单人份全自动化学发光免疫分析法测定降钙素原的性能评价

潘晓芳，张小静，黄宇哲，刘挺，吴静标（通信作者）

1 广东省医疗器械质量监督检验所 （广东广州 510663）；2 深圳天深医疗器械有限公司 （广东深圳 518104）

降钙素原（procalcitonin，PCT）由116个氨基酸残基组成，是降钙素的前肽物，由降钙素、下钙素及1个含有57个氨基酸残基的N 末端片段组成[1]。在健康情况下人体血清中PCT 含量很低，在发生细菌感染时PCT 含量急剧增加。PCT 是特异性区分细菌感染和其他原因引起的炎症反应的重要标志物，PCT 含量的检测可以用于辅助诊断细菌感染，并指导局部细菌感染或者系统性感染患者使用抗生素进行治疗[2]。PCT 含量的变化反映了炎症反应的剧烈程度，其水平高低与感染程度成正相关，若水平过高，则患者极可能发展为脓毒血症和脓毒性休克[3-4]。

PCT 是早期诊断脓毒症患者准确客观的实验室指标，不仅可以判断脓毒症患者的严重程度，还对监测和评估患者预后有重要意义[5]。血液中PCT 水平不仅可判断是否存在细菌感染，还可区分革兰阳性杆菌的阴阳性，指导早期抗菌药物的使用[6]。

目前，国内免疫层析和免疫荧光仍然是免疫检验的主流技术，与传统定性或半定量的免疫层析方法学比较，化学发光即时检验具有灵敏度高、操作简单、结果处理及时准确等优势，化学发光即时检验特别是单人份化学发光即时检验开始成为行业重点研究方向。

对于患者数量少的基层医院，单人份化学发光即时检验可以降低试剂和耗材成本，减少医疗资源的浪费，单人单次的检测方式简单快捷，对操作人员的专业度要求不高，同时便于存储和低频次使用，减少了标本收集和送检等流程，缩短了报告时间，同时可以减少人为误差。与多人份化学发光即时检验比较，单人份化学发光仪器无液路系统，故障率低，无日常维护，试剂不存在开瓶有效期，并且可根据不同类型的免疫反应模式，设计多样化的组分分配及分装方式，可扩展性强。因此，单人份化学发光即时检验更符合基层和临床市场的实际需求。

本研究通过单人份全自动化学发光免疫分析法测定PCT，研究单人份全自动化学发光免疫分析系统及其配套的PCT 测定试剂盒的线性、检测限、准确度和重复性。

1 仪器和试剂

1.1 检验仪器

天深单人份全自动化学发光免疫分析系统ACCRE 6，Roche Cobas e411分析系统。

1.2 检验试剂

天深PCT 测定试剂盒、天深试剂盒配套校准品准确度样本、重复性样本、检测限样本。

2 检验原理

天深PCT 测定试剂盒采用双位点夹心化学发光免疫分析法，将样本和碱性磷酸酶标记的抗人PCT 抗体加入抗人PCT 抗体包被的磁珠中；混匀孵育后，样本中的抗原与磁珠上的抗体以及碱性磷酸酶标记的抗体结合，形成免疫复合物；反应结束后，磁场吸附磁珠，通过3次清洗去除未结合的物质，加入反应底物，通过光电倍增管检测发光强度，样本中待检测物质的浓度与发光强度成正比，样本中待检测物质的量由定标曲线来确定。

3 检验方法

按照天深PCT 测定试剂盒和Roche Elecsys BRAHMS PCT检测试剂盒说明书进行检测。

4 天深PCT 测定试剂盒性能评价

4.1 线性试验结果

测试系列浓度的PCT 工作标准溶液，将结果平均值和理论值（表1）用最小二乘法进行线性拟合并计算，得到R2=0.9998，即PCT 的线性相关系数r 为0.99999，PCT 在0～100 ng/ml 范围内有良好的线性关系，见图1。

表1 PCT 的线性结果（ng/ml）

图1 PCT 试剂盒的线性评估结果（ng/ml）

4.2 检测限试验结果

对5份浓度近似检出限的低值样本进行检测，每份样本检测5次，低于空白限0.02 ng/ml 的检测结果的数量为0个，见表2。

4.3 准确度试验结果

测定两个水平的准确度样本，每个水平平行测定3次，每次测试结果记为Xi，按公式（1）计算相对偏差，水平1样本的最大相对偏差为6.12%，水平2样本的最大相对偏差为-6.88%，见表3。

式中Bi为相对偏差，Xi为实际测定结果，T 为标定浓度。

表2 PCT 检测限的测试结果（ng/ml）

表3 PCT 准确度的测试结果及相对偏差

4.4 重复性试验结果

对两个浓度水平的样本各重复检测10次，计算10次测量结果的平均值M 和标准差SD，得出变异系数CV 小于4%，重复性良好，见表4。

表4 PCT 重复性的测试结果及CV

综上所述，单人份全自动化学发光免疫分析系统测定PCT 具有线性关系良好、灵敏度高、准确性和重复性好的特点，适用于PCT 检测。

［参考文献］

［1］ Shen WJ, Zhuo Y, Chai YQ, et al. Enzyme-Free Electrochemical Immunosensor Based on Host–Guest Nanonets Catalyzing Amplification for Procalcitonin Detection[J]. ACS Appl Mater Interfaces, 2015, 7(7): 4127-4134.

［2］ Christ-crain M, Jaccard-stolz D, Bingisser R, et al. Effect of procalcitonin-guided treatment on antibiotic use and outcome in lower respiratory tract infections: cluster-randomised, singleblinded intervention trial[J]. Lancet(London England), 2004, 363(9409): 600-607.

［3］ Gaini S, Koldkjaer OG, Pedersen C, et al. Procalcitonin, lipopolysaccharide-binding protein, interleukin-6 and C-reactive protein in community-acquired infections and sepsis: a prospective study[J]. Critical Care, 2006, 10(2): R53.

［4］ Andreola B, Bressan S, Callegaro S, et al. Procalcitonin and C-reactive protein as diagnostic markers of severe bacterial infections in febrile infants and children in the emergency department[J]. Pediatr Infect Dis J, 2007, 26(8): 672-677.

［5］ Chu CM, Kao KC, Huang SH, et al. Diagnostic value of apoptosis biomarkers in severe sepsis-A pilot study[J]. Cell Mol Biol(Noisyle-grand), 2016, 62(11): 32-37.

［6］ 刘坤贺，张春美.血清降钙素原对革兰阴性或革兰阳性菌血流感染的诊断价值[J].临床肺科杂志，2018，23（4）： 663 -665.