结核感染T细胞斑点试验、腺苷脱氨酶及肿瘤坏死因子α检测在中老年人结核性胸膜炎诊断中的应用价值

王慧 向波 罗炜

(1广州医科大学附属第一医院检验科，广东 广州 510120；2广州呼吸健康研究院 呼吸疾病国家重点实验室 广州医科大学附属第一医院呼吸科)

结核病是一种传染性疾病，包含肺外结核与肺结核。结核性胸膜炎属于肺外结核，病因复杂，常见的有淋巴引流障碍、胸膜受感染病原体侵入、感染病原体由血液与淋巴侵入胸膜等〔1〕。临床对于结核性胸膜炎的诊断方法有很多种〔2〕，如病理活检、抗酸染色与分枝杆菌培养等，其中病理活检属于有创检查，分枝抗菌培养存在易漏检、敏感度低、耗时长等缺点，均不易在临床推广及使用。

近二三十年来，在世界范围内结核病的发病率和死亡率明显下降，但近年来中老年人肺结核的发病和死亡却下降很少〔3〕，与年轻人相比相对增高。中老年人群由于年龄、免疫力、基础疾病等原因，更易感染结核病或者是陈旧病灶复发；特别是因疾病入院的中老年人，院内感染的概率会更高，同时有可能加重原发疾病的病情。因此，如能及时发现结核患者及潜在患者，及时采取相应治疗或隔离措施，将对非结核中老年患者起到保护作用，也能使得结核患者得到及时治疗。

本文探究结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、腺苷脱氨酶(ADA)及肿瘤坏死因子(TNF)-α联合检测在中老年人结核性胸膜炎诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年3月至2018年8月广州医科大学附属第一医院100例中老年结核性胸膜炎患者为研究组，选取同期100例非结核性胸膜炎患者为参照组。研究组男、女患者分别为57例与43例；年龄55～82岁，平均(68.62±12.54)岁。参照组男、女患者分别为55例与45例；年龄55～82岁，平均年龄为(67.78±12.32)岁。纳入标准〔4〕：①结核性胸膜炎患者：资料齐全；以《临床诊疗指南：结核病分册》为诊断标准；胸腔积液可见结核分枝杆菌；病理活检可见干酪性肉芽肿；影像学诊断具备结核性胸膜炎特征；临床特点与结核性胸膜炎相符合；②非结核性胸膜炎患者：资料齐全；非结核性胸膜炎疾病。排除标准：恶性肿瘤；精神障碍；不配合研究者。两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2T-SPOT.TB试验 新鲜采集患者抗凝血标本，用淋巴细胞分离液进行分离及富集纯化T淋巴细胞，使用RPMI1640培养液将细胞浓度调整为2.5×109个/L；取出T-SPOT.TB试剂盒(生产厂家为英国Oxford Immunotec 公司)，该96孔板上已预先包被有γ干扰素单抗，每个标本分设阴性对照孔(加入50 μl培养液)、A抗原孔〔加入50 μl早期分泌靶向抗原(ESAT)-6〕、B抗原孔〔加入50 μl培养分泌蛋白(CFP)-10抗原〕、阳性对照孔(加入50 μl植物血凝素)，同时各孔内分别加入已调整好细胞浓度的细胞液100 μl，于37℃ 5%CO2培养箱中培育过夜，进行酶联免疫斑点反应后对显色斑点进行计数。

1.3ADA检测 取10 ml的玻璃管，收集5 ml胸腔积液，行离心操作，取上清液待测。采用贝克曼AU5800生化分析仪进行检测，ADA试剂盒的生产厂家为浙江东瓯诊断产品有限公司。

1.4TNF-α检测 取10 ml的玻璃管，收集5 ml胸腔积液，行离心操作，取上清液待测。TNF-α的检测采用链霉亲和素生物素-酶联免疫吸附试验，试剂盒为美国R&D公司出品，按试剂说明书进行操作。

1.5观察指标 对比两组患者T-SPOT.TB、ADA、TNF-α单独检测阳性率，T-SPOT.TB、ADA、TNF-α特异性、敏感度、阳性预测值、阴性预测值、诊断准确度及约登指数；T-SPOT.TB、ADA、TNF-α联合进行检测的各项指标结果，进行诊断性能分析。

1.6统计学方法 采用SPSS19.0软件行χ2检验。

2 结 果

2.1两组T-SPOT.TB、ADA、TNF-α单独检测阳性率 研究组T-SPOT.TB、ADA、TNF-α单独阳性率明显高于参照组(P<0.05)。见表1。

2.2T-SPOT.TB、ADA、TNF-α联合检测的阳性率比较 研究组联合检测阳性率均显著高于参照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组T-SPOT.TB、ADA、TNF-α检测阳性率〔n(%),n=100〕

