酚磺乙胺对酶法检测血清尿酸的影响*

井 沆，牛志杰，刘子砚，凌晓午，李青青，武红权△

1.贵州省人民医院检验科，贵州贵阳 550002；2.首钢水钢总医院肿瘤科，贵州六盘水 553000

尿酸(UA)是嘌呤核酸的代谢产物[1-2]，在肾功能治疗方面起着重要的作用。酚磺乙胺又名止血敏，通过加速血液凝固发挥止血作用[3]，临床工作中，发现有患者应用酚磺乙胺治疗后血清UA检测结果变化很大，与患者的临床表现有较大差异，有研究称酚磺乙胺对肌酐结果存在药物干扰[4-5]，而对UA可能存在干扰的具体研究尚未见报道。

本研究依据CLSI EP7-A2[6]和文献[7]推荐的干扰试验方法，通过体外干扰试验，探讨酚磺乙胺对酶法检测UA的干扰。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2019年10月来贵州省人民医院就诊患者的新鲜血清，并配制低、高水平混合血清各一份。纳入标准：(1)未用药治疗的血清标本；(2)标本无黄疸、无脂血、无溶血；(3)UA的测试水平为EP7-A2和指南建议的干扰试验水平。

1.2仪器与试剂 美国雅培C16000全自动生化分析仪。酚磺乙胺注射液由国药集团容生制药有限公司提供，国药准字号为H20057257，规格0.5 g/2 mL。根据《中华人民共和国药典》[8]及酚磺乙胺药代动力学特性[9]，本研究采用0.5 g/L酚磺乙胺的最高血药浓度。酶法UA检测试剂及配套校准品(美国雅培公司，批号08465UN19)。试验前对检测仪器进行精密度评估，用试剂原装标准品对仪器项目进行校准并进行定期质控，观察检测方法的稳定性，室内质控品为美国伯乐公司(Bio-Rad)提供的生化多项质控物，两个水平，批号为26421、26422。

1.3方法

1.3.1干扰筛选试验 (1)取酚磺乙胺注射液1瓶(250 g/L)与生理盐水按照1∶50比例配置成酚磺乙胺水平为5 g/L的试验样品(原液)，将UA水平为500 μmol/L左右的混合血清与原液按照9∶1的比例配制成酚磺乙胺水平为500 mg/L的溶液，另用UA血清和生理盐水以同比例混合作为对照品，分析酚磺乙胺对酶法UA测定的干扰程度。(2)对生化仪进行UA校准、定期质控和精密度评估，观察检测方法的准确性。(3)按交互顺序分析检测样品和对照样品并记录试验结果。

1.3.2干扰剂量效应试验 根据指南要求，被测UA试验水平的确定，宜选取被测量的2个医学决定水平作为干扰试验时的被测量水平。本试验依据UA参考范围的低限或病理水平，同时结合指南关于被测量UA的建议试验水平，选取UA值为180 μmol/L、450 μmol/L作为剂量效应试验水平。

预稀释：取一支酚磺乙胺溶液，配置成药物水平为5 000.00、3 000.00、1 500.00、750.00、375.00、187.50、93.80、46.90、23.50、0.00 mg/L，一共10个水平。将高、低两种不同水平的UA混合血清与上述方法配制的不同水平的酚磺乙胺溶液按照9∶1的比例配制成上述酚磺乙胺水平梯度的溶液(试验组)，对照组按上述步骤将酚磺乙胺注射液换成生理盐水，并按照相应比例将试验组与对照组样品分别配制成干扰物水平为500.00、300.00、150.00、75.00、37.50、18.75、9.38、4.69、2.35、0.00 mg/L的药物干扰剂量效应测试标本，每个标本重复检测3次[10]。

1.3.3重复测量 根据指南中基于生物学变异质量规范中允许总误差(Tea%)和临床专家的共识，本研究选择以UA偏差11.9%作为干扰试验的可接受标准(dmax)，UA批内标准差(s)通过标本重复测定10次计算得出，再计算出二者比值dmax/s，采用95%置信区间(CI)，根据 EP7-A2文件附表得出干扰筛选试验的重复测量次数为3次。

1.3.4干扰效应分析 干扰筛选试验：用试验样品与对照样品测定均值间的偏差(dabs)表示干扰效果，分别计算干扰值(dabs)和dabs95%CI，dabs95%CI=dabs±t0.975，n-1×(2s2/n)1/2。

干扰的判断标准：当|dabs95%CI最低值|≤dmax时，则可判断由被评价干扰物所致的偏差未超过允许误差，不认为此物质为干扰物，反之则认为被评价干扰物对被评价方法有明显干扰作用。

干扰剂量效应试验：将检测的不同水平的干扰物试验样品均值分别减去对照品均值得到单独的dabs值，再用SPSS 22.0软件制作酚磺乙胺干扰物水平(X轴)和单独的dabs(Y轴)的散点图，再对数据进行回归分析曲线估计，选取相关系数R2最高的曲线模型，绘制干扰剂量效应试验的效应图，并用软件算出干扰效应曲线的回归方程。

