染色砂糖橘前处理方法讨论

陆武　陈思敏　张艳

摘 要：通过3种不同的样品前处理方法，利用液相色谱仪分别对染色砂糖橘的果皮和果肉进行合成着色剂的检测，从而比较出最优的样品前处理方法。同时得出染色砂糖橘的果皮和果肉中是否含有合成着色剂。

关键词：染色砂糖橘;液相色谱仪;合成着色剂;前处理

最近市面上发现了有商家对砂糖橘进行染色的情况，国家标准中没有相关产品的检验方法，为了检测出染色成分是否为合成着色剂，最终通过讨论确定了3种样品前处理方法，分别对染色橘子的皮和肉进行检验，最终再选择出最优的检验方法。采用皮和肉分开处理的方法确认染色橘子果皮和果肉是否都有合成着色剂。

1 实验样品

市面上市民发现的有染色情况的砂糖橘。

2 实验原理

食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。

3 实验试剂

甲醇（色谱级）、乙腈（色谱级）、正己烷、盐酸、冰醋酸、甲酸、乙酸铵、柠檬酸、无水硫酸钠、正丁醇、无水乙醇、氨水、聚酰胺粉、乙酸乙酯、环己烷、合成着色剂标准物质等。

4 仪器和设备

高效液相色谱仪（带二极管阵列或紫外检测器）、天平、水浴锅、G3垂融漏斗、凝胶色谱仪、组织捣碎机、离心机、漩涡混合器、旋转蒸发仪、氮吹仪等。

5 样品前处理方法

5.1 参考GB 5009.35-2016标准方法

参考GB 5009.35-2016 食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定。

1.试样制备。称取5～10 g（精确至0.001 g）经粉碎混匀的样品，放入100 mL小烧杯中，用水反复洗涤色素，到砂糖橘无色素为止，合并色素漂洗液为样品溶液。

2.色素提取。聚酰胺吸附法：向样品溶液中加柠檬酸溶液，调pH到6，加热至60 ℃，将1 g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60 ℃ pH为4的水洗涤3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3～5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，直至色素完全解吸，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5 mL。经0.45 μm微孔滤膜过滤，进高效液相色谱仪分析。

3.测定。将样品提取液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

5.2 參考GB5009.35-2016标准方法

参考GB5009.35-2016 食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定。

1.试样制备。称取5～10 g（精确至0.001 g）经粉碎混匀的样品，放入离心管中。

2.色素提取。加无水乙醇-氨水-水溶液（7+2+1，体积比）至25 mL，将离心管放到水浴中10～15 min，离心10 min（此步骤重复3-5次），提取上清液，样品溶液加柠檬酸溶液调pH到6，加热至60 ℃，将1 g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60 ℃pH为4的水洗涤3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3～5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，直至色素完全解吸，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5 mL。经0.45 μm微孔滤膜过滤，进高效液相色谱仪分析。

3.测定。将样品提取液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

5.3 参考SN/T 3638-2013 出口食品中脂溶性着色剂的测定

1.试样制备：称取5～10 g（精确至0.001 g）经粉碎混匀的样品于50 mL离心管中，准确加入20 mL乙酸乙酯，均质2 min， 以4 000 r/min的速度离心8 min，将上清液过滤到鸡心瓶中。再用20 mL乙酸乙酯重复提取一次，过滤后用5 mL乙酸乙酯冲洗滤纸，用同一鸡心瓶收集滤液，将滤液在40 ℃下蒸发至近干，用乙酸乙酯-环己烷定容至10 mL的玻璃管中，待净化。

2.色素提取净化。将10 mL溶液按条件净化，净化后样液经0.45 μm微孔滤膜过滤，进高效液相色谱仪分析。

3.测定。将样品提取液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

6 仪器条件

色谱柱：C18柱。柱温：35 ℃。进样量：10 μL。

二极管阵列检测范围400～800 nm，紫外检测器波长：254 nm。

7 结果分析

分别利用3种前处理方法对染色砂糖橘的果皮和果肉进行前处理，然后利用高效液相色谱仪对合成着色剂进行检测，通过实验比较，3种方法都可以很好的检测出样品中的合成着色剂。但第一种前处理方法相对于其他两种操作简单，而且可以大大的节约前处理时间，所以最终选用第一种前处理方法作为本实验的最终方法。通过本次实验得出，染色砂糖橘的表皮确实含有合成着色剂，但是果肉中并没有检测出合成着色剂，最终给市民一个满意的答复。