黄河三角洲产地管花肉苁蓉不同极性提取物抗炎镇痛活性的研究

祝梦晓，刘梦亭，白金莲，杨芳丽，房景茹，甘 阳，赵文瑄，李亚峻，孙春龙,2,3,*，王宏国,2,3,*，黄 莉,2,3，杜 文,2,3，付 娟,2,3

(1.滨州学院 生物与环境工程学院，山东 滨州 2566033；2.山东省黄河三角洲野生植物资源开发利用工程技术研究中心，山东 滨州 256603；山东省黄河三角洲脆弱生态带工程技术研究中心，山东 滨州 256603)

肉苁蓉CistancheHerba又名金笋、地精、苁蓉、大芸、甜大芸、寸芸属列当科专性寄生植物。管花肉苁蓉C.tubulosa (Schrenk) Wight 或荒漠肉苁蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma的干燥带鳞叶的肉质茎为名贵中药，广泛分布在北半球温暖干燥的干旱半干旱地区。我国管花肉苁蓉的主要分布于新疆维吾尔自治区准格尔盆地中央的吉尔班通古特沙漠和北疆塔里木盆地中央的塔克拉玛干沙漠；内蒙古自治区的乌兰布和沙漠、腾格里沙漠、巴丹吉林沙漠；甘肃省的河西走廊沙地。具有性温、味甘咸，为补肾壮阳、润肠通便之药效，有"沙漠人参"的美誉[1-3]。为保护管花管花肉苁蓉野生资源，满足市场对管花管花肉苁蓉的需求，我国从二十世纪初开始了管花管花肉苁蓉人工接种技术的研究[4-8]，2011年在黄河三角洲野生柽柳上接种管花肉苁蓉获得成功，管花肉苁蓉在黄河三角洲地区可以完成其生活史，且研究结果表明，黄河三角洲盐碱地野生柽柳接种管花肉苁蓉的接种率高、品质好、产量高并且能完成自我繁殖[7-8]。

现代药理学研究表明，管花肉苁蓉最主要的作用是补肾壮阳和提高记忆力即能治疗老年痴呆，此外还有抗疲劳、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射、润肠通便、提高免疫力、抗中脑神经细胞凋亡、心肌缺血保护、改善性功能多种药理活性[3-10]。管花肉苁蓉在医书中记载有治疗腰膝酸痛、痢疾等病症，但目前尚未见关于管花肉苁蓉抗炎镇痛活性方面的研究报道，因此本研究将对管花肉苁蓉抗炎镇痛的活性进行考察，以期为进一步开发管花肉苁蓉提供依据。

1 材料

1.1 药物及试剂

图1 黄河三角洲产地管花肉苁蓉

受试药：本实验所用药材为黄河三角洲地区栽培的管花肉苁蓉(图1 黄河三角洲产地的管花肉苁蓉)；阳性对照药物：阿司匹林片；布洛芬缓释胶囊；致痛剂：0.6%冰醋酸；致炎剂：二甲苯，分析纯。

1.2 仪器及型号

ZH-6C冷热板测痛仪；SHK-III循环水泵多用真空泵，郑州科泰实验设备有限公司；EYELA旋转蒸发仪；JA5003N电子天平，上海菁海仪器有限公司；KQ-500B型超声波清洗器，昆明市超声仪器有限公司。

1.3 管花肉苁蓉不同极性提取物的制备

将管花肉苁蓉干块粉碎为粗粉，用95%乙醇溶液对粗粉进行浸提，浸提完全后用布氏漏斗进行多次抽滤，得到管花肉苁蓉浸提液；用旋转蒸发仪在真空状态水浴加热条件下将浸提液浓缩至无醇味，得管花肉苁蓉浸膏；根据溶剂的极性向分液漏斗中依次加入石油醚，正丁醇和水进行萃取，萃取至加入极性溶剂后上层溶剂基本不变色后进行浓缩操作；旋转蒸发至萃取物无各类极性溶剂味，得管花肉苁蓉的石油醚浸膏，正丁醇浸膏，水浸膏于低温下保存为实验备用。

2 方法

2.1 扭体法[11-16]

动物：昆明种小鼠，18～22g；按性别(雌雄各半)和体质量随机分成5组，每组8只。阳性给药组给予阿司匹林片200mg/70kg,受试药：管花肉苁蓉石油醚提取物、管花肉苁蓉正丁醇提取物、管花肉苁蓉水提取物，400mg/kg。药品均用蒸馏水配制，连续灌胃7天，末次给药1h后对各鼠进行腹腔注射，0.6%冰醋酸0.2mL/只。记录各小鼠腹腔注射后20min内扭体反应(腹部收缩内凹、伸展后肢)次数，并计算抑制率。

抑制率(%)=(模型组扭体反应次数-给药组扭体反应次数)/模型组扭体反应次数ⅹ100%

2.2 热板法[11-16]

将热板镇痛仪调至55℃，加热后作为热刺激，记录小鼠放入热板至出现舔后足反应所需要的时间作为该鼠的痛阈值。给药前测定每只小鼠痛阈值2次，5s≤x≤30s为合格，小于5s或大于30s或跳跃的弃之不用。筛选合格的小鼠按体质量随机分成5组，每组8只。管花肉苁蓉不同极性提取物用蒸馏水配制成混悬液，阳性给药组给予阿司匹林200mg/70kg,对照组给予同体积生理盐水，连续灌胃给药7天。末次给药后30min，60min，90min，120min各测小鼠痛阈值，若小鼠用药后放入热板60s仍无反应，将小鼠取出，痛阈值按60s计算。