2 结 果

2.1干扰筛选试验 根据EP7-A2文件附表，s为1.50，dmax为59.13 μmol/L、dmax/s>3，故单个标本重复检测次数为3次，试验组(酚磺乙胺水平50 mg/L)均值为270.33 μmol/L，对照组均值为496.86 μmol/L，dabs=试验组均值-对照组均值=-226.53 μmol/L，dabs95%CI=(-226.53±1.96)μmol/L，|dabs95%CI最低值|>dmax。

2.2干扰剂量效应试验 酚磺乙胺水平在0.00～500.00 mg/L所对应低、高UA样品的dabs值见表1，干扰剂量效应回归曲线分析图见图1、2。低值UA(182.86 μmol/L)样品，用计算机得出干扰剂量效应回归方程显著性检验F=1 596.39，R2=0.995，P<0.001，酚磺乙胺药物浓度在<29.84 mg/L时的|dabs|

表1 高、低系列干扰剂量效应样品对应的dabs值(μmol/L)

图1 酚磺乙胺与低水平UA干扰剂量效应回归曲线

图2 酚磺乙胺与高水平UA干扰剂量效应回归曲线

3 讨 论

不精密度、方法特异性偏差和干扰等都可造成患者检出值与真实值之间的偏差，在本试验中，选择的是雅培原装UA试剂，该项目均全年参加国家卫生健康委员会室间质评，结果成绩优异，本实验室为ISO15189认可实验室，运行着一套完整且严格的质量管理体系，故在本试验中样品的检测出值与真实值之间的差距为干扰物质所造成的。

药物干扰试验是用来衡量检测方法准确度的一个重要指标，通过在反应过程中加入一定量的干扰药物，来测试是否会对检测结果造成影响。干扰物质的水平不同，造成的干扰结果也不同。本试验根据EP7-A2和文献[7]提供的方案来制订干扰筛选试验和干扰剂量效应试验。酚磺乙胺干扰剂量效应试验的药物浓度是依据其动力学特点尽可能选择药物进入人体后所能够达到的峰值水平，模拟药物浓度在人体的相对浓度，保证试验的真实性、准确性。干扰试验的临床可接受标准并无明确指标，在EP7-A2文件和文献[7]中提出了一些参考的依据，包括部分分析物的准确度要求、基于生物学变异的质量规范以及临床专家的意见等。本研究综合以上各因素确定选用基于生物学变异的质量规范中Tea%的期望值作为dmax。

本研究应用 EP7-A2 文件体外研究分析酚磺乙胺对UA项目的干扰，它的试验思路是先进行干扰筛选试验，在高浓度下判断药物是否会造成干扰，在确定酚磺乙胺有干扰效应后，可通过干扰剂量效应试验具体评估不同酚磺乙胺水平与干扰程度的关系。根据本次试验干扰筛选试验的结果|dabs95%CI最低值|>dmax，说明酚磺乙胺对UA 存在严重显著负干扰[10]。本试验UA的反应原理为UA的测定应用UA酶法，UA经UA酶氧化生成尿囊素，同时生成过氧化氢(H2O2)。H2O2在过氧化物酶(POD)的作用下与4-氨基安替比林(4-AAP)和N-(3-磺丙基)-3-甲氧基-5-甲基苯胺(HMMPS)反应生成一种琨亚胺染料，604 nm处吸收光度的改变与标本中UA的水平呈正比。查阅文献并结合UA酶法原理发现，血清中的UA是在酶催化作用下生成H2O2，H2O2又继续参与Trinder反应从而形成红色醌亚胺化合物，最后进行比色得出结果[11]。H2O2酶的特异性较低，一些还原物质如维生素C和谷胱甘肽可与色原性物质竞争H2O2，从而干扰氧化酶法的测定。而酚磺乙胺作为一种还原性物质，能对最终通过氧化反应产生色度改变的检测项目产生负干扰。同时干扰剂量效应试验分析结果得出，酚磺乙胺对酶法检测UA存在负干扰，且药物浓度越高对检测结果的负干扰程度越大。在低、高水平UA样品中，酚磺乙胺的水平分别在<29.84 mg/L和<44.43 mg/L时，负干扰程度未超过干扰试验的dmax。

由酚磺乙胺药代动力学特性可知，静脉注射后1 h血药浓度达到高峰，作用持续4～6 h，平均峰值300 mg/L，血中半衰期为5 h，4个半衰期排泄93.75%[12]。酚磺乙胺对UA能够产生干扰所需的最小浓度为血药峰值浓度的9.95%～14.81%，为尽量避免其对检验结果的干扰，建议使用酚磺乙胺的患者检测UA时，应在用药至少24 h 后进行抽血检测。对于肾功能代谢功能差的患者，可能需要更长时间关注酚磺乙胺药物对UA的干扰。

针对酚磺乙胺对检测UA所存在的干扰，肾功能不全患者用药后检测结果差异，建议服用酚磺乙胺患者的血清检测结果在临床评价时需加以高度警惕，当知道患者使用过酚磺乙胺以后，或者发现患者的UA结果与上次相比有明显下降的趋势，要考虑可能是药物影响检测结果，或采取另外的检测方法来进行复检，以便对患者肾功能做出正确、客观的评价。