P16、Ki-67表达与直肠癌患者预后的关系

蔡路兵 翟梅娟 陈晓丹

[摘要] 目的 研究多腫瘤抑制基因P16、细胞增殖核抗原Ki-67表达与直肠癌患者预后的关系。 方法 选择2016年8月—2018年12月浙江省杭州市萧山区第一人民医院60例直肠癌患者术后的肿瘤及癌旁正常组织，以免疫组织法检测P16、Ki-67的表达情况，观察P16、Ki-67在不同年龄、病理类型、TNM分期、分化程度及淋巴结有无转移中的阳性率，比较P16、Ki-67阳性患者与阴性患者术后1年的生存情况，通过Spearman系数分析P16和Ki-67的相关性。 结果 直肠癌癌组织中P16及Ki-67的阳性率显著高于癌旁正常组织（P < 0.05）。TNM分期Ⅲ期、高分化程度患者P16、Ki-67阳性率显著高于TNM分期Ⅱ期、低-中分化患者（P < 0.05）;有淋巴结转移患者Ki-67阳性率显著高于无淋巴结转移患者，有淋巴结转移患者P16阳性率显著高于无淋巴结转移患者（均P < 0.05）。P16阴性患者生存率显著高于阳性患者（P < 0.05）。Ki-67阳性患者1年生存率显著低于Ki-67阴性患者（P < 0.05）。经相关性分析P16和Ki-67直肠癌组织中的表达无相关性（r = 0.157，P = 0.461）。 结论 直肠癌癌组织内P16和Ki-67水平表达与直肠癌临床病理特征密切相关，可能为直肠癌的临床治疗及预后评估提供参照。

[关键词] 多肿瘤抑制基因;细胞增殖核抗原;直肠癌;预后;预测

[中图分类号] R735.34          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2020）08（b）-0024-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between the expression of multipletumor-suppressor gene1 P16 and proliferating cellnuclear antigen Ki-67 and the prognosis of rectal cancer patients. Methods From August 2016 to December 2018， postoperative tumors and adjacent normal tissues of 60 patients with rectal cancer were selected from the First People′s Hospital of Xiaoshan District of Hangzhou， Zhejiang Province. Immunohistochemical method was used to detect the expression of P16 and Ki-67. The positive rates of P16 and Ki-67 in different ages， pathological types， TNM stages， degree of differentiation and lymph node metastasis were observed. The survival of P16 and Ki-67 positive patients and negative patients one year after surgery was compared. Finally， the correlation between P16 and Ki-67 was analyzed by Spearman coefficient. Results The positive rates of P16 and Ki-67 in colorectal cancer tissues were significantly higher than that in paracancer normal tissues （P < 0.05）. TNM staging in patients with stage Ⅲ， high degree of differentiation P16 and Ki-67 were significantly higher than that of TNM stage Ⅱ， low-differentiation in patients （P < 0.05）; the Ki-67 positive rate of patients with lymph node metastasis was significantly higher than that of patients without lymph node metastasis， and the P16 positive rate of patients with lymph node metastasis was significantly higher than that of patients without lymph node metastasis（all P < 0.05）. The survival rate of P16 negative patients was significantly higher than that of positive patients （P < 0.05）. The one-year survival rate of Ki-67 positive patients was significantly lower than that of negative patients （P < 0.05）. There was no correlation between the expression of P16 and Ki-67 in rectal cancer tissues （r = 0.157， P = 0.461）. Conclusion The expression levels of P16 and Ki-67 in rectal cancer tissues are closely related to the clinicopathological features of rectal cancer， which may provide reference for the clinical treatment and prognosis evaluation of rectal cancer.

[Key words] Multiple tumor suppressor gene; Cell proliferating nuclear antigen; Rectal cancer; Prognosis; Predict

直肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一，近年来我国生活水平的不断提高以及人口老龄化加剧，直肠癌发病率和死亡率呈上升趋势[1-2]。目前直肠癌治疗多以外科手术为主，但因为直肠癌位置低深入盆腔，解剖关系较复杂，导致术后复发率高，预后情况不容乐观[3]。过去有关直肠癌预后的研究多集中在临床、病理指标方面，随着分子生物学的发展，越来越多的分子生物学标志物与肿瘤预后关系研究已成为趋势[4]。多肿瘤抑制基因P16是一种蛋白标志物，细胞增殖核抗原Ki-67是一种被发现于增殖细胞的核抗原。本研究选择浙江省杭州市萧山区第一人民医院（以下简称“我院”）60例直肠癌患者为研究对象，探讨活检组织内P16、Ki-67表达与直肠癌患者预后的关系，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择我院2016年8月—2018年12月60例直肠癌患者为研究对象，其中男39例，女21例;年龄34～79岁，平均（46.23±3.34）岁;肿瘤直径2～5 cm，平均（3.42±1.21）cm;TNM分期：Ⅱ期26例，Ⅲ期34例;分化程度：高分化43例，中分化5例，低分化12例;淋巴结转移42例。

