安徽池州大山村富硒益生菌种的分离与鉴定

张伟　李帆　丁文渊

【关键词】富硒;益生菌;鉴定

基金项目：安庆医药高等专科学校自然科学重点项目（No. ZR2019001）。

硒（Se）元素是由瑞典化学家Berzlius于1817年从生产硫酸的矿尾中发现。硒对生命健康有极其重要的作用，具有抗自由基、抑癌抗癌、延缓衰老、提高机体免疫力、解除重金属中毒、维持正常繁殖等各种功能[1]，缺硒会引起多种疾病，比如克山病和大骨节病[2]。富硒的菌株能通过生物转化把有毒的无机硒转变成无毒的有机硒，其具有成本较低、生物利用率较高、硒含量较高、对环境污染小等优势[3]。富硒益生菌同时具有发挥有机硒和益生菌的双重生物学功能，用于人体补硒效果更好，又可改善人体的生理机能。

安徽省池州市石台县大山村是继陕西紫阳、湖北恩施之后的第3个全国罕见的天然富硒村[4]。经分析检测，石台大山村土壤平均含硒4.4 mg/kg，是普通土壤20倍。研究[5]表明细菌对硒的耐受性与土壤中的可溶性硒含量和可交换态硒含量均呈显著正相关。本次试验以石台县大山村土壤为采集样本，拟筛选出富硒能力较高的益生菌，进一步丰富富硒益生菌的研究，为下一步研究富硒益生菌制剂对小鼠肠道菌群的影响提供一定的基础。

1.实验试剂

营养琼脂培养基（杭州微生物试剂有限公司）;革兰氏快速染色液 （珠海贝索生物技术有限公司）;细菌微量生化鉴定管（广东环凯生物科技有限公司）。

2.实验方法

2.1于安徽省池州市石台县大山村4处不同区域（分别在田地、山脚、山腰、山顶）采集富硒土壤样本8份，将样本经生理盐水梯度稀释后分别置培养箱37℃和28℃培养24小时后，选取生长旺盛、清晰的菌落进行分离、纯化得到若干株益生菌， ⑵将分离出的若干纯菌株通过菌落特征，革兰染色和明胶液化、接触酶、糖发酵等生理生化实验初步鉴定菌种;

2.2经16S rRNA确定生物学分类地位。

3.实验结果

经培养、分离、纯化，最终得到三株菌株，分别为C5a-28、C4a-28和C6b-28。

3.1分离菌株生物学特征

① C5a-28：菌落为长丝状，乳白色，表面不光滑;菌体长杆状，链状排列，具芽孢，革兰染色阳性，如图1;

② C4a-28：菌落圆形，表面光滑，淡黄色;菌体呈梭形，有芽胞，革兰染色阳性，如图2;

③ C6b-28：，菌落圆形，表面粗糙，淡黄色;菌体呈杆状，成对排列，有芽孢，革兰染色阳性，如图3。

3.2分离菌株生理生化反应：见表1。

3.3 分离菌株16S rRNA测序结果（图4、图5、图6）。

4.总结

通过生理生化试验和16S rRNA测序结果显示，C5a-28是假真菌样芽孢杆菌，C4a-28是赖氨酸芽孢杆菌，C6b-28是芽孢杆菌，以上三种都是土壤中常见的益生菌。对多种有害微生物能发挥抑制作用，对人体肠道的微环境有改善作用，治疗肠道菌群失调症，能降解环境中的有毒物质，在污水处理中也能发挥清除有害物质的作用[6-8]。通过此次试验筛选出的益生菌，可以作为富硒菌的选用菌种，为下一步富硒及动物实验对小鼠生理活性的影响奠定基础。

【参考文献】

[1]Mc Dowell L R. Minerals in animal and human nutrition[M]. New York：Academic Press，2003：294-330.

[2]Rayman MP.The importance of selenium to human health.[J].Lancet，2000，356（9225）：233-241.

[3]Alimohamady R，Aliarabi H，Bahari A，et al. Influence of different amounts and sources of selenium supplementation on performance，some blood parameters，and nutrient digestibility in lambs [J]. Biological Trace Element Research，2013，154（1）：45-54.

[4]余芳，彭常安，冯志成.安徽石台大山村天然富硒绿茶功能成分分析及其提取工艺优化[J].安徽农业科学，2010，38（2）：750-751，775.

[5]姚蓉，王丹，王革嬌等.恩施硒矿区硒还原菌的多样性及代表性菌株的还原特性[A].第十七次全国环境微生物学学术研讨会论文摘要集，2014：186.

[6]杜春梅.芽孢杆菌在农业中的研究与应用[M].哈尔滨：黑龙江大学出版，2013：38-43

[7]马忠友，汪建飞，祝嫦巍，吴萍，活性污泥中1株产PHB丝状细菌的分离与鉴定[J]. 生产与科研经验，2012，38（5）：101-105.

[8]郑雯.赖氨酸芽孢杆He14抗真菌活性成分的物质基础[D]贵阳：贵州大学，2019：39-40