肝细胞肝癌患者血清中成纤维细胞生长因子19表达对早期诊断的意义

胡晓菡，田新宇，沈 瀚

0 引 言

肝细胞肝癌是肝癌的常见类型，是一种高死亡率的原发性肝癌。近年来，新发病例数逐年上升，并有年轻化趋势。由于其进展迅速，很多患者发现时已经处于疾病的中晚期，导致其预后较差[1]。因此深入研究肝细胞肝癌的疾病发展机制，寻找其潜在肿瘤标志物用于患者的早期诊断显得尤为重要。肿瘤标志物在肿瘤的诊断、治疗效果及预后的预测方面有着广泛的应用。通常在肝癌疾病中，甲胎蛋白(AFP)被用作血清的生物标志物，在检测肝癌的发病和复发方面起着重要的作用，虽然具有一定的特异性，但其干扰因素较多，且在肝细胞肝癌患者中经常保持在正常范围内[2-3]。成纤维细胞生长因子19(fibroblast growth factor 19，FGF19)大部分在肝内表达，通过成纤维细胞生长因子受体促进细胞的分化、参与损伤组织修复，血管生成及干细胞增殖分化等[4]。研究发现，以自分泌方式产生的FGF19激活了成纤维细胞生长因子19/成纤维细胞生长因子4(FGF19/FGFR4)信号，参与了肝癌的发展[5]。还有报道显示，肝癌患者血清FGF19的过度表达与疾病预后不良有一定关联[6]，但其是否能在肝细胞肝癌中作为一个生物标志物尚不清楚。本课题组从2008年开始对在南京鼓楼医院诊断为慢性乙肝感染人群进行长期随访，近年来发现部分随访者发展为肝癌患者，在这些随访者中收集经病理学确诊为肝细胞肝癌患者临床资料，采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测肝细胞肝癌患者以及慢性肝炎和健康人群血清FGF19的水平，进一步探讨其在肝细胞肝癌患者早期诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2017年10月至2019年10月鼓楼医院经病理学确诊为肝细胞肝癌患者97例(肝细胞肝癌组)，其中男76例，女21例，平均年龄57岁；以及经实验室数据、临床表现和组织学诊断为慢性肝炎患者102例(慢性肝炎组)，男71例，女31例，平均年龄51岁。并选取同期73例健康人作为健康对照组。排除其他恶性肿瘤疾病及免疫性疾病。本研究经过医院伦理委员会批准(批准号：2008022)，所有参与者及家属均签署了知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 样本采集及检测肝细胞肝癌组于术前清晨空腹抽取肘静脉血5 mL，3500×g离心5 min，吸取血清放置于-80 ℃冰箱保存。健康对照组及慢性肝炎组于清晨空腹抽取肘静脉血5 mL，样本处理方式同前。采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定受试者血清FGF19水平，检测仪器为西门子免疫发光检测仪，试剂盒为FGF19检测试剂盒(北京百奥莱博科技有限公司)。AFP检测使用西门子免疫发光检测仪及配套试剂盒，生化项目检测使用Beckman生化仪及配套试剂盒，血小板检测使用SYSMEX血常规仪及配套试剂。实验操作严格按照试剂说明书的标准程序进行。

1.2.2 观察指标收集研究对象的临床资料，包括性别、年龄、肿瘤家族史、FGF19、AFP、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、清蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、血小板(PLT)、病理报告。根据肿瘤学国际性分期标准TNM分期系统[7]将肝细胞肝癌患者分为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期，计算不同病理分期患者的FGF19水平。在肝细胞肝癌患者中将AFP与FGF19联合检测，分析FGF19检测对现有肝癌检测标记物的影响。

2 结 果

2.1 入组研究对象一般临床资料比较3组研究对象在年龄、AFP、ALT、AST、ALB、PLT方面比较,差异具有统计学意义(P<0.05)；而性别、肿瘤家族史和TBIL方面比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 入组研究对象一般临床资料比较

