参饮片中功效成分定量分析。结果 3种丹参切片方法之间存在差异，其中闷润切片与前两者差别较大，鲜品切片丹参中主要功效成分损失最少，半干切片方法次之，闷润切片丹参中成分损失较多。结论 鲜品切片和半干切片两种方法具有较高的可行性，其中鲜品切片为丹参最佳的切片方法，功效成分损失最少;而半干切片品相较佳，断面质密平整。因此，在产地进行半干切片加工具有推广价值。

〔关键词〕 丹参;切片方法;含量测定;指纹图谱

〔中图分类号〕R282.4       〔文獻标志码〕A       〔文章编号〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2020.08.012

〔Abstract〕 Objective To study the effects of 3 kinds of slicing methods （fresh product slicing， half dry slicing and stuffy moistening slicing） on the quality of Radix Salviae Miltiorrhizae decoction pieces， and to select the appropriate slicing methods. Methods The HPLC fingerprints of 3 kinds of slicing methods of Radix Salviae Miltiorrhizae from different areas were established， and the similarity evaluation and orthogonal partial least square analysis were carried out. HPLC-UV method was used to quantitatively analyze the functional components in Radix Salviae Miltiorrhizae decoction pieces. Results There were differences among the 3 slicing methods of Radix Salviae Miltiorrhizae， among which the differences between the stuffy moistening slicing and the first two methods were significant. The loss of main functional components in fresh Radix Salviae Miltiorrhizae slice was the least， followed by that in half dry slice， and the loss of components in stuffy moistening Radix Salviae Miltiorrhizae slice was more. Conclusion The two methods of fresh and half dry slicing are highly feasible， among which fresh slicing is the best method for Radix Salviae Miltiorrhizae with the least loss of effective components， while the half dry sections are better in appearance with dense and flat section. Therefore， to process half dry section in the production area has the value of popularization.

〔Keywords〕 Radix Salviae Miltiorrhizae; slicing method; content determination; fingerprint

丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎，性苦、微寒，归心、肝经，具有活血通经、祛瘀止痛、清心除烦、凉血消痈的功效[1]，属常用大宗中药材之一。丹参中主要含有脂溶性和水溶性两大类活性成分，成分种类繁多[2]，具有抗炎、抗肿瘤、治疗心血管疾病等多种药理作用[3-5]。

中药材切制加工有易于药物中有效成分的溶出，也有助药材的干燥、贮藏和炮制。2015版《中华人民共和国药典》中规定丹参“除去杂质和残茎，洗净，润透，切厚片，干燥”[1]。然而丹参自古有“忌水洗”的说法，现代研究也表明水洗易造成丹参活性成分损失[6]，曾有报道丹参产地趁鲜切片具有一定的合理性[7]。因此，为了有效保证加工切制丹参饮片质量，本研究收集了我国5个丹参主产区的新鲜样品，分别采用鲜品直接切片、半干切片、闷润切片3种切制方法进行处理，采用HPLC指纹图谱相似度评价和主要功效成分含量测定，并经过统计学分析，系统考察丹参3种切片方法对丹参质量的影响，拟筛选丹参最合理的切片方法，保证其质量，提高临床治疗效果，为进一步完善丹参药材加工理论提供科学的数据支撑。

1 仪器与材料

1.1  主要仪器与试剂

美国Alltech 1500系列高效液相色谱仪（配置B05型高压梯度泵、UV 1000型全波段可编程紫外可见检测器、CSChrom Plus色谱工作站）;UV-6100PCS型紫外可见分光光度计（上海美普达有限公司）;YHG-600-BS-II型远红外快速干燥箱（上海贺德实验设备有限公司）;DFZ-6050型真空干燥箱（上海新苗医疗器械制造有限公司）;SB25-12DT超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）;FA 2104电子天平（上海舜宇恒平科技仪器有限公司）。丹参酮ⅡA对照品（MUST-1103301）、丹酚酸B对照品（MUST-15081916）（北京鼎国昌盛技术有限公司）;硝酸铝（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）;氢氧化钠、亚硝酸钠、95%乙醇、甲醇（分析纯，天津市江天化工技术有限公司）;磷酸（色谱纯，天津市光復精细化工研究所）;无水乙醇（分析纯，天津市富宇精细化工有限公司）;乙腈、甲醇（色谱纯，天津市康科德科技有限公司）;娃哈哈纯净水（天津娃哈哈食品有限公司）。