1.2 纳入标准

①经《结直肠癌诊疗规范（2010年版）》[5]确诊为直肠癌;②18～65岁;③患者及其家属知情并签署知情同意书。

1.3 排除标准

①妊娠期或哺乳期妇女;②心、肝、肾等器官存在严重器质性障碍或其他恶性肿瘤者;③合并其他疾病同期需行其他手术治疗者;④患有精神方面疾病不能配合治疗者。

1.4 治疗方法

60例患者均在手术结束后取肿瘤及癌旁正常组织检测P16及Ki-67，其中癌旁组织于大于肿瘤2 cm处取材，P16及Ki-67均行免疫组化SP法检测，试剂盒均由上海心语生物科技有限公司提供，检测仪器：意大利BT 3000 plus全自动生化分析仪。

1.5 观察指标

①直肠癌癌组织与癌旁组织P16及Ki-67免疫组化SP法检查结果比较，对染色结果进行判定：P16以细胞核或细胞浆中棕黄色为阳性，Ki-67以细胞核褐色为阳性。②观察P16及Ki-67在不同年龄、病理类型、肿瘤直径、TNM分期、分化程度及淋巴结有无转移中的阳性率。③对患者进行1年的随访（返院复查或电话随访），比较P16、Ki-67阳性和阴性患者生存情况。

1.6 统计学方法

选用SPSS 19.0统计学软件对数据进行处理，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料采用例数和百分率表示，组间比较采用χ2检验。采取Kaplan-Meier法绘制生存曲线，采取Log-Rank检验，通过Spearman系数对P16和Ki-67进行相关性分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 直肠癌癌组织与癌旁组织P16、Ki-67检查结果比较

直肠癌癌组织中P16、Ki-67的阳性率显著高于癌旁正常组织（P < 0.05）。见表1、图1（封三）。

2.2 P16、Ki-67在直肠癌癌组织中的表达与临床病理特征的关系

TNM分期Ⅲ期、高分化程度患者P16、Ki-67阳性率显著高于TNM分期Ⅱ期、低-中分化患者（P < 0.05）;有淋巴结转移患者Ki-67阳性率显著高于无淋巴结转移患者，有淋巴结转移患者P16阳性率显著高于无淋巴结转移患者（均P < 0.05）。见表2。

2.3 P16阳性和阴性患者生存情况比较

患者均无失访，其中P16阳性患者1年死亡25例，生存率为48.98%（24/49）;P16阴性患者1年死亡1例，生存率为90.91%（10/11）。两组患者生存情况采取Log-Rank检验，P16阴性患者生存率显著高于阳性患者，Log-Rank = 5.022，P = 0.025。見图2。

2.4  Ki-67阳性和阴性患者生存情况比较

患者均无失访，其中Ki-67阳性患者1年死亡26例，生存率为49.02%（25/51）;Ki-67阴性患者1年死亡1例，生存率为88.89%（8/9）。两组患者生存情况采取Log-Rank检验，Ki-67阳性患者生存率显著低于阴性患者，Log-Rank = 3.763，P = 0.042。见图3。

2.5 P16与Ki-67表达的关系

Spearman等级相关分析示，P16和Ki-67直肠癌中的表达无相关性（r = 0.157，P = 0.461）。

3 讨论

结肠癌是发生在齿状线至直肠乙状结肠交界处的癌，是消化道常见的恶性肿瘤之一，其病因仍不明确，可能与社会环境、饮食习惯、遗传因素等有关[6-9]。早期直肠癌多数无症状，少数可能会出现血便、脓血便、腹泻便秘等，而晚期则会排便梗阻，危及生命健康[10-11]。目前直肠癌治疗主要以外科手术为主，但在预后评估中却缺乏相应的指标为临床提供指导。

本研究结果显示，直肠癌癌组织中P16和Ki-67的阳性率高于癌旁正常组织，提示两指标对直肠癌有较明显的标志性作用。P16调控细胞周期，能阻止细胞由G1期进入S期，其阳性率随直肠癌恶性程度增高呈上升趋势[12]。Ki-67抗原表达越高，其肿瘤细胞增殖活性也会升高，它最初表达于G1期，并会逐渐增加至S期和G2期，并于M期实现最高值，在分裂晚期逐渐消失，因此能将细胞增殖活性进行特异性展示[13-14]。与孙旭凌等[15]研究结果基本相符。

TNM分期Ⅲ期、高分化程度患者P16、Ki-67阳性率显著高于TNM分期Ⅱ期、低-中分化患者，有淋巴结转移患者Ki-67阳性率显著高于无淋巴结转移患者，P16阳性率显著高于无淋巴结转移患者，提示P16和Ki-67可能与TNM分期、分化程度及淋巴结转移关系密切，Ki-67可能会使同质性细胞间的黏附力降低，使肿瘤血管生成加快，从而促进直肠癌转移，细胞周期紊乱导致细胞持续增殖[16-17]。P16表达与直肠癌恶性程度密切相关，提示越高程度的直肠癌其预后也越差。与王晓平等[18]研究结果基本相符。在预后观察中Ki-67阳性患者生存情况不容乐观，可能是细胞迁移和体外侵袭影响上皮细胞黏蛋白合成，刺激癌细胞增长，侵袭性增加，导致病情复发和转移发生较快，生存率下降[19-22]。

经相关性分析，直肠癌癌组织的P16和Ki-67表达无相关性，直肠癌生物学特性及其预后与直肠癌有所不同，但二者在肿瘤细胞增殖中有着重要作用，都与直肠癌病情程度密切相关[23-25]。

综上，P16、Ki-67可能对直肠癌预后评估具有一定的指导意义，值得临床重视。

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（收稿日期：2020-01-07）