吉林市部分地区绿壳蛋鸡新城疫和禽流感抗体检测与分析※

●左 丽 韩国瑞 张莉莉 赵 桐 朱宏雪 姜 成

（吉林农业科技学院动物科技学院吉林吉林132109）

新城疫（Newcastle disease，简称ND）是由新城疫病毒（副黏病毒）引起的禽类的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病，以高热、呼吸困难下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。禽流感（Avian Influenza，简称AI），全名鸟禽类流行性感冒，是由A型流感病毒引起的禽类的一种从呼吸系统到严重全身败血症等多种症状的传染病。

新城疫和禽流感是在养殖禽类的过程中较为常见的两种病毒性传染病，严重影响产蛋率，会造成鸡只的大量死亡，给养殖场造成很大的经济损失。近年来，吉林市绿壳蛋鸡的养殖量在不断增加，这两种病毒病的发病率也有所提高。为提高养殖场对绿壳蛋鸡新城疫和禽流感免疫的重视程度，减少这两种病毒病的发生，我们于2019年4~12月对吉林市25个绿壳蛋鸡养殖场进行了鸡蛋样本的采集及抗体的检测，旨在了解吉林市部分地区绿壳蛋鸡场的新城疫和禽流感的免疫情况，为该地区制定科学的免疫程序提供参考依据。

1 试验材料

1.1 样本的来源与采集

试验材料来源于吉林市25个养殖场产蛋高峰期的绿壳蛋鸡，将25个养殖场按1~25的顺序命名。从每个养殖场各随机抽取24枚鸡蛋，送到实验室进行新城疫和禽流感抗体效价的检测。

1.2 主要器材

电子天平仪、LD4-2低速离心机、DH6000A型电热恒温培养箱、微量振荡器、微量移液器（规格为50uL）、离心管、一次性枪头（规格分别为50uL、10uL、5uL）、96孔微量反应板、一次性采血针、小烧杯、彩色多道可调移液器。

1.3 主要试剂

新城疫血凝抑制试验抗原和标准阳性血清、禽流感H9、H7、H5亚型血凝试验抗原及标准阳性血清、1%的鸡红细胞悬液、三氯甲烷、生理盐水、5%枸橼酸钠。

1.4 试验地点

吉林农业科技学院动物微生物实验室。

2 试验方法

2.1 样本的处理方法

打开鸡蛋样本，放在已消毒待用的培养皿中，用注射器抽取出1mL卵黄，放入10mL离心管中，作4倍稀释，即1mL卵黄+3mL生理盐水，制成卵黄稀释液，然后向另一个2mL离心管中加入750uL三氯甲烷，再加入750uL卵黄稀释液混合离心，离心之后取上清液，即为抗体。48h内检测的抗体可置于4℃冰箱中保存，否则置于20℃冰箱中待检[1]。

2.2 血凝试验（HA）

首先加稀释液：用微量移液器分别向反应板的第1~12孔，加生理盐水50uL，然后用微量移液器吸取5倍稀释的抗原50uL于第1孔中，并反复吹打4~5次，混匀后吸出50uL至第2孔，依次倍比稀释到11孔，从第11孔吸出50uL弃去，第12孔不加抗原作为红细胞对照。用微量移液器分别向1~12孔加1%的红细胞悬液50uL，置于微量振荡器上，振荡1min，放置于37℃恒温箱静止10~15min后观察结果。

将反应板倾斜45°，若沉于孔底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者，表明红细胞未被病毒凝集或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集[2]。

2.3 血凝抑制试验（HI）

加稀释液：用微量移液器分别向反应板的第1~12孔加生理盐水50uL。倍比稀释被检血清（或卵黄抗体）：用微量移液器吸取待测血清（或卵黄抗体）50uL至第1孔中并反复吹打4~5次，混匀后吸出50uL至第2孔，依次倍比稀释到第11孔，弃去50uL，第12孔不加血清作抗原对照。加4单位抗原，1~12孔每孔各加50uL。将96孔反应板置于振荡器上，振荡1min，放置于37℃恒温箱静置5min，用微量移液器向1~12孔各加1%的红细胞悬液50uL，置于振荡器上，振荡1min，放置于37℃恒温箱静置10~15min后观察结果。

将反应板倾斜45°，若沉于孔底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者，表明红细胞未被病毒凝集，即凝集现象被抑制；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集，即凝集现象未被抑制[3]。

2.4 新城疫和禽流感的平均效价值和离散度的标准范围

见表1。

表1新城疫和禽流感抗体的平均效价值和离散度的标准范围

3 结果与分析

3.1 25个鸡场新城疫和禽流感抗体的平均效价值及离散度

25 个鸡场新城疫和禽流感抗体的检测结果，见表2。结果表明，免疫效果最理想的是新城疫，有20个鸡场抗体效价平均值达到合格标准，有18个鸡场的离散度达到合格标准。禽流感H9抗体效价平均值达到合格标准的有17个鸡场，离散度达到合格标准的有15个鸡场；禽流感H7抗体效价平均值达到合格标准的有13个鸡场，离散度达到合格标准的有11个鸡场；禽流感H5Re-11抗体效价平均值达到合格标准的有12个鸡场，离散度达到合格标准的有8个鸡场；禽流感H5Re-12抗体效价平均值达到合格标准的有13个鸡场，离散度达到合格标准的有9个鸡场；有3个鸡场（6、9、10）没有检出禽流感H7、H5Re-11和H5Re-12抗体；还有1个鸡场（22）没有检测出禽流感H5Re-11和H5Re-12抗体。

表2 25个鸡场新城疫和禽流感抗体的平均效价值及离散度

续表2

3.2 25个鸡场新城疫和禽流感抗体效价平均值及离散度的合格率

统计结果见表3所列，参照表1和表2计算出25个鸡场新城疫的抗体效价平均值合格率为80%，离散度的合格率为72%，禽流感H9抗体效价平均值合格率为68%，离散度的合格率为60%；而H7、H5Re-11、H5Re-12抗体效价平均值合格率及离散度的合格率都偏低。

表3 25个鸡场新城疫和禽流感抗体效价平均值及离散度的合格率

4 讨论

从25个鸡场抗体样本检测的结果来看，吉林市部分养殖场的绿壳蛋鸡新城疫的免疫情况还是比较理想的，禽流感H9抗体的免疫情况相对可以，但是还是偏低，而H7、H5Re-11、H5Re-12抗体效价平均值合格率及离散度的合格率则不理想。

鸡群抗体效价的影响因素有如下几点：

4.1鸡群的基础免疫次数不够。新城疫在开产前一般至少免疫5次，而开产后每隔4~5d要进行1次饮水免疫，3~4个月要进行1次灭活苗的注射。其他疫苗也应该按照鸡体本身抗体的变化情况进行免疫。

4.2养殖场对免疫工作不重视。特别是对禽流感H5抗体的免疫重视程度不够，有的养殖户和养殖场根本就不进行免疫，造成很大的疫病感染风险。

4.3其他原因。疫苗原因、母源抗体的干扰、免疫程序的不合理、乱用抗生素、免疫抑制性疾病、病毒毒力增强、机体本身因素和环境因素等。