2.2 血清FGF19水平比较慢性肝炎组患者血清FGF19水平(57.62±4.66)pg/mL与健康对照组(49.83±5.79)pg/mL比较差异无统计学意义(P>0.05)；而肝细胞肝癌组患者血清FGF19水平(122.55±13.28)pg/mL，明显高于慢性肝炎患者和健康对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。

2.3 血清FGF19水平与肝细胞肝癌患者病理分期的关系肝细胞肝癌Ⅰ期(29例)、Ⅱ期(23例)、Ⅲ期(30例)、Ⅳ期(15例)患者血清FGF19水平分别为(89.5±12.2)、(103.9±6.9)、(133.9±22.5)及(152.6±26.8)pg/mL，与TNM分期呈正相关(r=0.696，P<0.001)，见图1。

图1 肝细胞肝癌患者不同病理分期与FGF19水平的相关性

2.4 血清FGF19鉴别肝细胞肝癌的诊断效能在肝细胞肝癌患者中将AFP与FGF19联合检测显示，敏感性从43.2%提高到69.7%，见图2。

图2 血清FGF19鉴别肝细胞肝癌的诊断效能

3 讨 论

肝细胞肝癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，其发病机制尚不明确。在肝癌疾病中，AFP虽被用作血清的生物标志物，但很容易被干扰，不利于疾病的早期诊断。随着基因测序技术的不断完善，在发生异常改变的基因组区域中寻找可能的候选基因成为研究标志物的焦点[8]。研究证实在部分肝细胞肝癌患者样本中发现位于染色体11q13位点的FGF19基因出现了部分扩增[9]。且免疫组化实验显示，肝癌组约50%的病例中观察到FGF19的过度表达[10]。成纤维细胞生长因子(FGFs)通过FGF受体(FGFR)酪氨酸激酶在细胞生长、分化、血管生成和代谢等方面发挥了重要的调节作用[11]。而FGF/FGFR信号转导通路的失调也被认为促进了包括肝细胞肝癌在内的多种类型癌症的发展[12-13]，而在这些疾病的血清FGF19水平确有明显升高。因此本研究试图探讨FGF19能否作为肝细胞肝癌的肿瘤标志物，用于该疾病的早期筛查与诊断。

首先用ELISA法检测肝细胞肝癌患者血清FGF19的水平，结果与王磊等的结论一致[5]，与对照组相比，慢性肝炎组患者组FGF19浓度略有升高，肝细胞肝癌组患者则明显升高。有研究认为胆汁淤积和肝功能障碍会增加血液和胆汁中的浓缩胆汁酸，并导致肝细胞损伤，FGF19通过下调胆固醇7α羟化酶(Cyp7a)抑制胆汁酸合成[14]，因此慢性肝炎患者血清FGF19水平的轻度升高可能是血清胆汁酸水平升高的负反馈。为进一步研究FGF19与肝细胞肝癌的关系，我们使用TNM分期将肝细胞肝癌患者按不同病理分期计算患者的FGF19水平，Prizm软件分析显示，FGF19数值与TNM分期呈正相关性，进一步证实了两者之间的密切关系。很多研究表明，AFP作为肝癌的重要诊断和监测指标，特异性虽然相对较高，但容易被干扰，对早期诊断有一定影响，而肝癌患者血清FGF19水平的升高已被报道，因此本研究在肝细胞肝癌患者中将AFP与FGF19联合，ROC曲线显示，两者结合敏感性增加，提高了疾病的诊断效能，进一步为FGF19应用于临床诊断提供了有力的佐证。与AFP不同的是，FGF19作为一种功能蛋白，在肿瘤细胞和内皮细胞的增殖中起着重要作用，因此也被认为是很有前途的治疗靶分子[15]。

本研究发现，肝细胞肝癌患者血清FGF19呈显著性上升，同时FGF19水平和TNM分期呈正相关，与AFP联合可提高诊断效能。这些结果提示血清FGF19可以作为潜在生物标志物，用于肝细胞肝癌早期筛查和病情监测。同时，本研究也存在一定的不足:FGF19/FGFR4信号的激活有助于其分子靶向药物的耐药[16]，因此FGF19的异常产生可能与这些药物的治疗效果有关，需要在今后的研究中进一步验证。