观察P16蛋白和TCT及HPV基因分型联合检测在宫颈病变筛查中的应用效果
2020-08-10赵晓芳王丽丽杨梅
赵晓芳 王丽丽 杨梅
【摘要】 目的 观察P16蛋白和液基薄层细胞学检测（TCT）及人乳头瘤病毒（HPV）基因分型或高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）联合检测在宫颈病变筛查中的应用效果。方法 559例宫颈病变患者， 均应用病毒学联合细胞学进行检查。对比其诊断效果， 选出最有意义的方式。结果 患者经检查后可知， HPV分型阳性+TCT异常、HR-HPV阳性+TCT异常、HPV分型阳性+P16TCT异常、HR-HPV阳性+P16TCT异常为宫颈病变的好发人群， 应用P16TCT+HPV分型对高度宫颈上皮内瘤变（CIN）的检出率更高（48.33%）。结论 宫颈疾病人群中， HPV感染率较高， 且以高危型、单一和二重感染居多;随着宫颈病变程度的加重， HPV的感染率和P16蛋白阳性表达率逐渐升高。采用P16TCT+HPV分型在宫颈病变筛查中的筛查效果略优于其他方式。
【关键词】 P16蛋白;液基薄层细胞学检测;人乳头瘤病毒基因分型;联合检测;宫颈病变;筛查
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.21.090
宫颈病变是临床妇科科室中经常遇到的疾病， 其中像慢性宫颈炎等都有可能导致宫颈病变的发生。其中最值得警惕的情况便是宫颈上皮内病变， 该症状与宫颈癌存在直接联系， 即为宫颈癌的癌前病变， 若不尽早对宫颈上皮内病变进行确诊并治疗， 则可能会发展为宫颈癌， 对患者的生命安全造成重大威胁[1]。有关患者宫颈病变的检查， 现今主要采用病毒学和细胞学联合检查， 其中病毒学包括HPV分型检查与HR-HPV检查， 细胞学则包括普通TCT与P16蛋白表达-TCT（P16TCT）联合检查， 以上诊断方式虽能够起到较好的检出作用， 但也存在一定差异[2]。本研究对4种不同的检测方式进行分析和对比， 以选出最具有价值的检测方式， 研究流程及结果如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取559例本院于2018年1月～2020年1月收治的宫颈病变患者， 为其提供4种联合检测方式， 以上患者中选择TCT+HPV分型的有331例、TCT+HR-HPV的有156例、P16TCT+HPV分型的有60例、 P16TCT+HR-HPV的有19例， 其中7例患者同时选择TCT+HPV分型、TCT+HR-HPV检查。患者年龄25～77岁， 平均年龄（48.31±9.72）岁。纳入患者经TCT诊断后病症分级均为意义不明的不典型鳞状细胞（ASC-US） 及以上。该研究已通过医院伦理委员会批准、所有患者均已签署知情同意书。
1. 2 方法
1. 2. 1 仪器及试剂 美国ABI-2720 PCR仪及系统、潮州凯普生物化学有限公司HBHM-9000A组合型分子杂交仪， 广州江元医疗科技有限公司全自动细胞免疫标记染色系统（ICC）JY-6000;HPV基因分型试剂由凯普生物提供， P16蛋白试剂、TCT试剂由江元医疗提供。
1. 2. 2 TCT检查 患者入院后立即应用宫颈刷插入其宫颈管中大概1 cm位置处， 绕顺时针的方向旋转大概5～6圈， 对宫颈外口和宫颈管处被刷下来的脱落细胞进行收集， 并将细胞置入保存液当中， 应用TCT制片机制片， 并用浓度为95%酒精进行固定， 完成染色。
1. 2. 3 P16蛋白表达检测 采用JY-6000系统制作液基薄片， 95%酒精温室固定72 h， 晾干。将每张液基薄片划分为两半， 一半做P16蛋白表达检测， 另一半作阴性对照。采用免疫组化 Elivision法检测P16蛋白的表达， 并按照试剂盒说明书进行相关操作。
1. 2. 4 HPV基因分型检测 同1.2.2采集样本完毕立即放入保存液中， 裂解后提取DNA， 试剂盒购自潮州凯普生物化学有限公司， 采用ABI-2720 PCR仪， 以细胞内基准物质β-globin DNA为对照， 在4种荧光检测通道下， 同步进行聚合酶链反应（PCR）扩增与导流杂交基因分型检测， 根据系统自带软件对结果进行分析。操作及结果判读参考试剂盒说明书。
本次研究为其提供4种联合检测方式， 分别为TCT+HPV分型、TCT+HR-HPV、P16TCT+HPV分型、P16TCT+HR-HPV， 患者按照自己意愿自行选择检测方式， 并对联合检测方式进行分析。
1. 3 判定標准 根据国际癌症协会2006年制定的TBS分级系统对TCT异常患者进行分级， 分级标准按照从轻至重的顺序分为正常范围（WNL）， ASC-US， 低级别鳞状上皮内病变（LSIL）， 不典型鳞状细胞、不除外高级别鳞状上皮内病变（ASC-H）， 高级别鳞状上皮内病变（HSIL）以及宫颈癌（SCC）;P16TCT结果判定方式：P16蛋白表达阳性（细胞核或细胞质内出现棕黄色颗粒， 每一玻片随机观察10个视野， 阴性细胞（-）未被着色或着色不明显;阳性细胞（+）着色较深， 多以黄棕色为主）或TCT异常定义为P16TCT异常。
1. 4 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件进行统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2. 1 4种检测方案CIN敏感度对比 纳入患者采用TCT+HPV分型检测的共有331例， 其中检测出高度CIN的患者有142例， 占总监测患者数的42.90%;采用TCT+ HR-HPV检测的共有156例， 其中检测出高度CIN的患者有63例， 占总监测患者数的40.38%;采用P16TCT+HPV分型检测的共有60例， 其中检测出高度CIN的患者有29例， 占总监测患者数的48.33%;采用P16TCT+ HR-HPV检测的共有19例， 其中检测出高度CIN的患者有9例， 占总监测患者数的47.37%。4种检测中P16TCT+HPV分型检测的高度CIN检出率最高， 4种检出率对比， 差异无统计学意义（P>0.05）。
