黑果枸杞和宁夏枸杞多糖含量比较研究

2020-08-08李兆君丁润梅

石油化工应用 2020年7期

李兆君，丁润梅

（宁夏医科大学，宁夏银川 750004）

多糖是由单糖组成的天然高分子化合物，具有广泛的生物活性，能调节人体免疫力、抗肿瘤、延缓衰老等作用。枸杞多糖是枸杞中重要的组成物质，是一种水溶性物质。黑果枸杞和宁夏枸杞在植物学分类上都属于茄科，只是两个不同的枸杞品种，本文对两种物质枸杞多糖含量的测定与分析比较，了解和全面认识黑果枸杞这一珍贵的植物资源奠定坚实基础。

多糖含量的测定最常见的方法是苯酚-硫酸法，以葡萄糖标准品为对照。苯酚-硫酸紫外分光光度法[1，2]测定多糖的方法是利用枸杞多糖在浓硫酸的作用下水解成单糖，脱水生成糠醛衍生物，该衍生物和苯酚能够生成有色化合物，用紫外分光光度法测定其含量，实验前用乙醇洗涤去除单糖，以丙酮-石油醚脱色，避免对实验产生干扰，此方法简单，易行。

1 材料与仪器

1.1 材料

宁夏枸杞（中宁东华乡产）；黑果枸杞（宁夏中宁种植）；D-葡萄糖（AR，科密欧试剂）；浓硫酸；苯酚（AR，烟台双双化工有限公司产）；无水乙醇（AR，北联试剂）；甲醛（天津市盛奥化学试剂有限公司）、丙酮、石油醚。

1.2 实验设备、仪器

紫外分光光度计（UV-1600，上海美谱达仪器有限公司）；KDM 型调温电热套（250 mL）；粉碎机；80 目筛子；电子分析天平；瑞尔回流提取装置；国华超级恒温水浴箱。

2 实验方法

2.1 黑果枸杞多糖和宁夏枸杞多糖的提取

黑果枸杞和宁夏枸杞分别烘干，粉碎，过80 目筛，称取粉末10 g 加水100 mL 在100 ℃水浴中提取3次，每次提取时间为2.0 h、1.5 h、1 h，3 次300 mL，过滤合并3 次滤液，静止12 h 后提取其上清液，用80 %乙醇减压浓缩浸泡，冰箱中静置24 h（5 ℃），过滤得沉淀，索氏提取，以95 %乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀，得粗多糖粉末[3，4]。

2.2 标准曲线绘制

葡萄糖标准溶液配制：准确称取干燥恒重的葡萄糖0.100 3 g，定容在100 mL 容量瓶中，得1 mg/mL 葡萄糖标准溶液。用吸量管取10.00 mL，定容在100 mL容量瓶中，稀释至100 μg/mL 葡萄糖测量液待用。

图1 葡萄糖标准曲线图

苯酚溶液配制：称取90 g 苯酚，定容在100 mL 容量瓶中。取5.00 mL，定容在50 mL 容量瓶中，稀释至9 %，现配现用。

取8 支试管，标示管号1～8，分别加100 μg/mL 葡萄糖测量液0.00 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.30 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL，冰水浴分别加入9 %苯酚液0.50 mL，振荡摇匀后缓慢加入浓硫酸3.00 mL，温度不宜高，以微放热为适宜，放置约30 min 后以0 号试管作空白参照，在490 nm 处测定吸光度值，绘制葡萄糖标准曲线图（见图1）。

2.3 多糖含量的测定

准确称取干燥后所得的黑果枸杞和宁夏枸杞多糖粉末50.0 mg，放置在50.00 mL 容量瓶中，加蒸馏水溶解，定容。分别用吸量管吸取5.00 mL 于50.00 mL 容量瓶中，定容至刻度线，再用吸量管吸取1.00 mL 稀释液于10.00 mL 容量瓶中，分别加入9 %苯酚液0.50 mL，振荡摇匀后缓慢加入浓硫酸3.00 mL，放入水浴箱，沸水浴中反应15 min 后立刻放置在0 ℃中进行冷却，冷却后在490 nm 处测得吸光度值[5]。