2.3T-SPOT.TB、ADA、TNF-α单独检测的诊断效能评价 ADA检测特异性明显高于T-SPOT.TB(P<0.05)。T-SPOT.TB敏感度明显高于ADA及 TNF-α(P<0.05)。见表2。

2.4T-SPOT.TB、ADA、TNF-α联合检测的诊断效能评价 三项同时联合检测时的敏感性高于其他二项联合检测，与ADA+TNF-α的联检模式相比，差异有统计学意义(P<0.05)；但与T-SPOT.TB+ADA及T-SPOT+TNF-α的联检模式相比差异无统计学意义(P>0.05)。T-SPOT.TB+ADA+TNF-α联合检测敏感性高于各单项检测指标，差异有统计学意义(P<0.05)，但需要注意在提高诊断敏感性的同时，降低了检测特异性。见表2。

表2 T-SPOT.TB、ADA、TNF-α检测的诊断效能评价

3 讨 论

结核性脑膜炎、粟粒性肺结核及其他肺外结核病在中老年人均不罕见，中老年人肺结核患者相对增多可能有以下几个原因：①随着年龄的增长，中老年人抵抗力减低，加以中老年人常同时患有多种疾病或营养不良，使机体抵抗力更趋下降；此外，有些中老年患者在治疗中使用了皮质激素也使机体免疫功能降低。②中老年人并存病多，肺结核症状常被掩盖，易忽略而漏诊，成为传染源。③多年来对结核病的防治，重点放在儿童和青壮年人，对中老年人重视不够。鉴于以上情况，中老年人如体内原有陈旧结核病灶则可能重新活动，或者做为易感人群容易被感染。中老年人肺结核临床表现多无特殊症状，导致诊断不及时。因此如果能采用相应的检测手段，及时发现患者或潜在患者，才能及时进行相应治疗。

T-SPOT.TB诊断所运用的技术为酶联免疫斑点技术，是对效应T淋巴细胞数量进行测定，结核性胸膜炎患者由于受到结核分枝杆菌的特异性抗原的刺激，从而造成效应T淋巴细胞释放干扰素(IFN)-γ〔5，6〕。研究表明，T-SPOT.TB诊断具有较高的敏感度，可在临床中推广使用，有学者曾对非结核性胸膜炎与结核性胸膜炎患者分别进行T-SPOT.TB检验，李锐成等〔7〕和王晓娟等〔8〕报道结果显示，结核性胸膜炎患者中灵敏度分别约为84%及85%，特异性分别约为61%及71%，提示T-SPOT.TB检验可用于结核性胸膜炎的诊断，且具有较高的灵敏度与特异性。本研究结果表明外周血T-SPOT.TB诊断为结核性胸膜炎诊断手段之一，与上述研究结果基本一致。

ADA属于分布于体液与人体组织的一种常见酶，由T淋巴细胞所产生，其活性受到淋巴细胞的分化与激活影响〔9〕，当机体感染结核分枝杆菌时，其细胞免疫将发生变化，而ADA活性为细胞免疫功能的反映指标，其变化可用于多种免疫功能影响疾病的诊断。结核性胸膜炎患者的细胞在刺激下，其胸腔积液的淋巴细胞增多，伴随ADA水平升高〔10〕。因此，ADA水平可用于结核性胸膜炎的诊断中。本研究结果表明ADA在结核性胸膜炎的诊断中具有较高的特异性与敏感度，诊断价值高。

TNF-α是由活化巨噬细胞、T淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞所产生，属于无特异性毒性细胞因子，具有肿瘤细胞杀伤作用。当人体感染结核分枝杆菌时，结合肿瘤细胞特定受体，移动至细胞内，靶细胞溶酶体将其摄取后，溶酶体的自身稳定性出现降低，释放各种酶，出现细胞溶解〔11〕，结核杆菌感染的机体局部表现为TNF-α水平升高，且与结核分枝杆菌的数量呈正相关。因此，TNF-α水平可用于结核性胸膜炎的诊断中。本研究结果表明TNF-α在结核性胸膜炎的诊断中具有较高的特异性与敏感度，诊断价值高。

综上所述，T-SPOT.TB、ADA、TNF-α均可用于中老年人结核性胸膜炎的检查，均具有较高的特异性与敏感度，其中T-SPOT.TB检测敏感性优于其他两个检测指标，ADA检测特异性优于其他两个检测指标；联合检测可以提高阳性诊断率，有助于中老年人结核性胸膜炎患者的诊断，及时进行相应治疗。其中，T-SPOT.TB由于标本获得简单，只需采血8～10 ml即可进行检测，检测敏感性、特异性高，对检测潜伏性结核及结核感染有重要意义，可以作为中老年人入院的筛查项目。