高效液相色谱法测定麻黄鱼腥草散中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量

许世富

摘要    利用高效液相色谱法测定麻黄鱼腥草散中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量。采用C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm），在室温下，以乙腈-0.02 mol/L磷酸溶液（5∶95，V/V）为流动相，检测波长210 nm，流速1.0 mL/min。结果表明，盐酸麻黄碱在5～200 μg/mL范围内，线性关系良好（R2=0.999 9），平均回收率为92.13%，相对标准偏差为2.93%;盐酸伪麻黄碱在5～200 μg/mL范围内，线性关系良好（R2=0.999 9），平均回收率为93.64%，相对标准偏差为4.05%。本方法简单快捷，精密度好，可用于控制麻黄鱼腥草散中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量。

关键词    麻黄鱼腥草散;盐酸麻黄碱;盐酸伪麻黄碱;含量测定;HPLC

中图分类号    Q946.88        文献标识码    A

文章编号   1007-5739（2020）15-0213-02                                                                                     开放科学（资源服务）标识码（OSID）

Abstract    The contents of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Mahuang Yuxingcao powder were determined by HPLC. Using C18 column （5 μm， 4.6 mm×150 mm） at room temperature， acetonitrile-0.02 mol/L phosphoric acid solution （5∶95，V/V） was used as mobile phase， the detection wavelength was 210 nm， the flow rate was 1.0 mL/min. The result showed that the linear range of ephedrine hydrochloride was 5-200 μg/mL （R2=0.999 9）， the average recovery was 92.13% and the relative standard deviation was 2.93%. The linear range of pseudoephedrine hydro-chloride was 5-200 μg/mL （R2=0.999 9）， the average recovery was 93.64% and the relative standard deviation was 4.05%. The method is simple， rapid and accurate， and can be used to control the content of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Mahuang Yuxingcao powder.

Key words    Mahuang Yuxingcao powder; ephedrine hydrochloride; pseudoephedrine hydrochloride; content determination;HPLC

麻黄鱼腥草散为兽药中常用中药散剂，收载于《中国兽药典》2015年版二部，由麻黄、黄芩、鱼腥草、穿心莲和板蓝根组成，具有宣泄肺热、平喘止咳的功效，临床主要用于肺热咳嗽、鸡支原体病的治疗[1-2]。近年来，关于麻黄生物碱毒副作用的报道日趋增多[3]。因此，严格控制其质量也越来越重要。目前，其质量标准中仅对麻黄、黄芩、鱼腥草、穿心莲和板蓝根进行显微鉴别和盐酸麻黄碱的薄层色谱鉴别，不能很好地控制其质量。有报道建立高效液相色谱法测定黄芩苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量以控制黄芩、穿心莲的质量[4-6]。本文参考相关文献[7-10]，建立了测定麻黄鱼腥草散中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的高效液相色谱法以控制其中麻黄质量。结果表明，本方法具有结果准确、快速分离、操作简便、专属性强、灵敏度高、重复性好等特点，提升了麻黄鱼腥草散的质量，为全面有效地控制其质量提供了技术参考。

1    材料与方法

1.1    试验材料及设备

1.1.1    仪器和设备。U3000高效液相色谱仪，配紫外检测器，美国赛默飞;电子天平，BT-125D，德国赛多利斯;超纯水器，Milipo Simplicity，美国密理博;超聲波仪，KQ-300DV，昆山市超声仪器有限公司。

1.1.2    试剂和材料。乙腈，为色谱纯;磷酸、三乙胺，为分析纯;水，为超纯水，实验室自制。对照品：盐酸麻黄碱，含量100.0%，批号171241-201809;盐酸伪麻黄碱，含量99.8%，批号171237-201510，均购自中国食品药品检定研究院。麻黄鱼腥草散3批，批号分别为20190601、20190602、20190603，来源于安徽XX动物药业有限公司。

1.2    试验方法

1.2.1    溶液制备。①对照品溶液制备。分别称取盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品约10 mg，精密称定，放入10 mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液，每1 mL含盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱各1 mg。②供试品溶液制备。取麻黄鱼腥草散约3 g，精密称定，放入50 mL量瓶中，加1.44%磷酸溶液45 mL，超声25 min，放至室温，加1.44%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀。过滤，取滤液1 mL置于10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。③阴性对照溶液制备。按处方及制法制备不含麻黄的阴性制剂，按 ②方法，制备相应的阴性对照溶液。

1.2.2    色谱条件。色谱柱为C18柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）;流动相为乙腈-0.02 mol/L磷酸溶液（含0.06%三乙胺）（5∶95， V/V）;流速1.0 mL/min;检测波长210 nm;进样量20 μL。

1.2.3    专属性试验。分别取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各20 μL，注入液相色谱仪，按1.2.2色谱条件测定。

1.2.4    线性关系考察。吸取对照品贮备溶液0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mL，分别置于10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得浓度为5、10、20、50、100、200 μg/mL的对照品系列溶液，分别取20 μL注入高效液相色谱仪，在1.2.2色谱条件下测定。

