10 984例女性人乳头瘤病毒筛查结果分析

戴 瑄 林 洁

(1 湖南中医药大学研究生院，长沙市 410208，电子邮箱：1246394335@qq.com；2 湖南中医药大学第一附属医院妇产科，长沙市 410208)

宫颈癌是常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一，已被证实与人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染有关。因此HPV检测成为女性宫颈癌筛查的重要手段之一。此外，有研究表明，HPV-DNA拷贝数随着宫颈癌病情的加重而增加，测定HPV-DNA水平对宫颈癌诊断及病情评估有着重要临床意义[1]。近年来，我国宫颈癌的发病率逐年增长。本研究对进行HPV筛查的10 984例女性的筛查结果进行分析总结，为了解女性HPV感染情况提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料 纳入2018年5月1日至2019年5月13日间于湖南中医药大学第一附属医院妇科门诊行HPV筛查的所有女性，共10 984例，年龄14～92(38.53±10.94)岁，均有过性生活史，其中未成年(14～17岁)共15例，均取得受试者及其家属同意后进行标本采集。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 标本采集 取截石位，用窥阴器暴露宫颈，宫颈刷置于宫颈口，顺时针轻轻转动宫颈刷3～5圈，取出宫颈刷将其放入含有专用细胞保存液的取样管中，拧紧瓶盖马上送检；若不能及时送检则放置于4℃冰箱保存，时间最长不超过2周。嘱受试者在采样前3 d内禁止阴道用药及阴道冲洗，24 h内禁止性行为；标本采集应避免月经期。

1.3 试剂与仪器 人乳头瘤病毒核酸分型检测试剂盒均购自上海透景生命科技股份有限公司(生产批号：18A006)，可以检出27种亚型，包括17种高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、81、83型)以及10种低危亚型(HPV06、11、26、40、42、43、44、55、61、82型)；基因扩增仪购自苏州东胜兴业科学仪器有限公司(型号：东胜龙ETC811)和珠海黑马医学仪器有限公司(型号：Hema9600)；多功能流式点阵仪购自美国Luminex公司(型号：Luminex 200)。

1.4 检测方法 (1)样本处理：将采集的宫颈脱落细胞送至检验科，用一次性吸管取混匀的脱落细胞 200～1 000 μL于1.5 mL离心管中，14 000 r/min离心3 min后吸弃上清液，加入200 μL核酸提取液，混匀后95℃孵育20 min，之后离心14 000 r/min离心5 min。(2)PCR扩增：取上述离心后标本5 μL加至15.8 μL的PCR反应体系(预混液10.0 μL、引物混合液5.0 μL、聚合酶0.8 μL)中进行扩增，同时设阴阳性对照。扩增程序为：50℃，5 min；95℃，2 min；94℃，15 s，52℃，1 min，循环40次，72℃延伸5 min。(3)杂交及信号收集：在每个杂交孔中加入3 μL PCR扩增产物和22 μL微球杂交液，充分混匀，杂交和变性程序为：95℃，5 min(变性)；48℃，30 min(杂交)。杂交程序结束后每孔快速加入75 μL链霉亲和素-藻红蛋白；48℃孵育15 min。完成后将微孔杂交板转移至多功能流式点阵仪上进行荧光信号收集，分析检测结果。

1.5 统计学分析 采用SPSS 21.0软件进行统计分析。计数资料以例数或百分比表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同年龄阶段HPV感染检出情况 10 984例接受筛查女性中，共有2 308例阳性者，总感染率为21.01%。不同年龄段女性感染率差异有统计学意义(χ2=48.971，P<0.001)，见表1。

表1 各年龄段女性HPV感染检出情况

2.2 2 308例HPV阳性者感染亚型及分布情况 2 308例阳性患者中共检出27种HPV亚型(见表2)，包括17种高危亚型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、81、83型)，以及10种低危亚型(HPV06、11、26、40、42、43、44、55、61、82型)。单一感染共1 710例(74.09%)，混合感染共598例(25.91%)，其中433例(18.76%)为双重感染，165例(7.15%)为多重感染。单一感染中，以HPV52型最常见，其次为HPV16型、HPV58型、53型；混合感染中，HPV52型最常见，其次为HPV58型、HPV16型、HPV53型。见表2。

表2 27种HPV亚型分布情况(n)

2.3 不同年龄HPV感染分布情况 不同年龄阶段HPV单一感染、双重感染以及多重感染的分布情况比较，差异有统计学意义(χ2=43.543，P<0.001)；单一感染主要分布在21～<51岁，双重感染及多重感染均在21～<31岁出现峰值。见表3。

表3 不同年龄段HPV感染情况分布表(n)

2.4 不同年龄段女性HPV高危亚型单一感染的分布情况 高危亚型的单一感染者共1 329例，各高危亚型感染均集中在21～<51岁年龄段。见表4。

表4 HPV高危亚型单一感染在不同年龄段患者中的分布情况(n)

