稀释液和温度对猪精液保存效果的影响

黄龙艳，潘越博，王玺年，吴孝杰

(1.甘肃省家畜繁育改良管理站，甘肃 武威 733000；2.甘肃畜牧工程职业技术学院，甘肃 武威 733006)

1 试验材料

1.1 精液来源

试验用长白种公猪15头，18～24月龄，身体健康，性欲良好，生产成绩优秀，体质健壮结实，遗传性能稳定，且无任何遗传疾病。人工采集公猪精液，选择精子活力在0.8以上，且气味、色泽正常的精液稀释保存。

1.2 仪器设备

控温冰箱、伟力精液分析仪、恒温水浴箱、电子秤、烧杯、量筒、高压消毒锅、生化培养箱、干燥箱、双蒸仪、磁力搅拌器和pH测定仪。

1.3 稀释液配方

稀释液配方见表1。

2 试验方法

2.1 试验用品的消毒

为了尽可能实现无菌操作，试验所用的玻璃器械均用干燥箱进行干燥消毒，金属器械用高压锅蒸汽消毒，新鲜鸡蛋洗净外壳后用75%酒精消毒。

2.2 稀释液的配制

准确称量葡萄糖、碳酸氢钠、二水柠檬酸钠、氯化钠、氨基乙酸、氨苯磺胺和EDTA并转移至消毒过的量杯中，加100 mL双蒸水搅拌稀释；将稀释液过滤、分装到消毒过的玻璃瓶中，盖好瓶塞并用纱布将其包裹后高压蒸汽消毒10 min～15 min，将溶液冷却至室温，按比例加入新鲜卵黄、新鲜牛奶和抗生素并搅拌混匀，测定pH后密封保存。

2.3 精液处理及保存

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首先，按国家标准采集精液，测定并记录精液pH和精子活力；然后，将同一头猪采集的合格精液分成4份，分别用4种稀释液按1∶3进行稀释；第三，将每种处理分成2份，快速测定其中一份的精子活力；第四，将精子活力最高的稀释精液分成4份，分别置于15 ℃、16 ℃、17 ℃和18 ℃的环境中保存36 h；第五，测定精子活力、生存指数等指标，记录相应数据。

2.4 数据处理

首先统计15个样本的预定测试指标，并计算各指标的平均值，然后利用Х2检验对数据进行独立分析，最终确定组间的差异显著性。

3 试验结果

3.1 精液稀释效果

如表2所示，4种稀释液稀释后精子的生存指数、总存活时间、有效存活时间和精子活力均以Ⅰ组稀释液效果最好，分 别 为 75.9 h、129.8 h、98.5 h和0.75；但稀释后的生存指数、总存活时间、有效存活时间，Ⅰ组与Ⅱ组之间差异不显著(P＞0.05)，与其他组间的差异极显著(P＜0.01)；精子活力四组间差异不显著(P＞0.05)。

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3.2 稀释精液保存温度

为了测试稀释精液的最佳保存温度，对Ⅰ组稀释液在不同温度下精子的总存活时间、有效存活时间、生存指数和活力进行试验。结果表明：稀释精液于17 ℃恒温环境中保存效果最佳，精子的生存指数、总存活时间、有效存活时间和活力分别为72.9 h、125.9 h、97.7 h和0.66(表3)。

3.3 抗生素的作用

试验结果表明，在稀释液中加入适量林肯霉素和庆大霉素可延长精子抗菌时间，提高抗菌效果，并且不易产生耐药性。

4 结果分析

4.1 稀释液成分全面，用量适宜

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在所设计的稀释液配方中，Ⅰ组稀释液的常温保存效果最好。因为该稀释液含有精子所需要的营养物质、缓冲物质和抗生素等，所以Ⅰ组稀释液适于精液保存，有助于提高精子活力。

4.2 Ⅰ组稀释液保存效果比Ⅱ组好的原因

在稀释液配方中，虽然Ⅱ组稀释液中能量物质葡萄糖的添加比Ⅰ组多，但缓冲物质柠檬酸钠和EDTA的添加量少，导致Ⅱ组稀释液稀释后的精子活力和存活时间等指标降低，影响稀释效果。

4.3 成分越单一，精液稀释保存效果越差

虽然Ⅲ组稀释液含有缓冲物质、营养物质和抗生素，Ⅳ组稀释液含有卵黄、牛奶和抗生素，但这两种稀释液不符合精液稀释液组成要求，在生产中通常只适用于现配现用。

4.4 精子活力越高，精液稀释保存效果越好

精子活力在0.8以上时稀释保存效果较好，保存温度为17 ℃时可以使精子的物质能量需求与代谢处于动态平衡，酶的活性也很强，从而能维持精子活力，延长精液保存时间，提高母猪的受胎率和产仔数。

值得一提的是，影响精液稀释和保存的因素有很多，机理也非常复杂，一些细微因素和原理有待进一步研究探讨。