断血流中总黄酮的提取工艺优化

张晓冲 张颖

摘要：断血流为唇形科风轮菜属植物灯笼草（荫风轮）Clinopodium polycephalum（Vaniot）C.Y.Wu etHsuan 和风轮菜 C.chinense（Benth.）O.Kuntze 干燥地上部分。含有皂苷、黄酮、挥发油等成分。本实验对断血流中的总黄酮的提取工艺进行了探讨，确定了乙醇提取总黄酮的优化工艺为乙醇浓度80%、提取时间90min、提取温度60℃，为进一步开发断血流药材进行了科学的探讨。

关键词：断血流;黄酮;提取

断血流为唇形科风轮菜属植物灯笼草（荫风轮）Clinopodium polycephalum（Vaniot）C.Y.Wu etHsuan和风轮菜C.chinense（Benth.）O.Kuntze 干燥地上部分。具有收敛止血的功效，用于崩漏、尿血、鼻衄、牙龈出血、创伤出血，适用于临床上各种出血症，尤其对妇科出血性疾病有较好的疗效，味微苦、涩，性凉，归肝经[1，2]。风轮菜和荫风轮原为民间用药，风轮菜始载于《救荒本草》（1406 年），荫风轮始载于《植物名实图考》（1848年），后被1977年版《中国药典》收录[3]，断血流中的化学成分主要包括皂苷、黄酮、氨基酸、多糖、酚性成分和挥发油等成分[4，5]，其中黄酮类化合物已发现为17种，主要为黄酮和二氢黄酮，其中总黄酮含量约为2.0-2.3%[6]。断血流的主要药理作用来源于皂苷，有关皂苷的含量测定及药理作用研究较丰富，黄酮类成分亦是具有多种明确药理作用的天然成分之一，也有研究表明断血流中的黄酮成分具有活血化瘀的作用，但其有关的提取分离工作鲜见报道，本实验对断血流中的总黄酮的提取工艺进行了探讨，确定了乙醇提取总黄酮的优化工艺，为进一步开发断血流药材进行了科学的探讨。

1 仪器与试剂

756型紫外可见分光光度计（上海元析），分析天平（上海蒲春），9015电热鼓风恒温干燥箱（上海环峰）;S26电热恒温水浴锅（上海精宏）;断血流（购自安徽亳州，经鉴定为药材断血流）筛尽泥土，低温烘干至恒重，粉碎后备用;芦丁（中国药品生物制品检定所），无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠均为分析纯，用水为蒸馏水。

2 实验方法

2.1 供试品的制备

精密称取断血流药材于圆底烧瓶中，在瓶中加入乙醇加热回流提取，重复2次，合并提取液后回收乙醇至浸膏状，乙酸乙酯萃取后备用。

2.2 标准曲线

称取干燥后的芦丁标准品0.001g加甲醇定容至100ml，职称浓度0.1mg/ml的标准品溶液备用。吸取标准溶液0.00、1.00、2.00、4.00、8.00ml，依次加入水6ml、5%亚硝酸钠溶液1ml、10%硝酸铝溶液1ml、1mol/L氢氧化钠溶液10ml，每次加液后应放置6min，最后放置15min后测定波长510nm处的吸光度，得回归方程Y=8.953X+0.0384，R2=0.9996。

2.3 含量测定

取各种工艺的断血流药材提取液1ml，加入甲醇定容至100ml，依次加入水6ml、5%亚硝酸钠溶液1ml、10%硝酸铝溶液1ml、1mol/L氢氧化钠溶液10ml，每次加液后应放置6min，最后放置15min后测定波长510nm处的吸光度，计算提取液中总黄酮含量。

2.4 正交实验设计

采取L9（34）正交表进行断血流总黄酮提取工艺筛选，实验因素见表1.

3实验结果

3.1 单因素实验

不同因素水平下断血流的总黄酮提取结果表明在选取的因素范围内，提取时间和乙醇浓度对于总黄酮提取率的影响基本为随因素水平上升而上升的趋势，提取温度对总黄酮提取率的影响呈现先上升后下降的趋势，其中乙醇浓度对提取率的影响最大，而提取温度和时间则相对影响较小。

3.2正交实验

在前期实验基础上，按表1的设计方案进行断血流总黄酮提取工艺测试，以乙醇浓度、加热时间和加热温度为因素，选择三个水平进行正交实验，结果见表2。

从表2结果可见断血流总黄酮的最佳提取工艺为A3B3C2，即乙醇浓度80%、提取时间90min、提取温度60℃，乙醇浓度对提取率的影响最大，而提取温度和时间则相对影响较小。

4 讨论

断血流为唇形科风轮菜属植物灯笼草（荫风轮）和风轮菜干燥地上部分。具有收敛止血的功效，临床上适用于各种出血症。实验结果显示，乙醇回流提取法提取断血流中的总黄酮，提取最佳工艺为：乙醇浓度80%、提取时间90min、提取温度60℃。

断血流药理作用丰富，目前已由实验证实具有止血作用、抗菌作用、降血糖作用、对心血管作用、抗炎作用、抗氧化作用、活血作用和收缩子宫作用等。由于断血流的主要作用物质为皂苷类，目前该药物的研究主要集中在皂苷的药理和提取分离，断血流中已发现17种黄酮类成分，主要为黄酮和二氢黄酮，有研究表明风轮菜的醇提物中以香蜂草苷为代表的水溶性较好的二氢黄酮类成分和以醉鱼草皂苷 IV为代表的皂苷类成分是活血作用的主要物质基础，且具有双向作用即小剂量止血，大剂量活血[7]，CPS各剂量组具有活血化瘀的功效，能降低急性血瘀大鼠的全血比粘度、血浆比粘度和红细胞压积[8]。基于较好的药理作用，本研究着眼于断血流中黄酮类化合物的提取工艺，扩展了断血流药材的研究范围，为规模提取分离其中的黄酮类成分并进一步开发利用药材提供科学依据。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中国药典（一部）.北京：中国医药科技出版社.2010.

[2]蒋凌云，刘圣.断血流研究进展[J].基层中药杂志.1999，13（3）：48-50

[3]昝丽霞.超声提取-分光光度法测定断血流总皂苷含量.西北大学学报（自然科学版）.2007，37（6）∶1016～1018.

[4]迟海东.路金才.風轮菜属药用植物研究进展[J].沈阳药科大学学报.2006.23（2）：123-128.

[5]程霞.陈国广.石绍华.止血中草药断血流研究进展[J].安徽医药.2007.11（5）：454-456.

[6]年四辉.刘丽敏.廖启元，等.断血流及其制剂中总黄酮的含量测定研究[J].中国民族民间医药，2012（4）∶37-38.

[7]陈靖宇.陈建民.肖培根.风轮菜属植物荫风轮和风轮菜的有效成分研究.北京：中国协和医科大学中国医学科学院博士学位论文.1997.

[8]余世春.许旭东.李亚伟.等.一种治疗心血管疾病的中药及制备方法.CN201010106719.5，2010-02-08.

基金：安徽中医药高等专科学校校级科研项目ZRKXY 201915。