3 讨 论

宫颈癌是最常见的女性恶性肿瘤之一，可对患者的生活质量以及生命质量造成严重的影响[2-3]。HPV是一种DNA病毒，具有高度的宿主特异性，主要感染人体特定部位皮肤、黏膜的复层鳞状上皮，导致黏膜鳞状上皮细胞不断增殖，而持续性的高危型HPV感染又是宫颈癌前病变和浸润性宫颈癌发生的必要条件[4]。HPV感染期比较短，一般在8～10个月左右便可自行消失，只有10%～15%的35岁以上的女性呈持续性感染状态[5]。有学者发现宫颈癌变可能与HPV感染呈正相关[6]；只有7%左右的女性发展成为持续感染，最终可能成为宫颈癌变的比例只占持续感染的25%左右[7]。由此可见，宫颈癌前病变也不一定会发展成为宫颈癌，但是加强对HPV的筛查和治疗是预防宫颈癌的必要手段。

裴蕴锋等[8]发现HPV的感染率随年龄分布呈“V”型，低年龄组与高年龄组感染率较高。在本研究10 984例行HPV筛查的女性中，HPV总感染率达21.01%，其中<21岁及≥51岁的女性感染率相对于其他年龄段稍高，分别达29.79%、26.51%。20岁以下的女性处于性成熟阶段，该年龄阶段的多数女性没有经历性生活，或者对HPV的认识程度不够，因此加强青少年女性生理卫生知识的普及以及健康教育有重大的意义。而≥51岁的女性感染率亦相对较高，可能与老年人健康意识较薄弱有一定关系。

高危HPV亚型感染是宫颈癌发生的必要条件[9]，有70%的宫颈癌是由高危型HPV16、18型所引起[10]。因此，对于高危型HPV感染者，一定要及时治疗，防止病情进一步发展。本研究的2 308例HPV阳性者中，高危型HPV阳性单一感染共1 329例，感染率为12.10%，低于与秦红霞等[11]报告的东莞地区高危型HPV阳性率(17.78%)及倪红霞等[12]报告的宁波地区的阳性率(16.20%)。1 329例高危亚型单一感染阳性者主要集中在21～<51岁年龄段，提示应提高该年龄段女性的早期筛查意识，这对及时发现高危型HPV感染、尽早干预、降低宫颈癌发病风险均有重要意义。宫颈癌的发病率和死亡率在不同经济状况的国家、地区间有着明显的差异，由于诸多因素的影响，HPV亚型的分布也具有明显的地域性，各个地区HPV感染常见的亚型有一定差异。国际癌症研究协会的研究显示，最常见的HPV高危亚型为HPV16与18型。而在本研究中，共检出17种高危亚型，最常见是52、16、58、53型，与陕西省多地区随机抽样调查结果(16、58、52、18、53型)[13]相似。凌玲等[14]对2011～2015年扬州地区女性HPV感染情况进行分析后发现，该地区连续5年居于前3位的高危亚型分别是HPV16型、52型和58型。此外，子宫颈鳞癌患者中HPV16型感染率约为56%，子宫颈腺癌患者中HPV18型的感染率约为56%，同时HPV52型、58型在中国及东亚妇女中检出率较高[5]，因此这4种HPV高危亚型是关注的重点。

本次研究的2 308例阳性者中，HPV单一感染占74.09%，与曾选[15]报告的HPV单一感染率(74.71%)相似。由此可见，HPV的感染主要是以单一感染为主。但由于不同亚型HPV的编码外壳蛋白基因差异较大，不同亚型之间无交叉保护作用，可出现交叉感染、多重感染的情况[16]。研究表明，单一HPV感染发生宫颈癌的风险是HPV阴性患者的19.9倍，而多重感染则上升至31.8倍[17]。本研究中，有一定比例的混合感染病例，其中HPV双重感染占18.76%，HPV三重感染占7.15%，双重感染及多重感染均在21～<31岁之间出现峰值，提示需要加强该年龄段女性对生殖健康的重视；发现多重感染应及时干预，并对病例进行跟踪研究，以降低宫颈癌发生风险。

本研究表明，长沙地区各个不同年龄阶段的女性均有HPV感染，以20～30岁的育龄期女性为主，需要加强其对HPV的认知与重视。目前，二价(HPV16、18)、四价(HPV6、11、16、18)、九价(HPV6、11、16、18、31、33、45、52、58)3种HPV疫苗已经投入使用，相关研究结果表明其能有效预防特定亚型的HPV感染，从而降低宫颈癌的发病率[18]；同时，通过对广大女性进行HPV检测结果的分析，对女性宫颈疾病的预防、控制、随访及预后评价等各方面都有十分重要的意义。