黔产百合多糖含量测定及降血糖活性研究

唐文文 沈易华 王丹丹

(铜仁职业技术学院，贵州 铜仁 554300)

百合是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)植物的总称，最早收录于《神农本草经》，《中国药典》(2015年版一部)规定，百合为百合科植物卷丹、百合或细叶百合的干燥肉质鳞叶。中医认为百合性微寒平，具有养阴润肺、清火安神的功效。百合是卫生部审批通过的首批药食两用品，不仅在临床上有着广泛的应用，还具有很好的保健作用，是不可多得的集药用、食用和观赏于一体的植物，有非常高的经济价值。

据贵州省植物志记载，贵州有8个品种，主要品种为野百合，淡黄花百合和龙牙百合。其中贵州务川县生产野生百合粉具有几十年的历史，野生百合粉系列产品已经成为贵州名优特产。百合多糖是百合的主要活性成分之一，具有降血糖、提升免疫功能和抗氧化等药理作用[1-3]。目前，关于百合的研究多集中在兰州百合和宜兴百合，关于贵州百合的成分测定和活性评价较少，本文通过对贵州产不同品种百合多糖的含量的测定和降血糖活性的评价，为贵州百合的进一步开发利用提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

实验所用3种百合样品均采之于贵州省各地，经铜仁职业技术学院梁玉勇教授鉴定，样品来源见表1。

表1 样品收集信息

无水乙醇、氯仿、正丁醇、苯酚、硫酸、葡萄糖均为分析纯，国药集团化学试剂有限公司；四氧嘧啶，源叶生物。

1.2 仪器与设备

UV-1801紫外可见分光光度计(北京瑞丽仪器分析有限公司)；CP214电子天平(奥豪斯仪器有限公司)；HH恒温水浴锅(江苏中大仪器科技有限公司)；KL-UP超纯水机(成都超纯科技)；SHZ-D循环水式多用真空泵(巩义科华仪器设备有限公司)；可孚血糖测试仪(三诺生物)；可孚逸骊血糖试条(三诺生物)。

1.3 百合多糖的含量测定采用苯酚-硫酸法[4-5]。

1.3.1 对照品溶液的制备：

精密称取在105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0.1868g，置于100mL棕色量瓶中，用蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，即可以得到葡萄糖对照品溶液。

1.3.2 苯酚溶液的制备：

精密称取苯酚2.4497g倒入烧杯中，加入一定量的蒸馏水搅拌使其充分溶解，精确定容至50ml后，倒入棕色瓶中防止见光氧化分解。

1.3.3 标准曲线的绘制：

精密量取葡萄糖对照品溶液0、10ul、20ul、30ul、40ul、50ul、60ul加水定容至1ml摇匀，置具塞试管中，加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml，摇匀冷却，室温放置40分钟，以1mL水加入相应的试剂同样操作为空白，在490nm处测吸光度。以吸光度为纵坐标、对照品葡萄糖浓度为横坐标，得出标准曲线回归方程Y=0.0126X+0.0202，R2=0.9993(n=7)，如图1所示。

图1 葡萄糖标准曲线

1.3.4 供试品溶液的制备：

低温烘干的百合鳞茎，粉碎，过筛，取百合粉末1g，加入95%乙醇50ml，用超声仪超声半小时，热回流脱脂1.5h，过滤，滤渣加水50mL超声半小时，再回流2h，趁热抽滤，滤液全部转移到100mL棕色量瓶中，用水定容至刻度，然后再用水稀释50倍。

1.3.5 百合多糖的含量测定：

按1.3.3项下测定方法操作，将吸光度值带入线性方程，结果见表2。

1.4 百合多糖降血糖活性评价

1.4.1 百合多糖的制备[6]：

新鲜百合→洗净、晾干水分→70℃水浴提取8h→过滤→4℃醇沉过夜→沉淀复溶→Sevag法脱蛋白→再次醇沉、过滤→无水乙醇洗涤→低温烘干得百合多糖→用纯净水制成1g/mL的多糖液，-20℃冰箱中保存。

1.4.2 动物实验：

雄性Wistar大鼠，SPF级(中国农科院兰州兽医研究所)。适应性饲养5d后，随机取大鼠禁食8h，测定空腹血糖，作为该批次动物基础血糖值。禁食24h，期间自由饮水，按照150mg/kg腹腔注射四氧嘧啶造模，第一天注射总量的55%，第二天注射总量的45%，完成后恢复进食。造模后正常饲养5d后禁食8h，测血糖，血糖值≥10mmoL/L的为模型成功的动物[7]。

选造模成功的大鼠20只，按照空腹血糖值随机分为模型组(DM)、百合多糖组(BH)两组，每组10只，另取大鼠10只作为正常组(CN)，BH组按每日0.5g/kg百合多糖给药，DM组及CN组给予同体积纯净水，连续30d。分别于第0，15d，30d时，禁食8小时，测空腹血糖值，并记录。

2 结果

2.1 不同百合样品多糖含量比较(见表2)

由表2可以看出，淡黄花百合多糖含量较高，为228.4mg/g；其次为铜仁地区引种的龙牙百合，最低的野百合。

表2 不同样品多糖含量测定结果(n=3)

2.2 百合多糖对高血糖大鼠血糖值的影响(见表3)

由表3可见，注射四氧嘧啶后的大鼠血糖水平跟空白组比明显升高，当血糖水平大于10mmol/L时表明糖尿病模型成立，并且高血糖大鼠明显尿量增多，给药15d后，百合多糖给药组血糖明显下降，与模型组比差异极显著(P<0.01)，给药30d后，百合多糖给药组血糖继续下降。

表3 百合多糖高血糖大鼠血糖值的影响(n=10，

表3 百合多糖高血糖大鼠血糖值的影响(n=10，

组别血糖值(mmoL/L)0d15d30CN3.82±0.343.96±0.44∗∗4.02±0.59∗∗DM21.13±2.14a20.59±2.2119.79±3.26BH21.59±1.59a16.59±2.25∗∗10.05±2.55∗∗

注释：*P<0.05，**P<0.01

3 讨论

百合多糖作为百合重要的活性成分之一，《中国药典》中并未有其多糖含量的测定方法，本实验探索采用硫酸-苯酚法测定不同百合药材中多糖的含量，结果显示贵州不同产地的百合的多糖含量存在一定差异，其中淡黄花百合多糖含量最高，而野百合多糖含量最低，是否跟野百合的生长环境和生长年限有关，需要进一步探究，另外引种而来的龙牙百合，多糖含量仅次于淡黄花百合，说明引种后的龙牙百合适宜在贵州生长，以后可加大种植面积。

本试验对百合多糖的降血糖活性进行评价，发现百合多糖具有较好的降血糖活性，为百合进一步开发具有降糖功效的保健品、功能性食品、药品打下基础，百合多糖降血糖的机制研究，将在下一步实验中进行。