紫外分光光度法测定丁香油滴丸丁香酚含量的方法学研究

周宝珠 ，余小姚 ，邝翠琼 ，莫玉芳 ，刘 露，李海仪，郭嘉亮*

（1.佛山科学技术学院医药工程学院，广东佛山528000；2.佛山市第一人民医院药学部，广东佛山528000）

目前临床上针对冠心病常用西药有硝酸甘油、普萘洛尔及他汀类等药物，既可单独用药又可联合用药。这些西药副作用较大，如他汀类药物会引起消化系统的不良反应，肝和肾功能衰竭，最严重是横纹肌溶解症［1］。复方丹参滴丸作为知名中成药广泛用于治疗冠心病等心血管系统疾病，其临床报道有个别患者服用后胃肠道不良反应［2］。临床上可供治疗冠心病中成药多为口服制剂，类似复方丹参滴丸可快速释放起效的新型中药制剂较少。丁香为桃金娘科植物丁香树干燥花蕾，水蒸汽蒸馏丁香花蕾获得挥发油叫丁香油，其药物活性成分主要是丁香酚［3］。丁香酚具有活血镇痛，其抗缺氧可缓解冠心病的心肌缺血缺氧症状［4］，因此丁香油对冠心病相关症状具有较好的疗效作用。将丁香油制备成滴丸，不仅将液体丁香油固体化，而且增加有效成分丁香酚的药物稳定性，具有临床使用方便等剂型优势。已有HPLC、GC、LC-MS/MS等多种测定方法［5-7］用于测定丁香酚的含量，均对仪器设备要求较高。本研究采用紫外分光光度计（UV）法测定丁香油滴丸中丁香酚含量，并进行方法学考察。

1 试剂与仪器

1.1 试剂

丁香油（国药集团化学试剂有限公司，批号：20161014，≥85.0%）；丁香酚对照品（国药集团化学试剂有限公司，批号：20180622，≥98.5%）；无水乙醇（分析纯，广东光华科技股份有限公司，批号：2010220），80%乙醇（由无水乙醇制备）。

1.2 仪器

紫外可见光分光光度计（上海仪电分析仪器有限公司，720N型）；电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，AL204型）。

2 方法与结果

2.1 测定波长的优选

精密称取1.009 3 g丁香酚为对照品，置于100 mL容量瓶中，用80%乙醇稀释，定容后摇匀。精密吸取10 L至100 mL容量瓶，用80%乙醇稀释至刻度。摇匀制成1.009 3 mg/mL丁香酚对照品溶液。移取1 mL丁香酚对照品溶液于50 mL容量瓶中，用80%乙醇稀释至刻度，摇匀制成20.19 μg/mL的丁香酚对照品溶液。以80%乙醇为空白对照，使用UV法以80%乙醇标定，在200～400 nm的波长范围内进行扫描，其结果如图1所示。

由图1可知，210、228 nm处的吸光度高，考虑由于末端吸收等因素干扰，因此选择280 nm为测定波长。

图1 丁香酚溶液在200～400 nm紫外扫描吸光图谱

2.2 制备标准曲线

精密称取1.009 3 g丁香酚对照品于洁净干燥的小烧杯中，加入80%乙醇（小于100 mL）溶解后转移至100 mL容量瓶中（加80%乙醇至刻度摇匀）配成原溶液。精密移取原溶液10 mL至另一个100 mL容量瓶中，并用80%乙醇稀释至刻度，摇匀制成浓度为1.009 3 mg/mL的丁香酚对照品溶液。精密吸取液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5 mL分别置于100 mL容量瓶中，并用80%乙醇稀释至刻度。制成浓度分别为 15.14、20.19、25.23、30.28、35.33、40.37、45.42 μg/mL 的一系列对照品溶液。以 80%乙醇为空白对照液，在280 nm波长［8］处测定吸光度A，平行测3次，求得平均吸光度A，其结果如表1所示。

表1 丁香酚对照品溶液各浓度吸光度结果

以浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线，结果如图2所示。由图2可知，丁香酚对照品溶液在15.14～46.42 μg/mL范围内线性关系较好。

图2 丁香酚的标准曲线

2.3 精密度试验

取20.19、30.28l、40.37 μg/mL 3个浓度的对照品溶液，以80%乙醇为空白对照，在280 nm波长处测定吸光度A，平行测5次，求平均值及相对标准差RSD［9］，其结果如表2所示。由表2可知，3个浓度RSD值都很小，表明采用UV法测试丁香酚吸光度的含量精密度良好。

表2 精密度试验结果

2.4 稳定性试验

取 35.33 μg/mL 丁香酚对照品浓度 5 份，于 0、2、4、6、8 h［9-10］时测定吸光度 A，并求出相对标准差RSD，结果如表3所示。由表3可知，RSD值为0.16%，说明UV法测试丁香酚含量稳定性好。

表3 稳定性试验结果

2.5 供试品含量计算

随机从最优处方制备的丁香油滴丸中选取供试品，每份20粒滴丸，共取6份。用80%乙醇溶解后，定容至50 mL并过滤。取续滤液2 mL置25 mL容量瓶中，稀释定容至刻度。以80%乙醇为空白对照，分别测定结果如表4所示。表4结果表明该方法重复性良好。

表4 丁香油滴丸中丁香酚含量测定结果

2.6 加样回收率试验

取供试品制备得过滤原液6份，分别将2 mL滤液精确吸取到25 mL容量瓶中。加入丁香酚对照物质0.5 mL，加入80%乙醇至刻度。用80%乙醇作为空白对照，在280 nm波长下测定样品的吸光度A，并计算回收率、平均回收率和RSD值。回收率（%）=（实测量-已测样品含量）/加入对照品的量×100%［16］，其结果如表5所示。由表5可知，加样回收率较好。

表5 加样回收率

3 讨论

本实验采用UV法测定丁香油滴丸中丁香酚含量，测定时需注意：1）选择恰当的对照品浓度，且吸光度A在0.2～0.8范围且线性关系良好的对照品溶液作标准曲线。2）进行相关方法学验证，如线性、精密度、稳定性和回收率等考察。3）有效成分丁香酚由于易挥发，药液表面浓度可能相对比较大。为了确保测定吸光度准确性，在UV法测试药液浓度过程中应在测试前摇匀，减少误差。

本研究利用UV法测定丁香油滴丸中丁香酚含量，操作简单，方法可靠，其精密度、稳定性、重复性、加样回收率等均较为理想。对丁香油滴丸中有效成分丁香酚进行有效质量控制，为下一步丁香油滴丸的药理药效实验奠定了较好基础。