1.2.5    稳定性试验。取供试品溶液，在0、2、4、8、12、24 h，按1.2.2色谱条件测定峰面积计算。

1.2.6    精密度试验。取麻黄鱼腥草散（批号为20190601），按1.2.1中②方法制备供试品溶液，按1.2.2色谱条件测定，以峰面积计算。

1.2.7    准确度试验。取已知含量的麻黄鱼腥草散，研细，称取6份，每份约1.5 g，分别加入一定的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品贮备溶液，按1.2.1中②方法制备、1.2.2色谱条件测定，以峰面积计算。

1.2.8    样品测定。取麻黄鱼腥草散3批（批号分别为20190601、20190602、20190603），分别按1.2.1中②方法制备，按1.2.2色谱条件测定，以峰面积用外标法计算。

2    结果与分析

2.1    专属性试验

盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱峰与其他相邻峰分离良好，阴性对照色谱在与对照品色谱相同保留时间处无干扰峰，专属性强，能满足检测要求，见图1～3。

2.2    线性关系

以峰面积Y为纵坐标，以浓度x（μg/mL）为横坐标绘制标准曲线，回归方程：Y盐酸麻黄碱=0.123 4x+0.096 3，R2=0.999 9;Y盐酸偽麻黄碱=0.123 8x+0.067 3，R2=0.999 9。结果表明，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱在5～200 μg/mL浓度范围内，与其对应的峰面积有良好的线性关系。

2.3    稳定性试验

盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的相对标准偏差（n=6）分别为0.42%、0.59%。结果表明，供试品溶液在24 h内基本稳定，说明该方法稳定性较好。

2.4    精密度试验

盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的相对标准偏差（n=6）分别为0.28%、0.39%，说明该方法精密度良好。

2.5    准确度试验

盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的回收率分别为87.82%～96.04%、90.34%～100.20%，平均回收率分别为92.13%、93.64%，相对标准偏差分别为2.93%、4.05%，结果见表1。

2.6    样品测定

3批麻黄鱼腥草散中盐酸麻黄碱的含量分别为0.827、0.813、0.836 mg/g，盐酸伪麻黄碱的含量分别为0.516、0.535、0.529 mg/g，结果见表2。

3    结论与讨论

3.1    质控成分的选择

麻黄鱼腥草散为《中国兽药典》2015年版二部[1]收载品种，具有宣泄肺热、平喘止咳的功效，临床主要用于肺热咳嗽、鸡毒支原体病的治疗[11]。处方中含有麻黄、黄芩、鱼腥草、穿心莲和板蓝根，其中麻黄具有解表散寒、宣肺平喘、利水消肿等功能，在整个方剂中起主要治疗作用。《中国兽药典》2015年版二部[1]仅有显微鉴别和盐酸麻黄碱的薄层色谱鉴别，选择测定其中麻黄有效成分有助于对麻黄鱼腥草散进行质量控制。麻黄主要成分为多种生物碱，如盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、盐酸麻黄次碱以及黄酮类化合物等。盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱均有缓解支气管平滑肌痉挛的作用[3]。《中国兽药典》2015年版二部[1]以及《中国药典》2015年版一部[12]均对麻黄中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量有具体要求，二者总量不得少于0.80%。因此，选择盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱作为其中质控方法之一。本方法采用HPLC法测定麻黄鱼腥草散中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，操作便捷快捷，且二者在5～200 μg/mL范围内线性关系良好，检测方法的准确度、精密度、稳定性均能达到要求。

3.2    提取方法的选择

本试验比较了1.44%磷酸溶液[1]、乙腈-0.1 mol/L磷酸溶液（5∶95）[9，11]、乙腈-0.2 mol/L磷酸溶液[10，12]等3种提取溶剂，分别以超声方式进行提取20、25、30 min。最终选择1.44%磷酸溶液作为提取溶液、超声提取25 min为本试验方法，结果证明该方法提取效果好、速度快，操作简单，系统适应性好，且阴性对照无干扰。

3.3    流动相的选择

盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱在210 nm有最大吸收峰，本试验选择210 nm作为测定波长。甲醇在210 nm处有少量紫外吸收[8]，選择用乙腈作为有机相，考察了不同比例的乙腈对分离效果的影响，通过调整有机相比例不断优化分离度和检测效率。随着乙腈比例的提高，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的保留时间不断缩短，在满足分离度要求的前提下，最终选择了乙腈-0.02 mol/L磷酸溶液作为流动相，保留时间较短，分离度符合要求。进一步优化后发现，在磷酸溶液中添加0.06%三乙胺，可使制剂中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱分离良好，峰形更佳，减少拖尾及其他杂质峰的干扰。

本研究选择高效液相色谱法测定麻黄鱼腥草散中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，方法快捷简便、准确可靠、重复性好、回收率高，可有效控制该制剂中麻黄的含量，为麻黄鱼腥草散标准修订提供参考。

4    参考文献

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