2.3 小鼠耳肿胀法[11-16]

取昆明种小鼠40只，按体质量随机分成5组，每组8只：模型组(生理盐水,100mg/kg),阳性对照组布洛芬缓释胶囊(100mg/kg),管花肉苁蓉不同极性提取物用蒸馏水配制成混悬液(400mg/kg),连续灌胃给药7天。末次给药1h后用0.02mL/只二甲苯均匀涂抹小鼠右耳廓两面致炎，左耳作对照。30min后脱臼处死小鼠，剪下两耳，用9mm打孔器在两耳相同部位打下耳片，称重，以两耳之差作肿胀度。

耳肿胀度=右耳片质量-左耳片质量

耳肿胀抑制率(%)=(模型组肿胀度-给药组肿胀度)/模型组肿胀度×100%

2.4 小鼠棉球肉芽肿法[11-16]

取昆明种小鼠40只，18～22g，随机分为5 组，每组8只：正常对照组、布洛芬组、管花肉苁蓉不同极性提取物组。将棉球(10±1)mg的棉球用青霉素钠0.2mL浸泡，烘干，高压灭菌。用乙醚麻醉小鼠后，无菌条件下用75%酒精消毒皮肤，用手术剪剪开腋下皮肤1cm左右长的切口，用眼科镊子将棉球从切口处植入皮下，随即缝合皮肤。术后第二天灌胃给药，连续灌胃7天。第7天给药1h后颈椎处死小鼠，剥离出肉芽肿棉球，剔除脂肪组织，于60℃烘干6h,称量质量，其质量减去原棉球质量即为肉芽肿质量，计算肉芽肿抑制率。

肉芽组织干质量(mg)=烘干后的棉球质量-原始棉球质量

肉芽肿抑制率(%)=(模型组肉芽肿干质量-给药组肉芽肿干质量)/模型组肉芽肿干质量ⅹ100%

3 结果及分析

3.1 扭体试验结果及分析

扭体法实验结果表明，与对照组相比，管花肉苁蓉石油醚提取液、管花肉苁蓉正丁醇提取液、管花肉苁蓉水提取液组给药后能显著减少醋酸所致小鼠扭体反应次数(P<0.05)对醋酸致小鼠扭体反应有明显抑制作用，且石油醚提取液作用强于水提取液强于正丁醇提取液，这表明管花肉苁蓉不同极性提取物灌胃给药对醋酸刺激所导致的疼痛具有明显镇痛作用，且石油醚提取液镇痛作用强于水提取液强于正丁醇提取液。结果如表1。

表1 管花肉苁蓉不同极性提取物对醋酸致小鼠扭体次数的影响

3.2 热板法试验结果及分析

热板法中管花肉苁蓉给药组痛阈时间较对照组明显延长，且石油醚提取液作用强于水提取液强于正丁醇提取液，这表明管花肉苁蓉不同极性提取物灌胃给药对温度刺激所导致的疼痛具有镇痛作用，且石油醚提取液镇痛作用强于水提取液强于正丁醇提取液。但与对照组相比，各组痛阈值比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表2。

表2 管花肉苁蓉不同极性提取物对小鼠热板法致痛的镇痛作用

3.3 小鼠耳肿胀法试验结果及分析

小鼠耳肿胀法统计结果表明，管花肉苁蓉不同极性提取物灌胃给药均能减轻二甲苯所致小鼠耳廓的肿胀，且正丁醇提取液作用强于石油醚提取液和水提取液。管花肉苁蓉不同极性提取液组与对照组比较有一定的抗炎作用，但差异不显著，无统计学意义P>0.05。结果见表3。

表3 管花肉苁蓉不同极性提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响

3.4 小鼠棉球肉芽肿法试验结果及分析

小鼠棉球肉芽肿法统计结果显示，管花肉苁蓉石油醚、正丁醇、水提取液灌胃给药可使小鼠肉芽肿重有所减少，表明管花肉苁蓉石油醚提取液、管花肉苁蓉正丁醇提取液、管花肉苁蓉水提取液灌胃给药对急性炎症具有抑制作用，P 0.05，表明管花肉苁蓉有抗炎作用，但差异不显著，无统计学意义。结果见表4。

表4 管花肉苁蓉不同极性提取物对小鼠棉球肉芽肿的影响

4 讨论

综上所述，管花肉苁蓉不同极性提取物灌胃给药对急性炎症具有一定的抑制作用，同时对物理性和炎性疼痛也具有一定的镇痛作用，但效果并不十分理想，故管花肉苁蓉作为传统的补益类中药材虽具有较高的药用价值，在药品和保健食品的开发利用方面都有广阔的前景和意义，但其有效成分在治疗风湿痹痛、跌打损伤、腰腿痛等的临床应用方面还有待进一步考察。本研究将丰富人们对中药管花肉苁蓉镇痛、抗炎治疗作用的认识，为进一步开发中药管花肉苁蓉提供依据，为其临床应用提供研究基础。