1.2  试验样品

丹参样品分别为采自山东夏津、四川绵阳、天津静海、河南方城、陕西宝鸡5个主产区新鲜药材，经天津中医药大学李天祥教授鉴定为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的根及根茎。见表1。

2 方法

2.1  丹参的切片方法

2.1.1  鲜品直接切片  取新鲜丹参药材，净选除杂，用流速为5 000 mL/min的水冲洗干净，稍晾，切厚片（2～4 mm），晒干。

2.1.2  半干切片  取新鲜药材，净选除杂，水冲洗净，自然晾晒，药材稍有韧性，不易折断，切厚片（2～4 mm），晒干。

2.1.3  闷润切片  即传统的切片方法。取新鲜药材净选除杂，晒干，药材轻折易断。将干药材用清水浸润，经常翻动，使水分缓缓渗入药材内部，以“药透水尽，少泡多润”为原则，润透后，取出，切厚片（2～4 mm），晒干。

2.2  不同产地丹参3种切片方法指纹图谱研究

2.2.1  色谱条件  色谱柱：Agilent ZorbaxSB-C18（4.6 mm×100 mm，3.5 μm）。检测波长254 nm，流速1 mL/min，柱温30 ℃。流动相A为乙腈，B为0.1%甲酸的水溶液。梯度洗脱：0～5 min，10%～20%A;5～20 min，20%～30%A;20～25 min，30%～50%A;25～30 min，50%～65%A;30～65 min，65%～80%A;65～70 min，80%～10%A;70～72 min，10%A。

2.2.2  对照品溶液的制备  精密称取105 ℃干燥至恒重的各对照品适量，以甲醇为溶剂配成各单一成分的溶液，迷迭香酸0.24 g/L，丹酚酸B 0.16 g/L，隐丹参酮0.14 g/L，丹参素0.22 g/L，丹参酮IIA 0.2 g/L的对照品储备液，制备成混合对照品溶液。见图1。

2.2.3  供试品溶液的制备  精密称取各丹参样品粉末（过三号筛）约0.1 g，置具塞锥形瓶中，精密加人甲醇20 mL，称重，超声处理（功率140 W，频率42 kHz） 15 min，室温下冷却，精密称定甲醇补重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4  精密度试验  取同一均匀标准品按照“2.2.3”项下制备供试品溶液，按照“2.2.1”项下色谱条件，平行进样6次，记录主要色谱峰的峰面积和保留时间，以4号色谱峰为参照峰，保留时间 RSD为2.45%，相对峰面积 RSD为1.49%，说明仪器精密度良好。

2.2.5  稳定性试验  取同一样品按照“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，室温静置，分别在0、2、4、8、16、24 h按照“2.2.1”项下色谱条件进样，记录主要色谱峰的峰面积和保留时间，以4号色谱峰为参照峰，保留时间RSD≤1.86%，相对峰面积RSD≤0.18%，说明该供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.2.6  重复性试验  精密量取同一样品，按“2.2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，按照“2.2.1”项下色谱条件进样分析，记录主要色谱峰的峰面积和保留时间，以4号色谱峰为参照峰，保留时间RSD≤1.28%，相对峰面积RSD≤0.14%，说明该方法重复性良好。

2.3  不同产地丹参3种切片方法成分含量测定

2.3.1  色谱条件  丹参酮ⅡA色谱条件：色谱柱Agilent ZorbaxSB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流动相乙腈（A）-0.02%磷酸溶液（B）;检测波长270 nm;进样量10 μL;流速1.0 mL/min;柱温25 ℃;梯度洗脱设定为0～6 min，61%A;6～20 min，61%～90%A;20～20.5 min，90%～61%A;20.5～25 min，61%A。丹酚酸B色谱条件：色谱柱Agilent Zorbax SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流动相乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）（22∶78）;检测波长286 nm;进样量10 μL;流速1.2 mL/min;柱温25 ℃。见图2。

2.3.2  对照品溶液制备  精密称取丹参酮ⅡA对照品2.5 mg于25 mL容量瓶中，甲醇定容得0.1 mg/mL的丹参酮ⅡA对照品储备液。精密称取丹酚酸B对照品3.2 mg于10 mL容量瓶中，蒸馏水定容得0.32 mg/mL的丹酚酸B对照品储备液。精密称取丹酚酸B对照品2.8 mg于10 mL容量瓶中，甲醇定容得0.28 mg/mL的丹酚酸B对照品储备液。