人参皂苷乳剂的急性毒力研究

吕春子，朱 俊，卢 宇，邓碧华

1.扬州市畜牧兽医站，江苏扬州 225009；2.江苏省农业科学院动物免疫工程研究所，江苏南京210014；3.仪征市新城镇兽医站，江苏扬州 211400

人参皂苷是一种固醇类化合物。三萜皂苷是人参中的重要活性成分，其中的人参皂苷具备良好的抗病毒作用。一部分化学研究专家将人参作为疫苗的配合添加剂，从而有效提升疫苗的稳定性和安全性，在畜牧业中使用能够帮助畜禽预防多种病毒，改善畜禽免疫力[1～3]。

人参皂苷乳剂是由人参皂苷和油佐剂制成的W/O/W 型乳剂，拟用作动物缓释型免疫增强剂。人参皂苷另外一个显著特点是溶水性较好，W/O/W 复乳佐剂可以包裹、保护人参皂苷，进而能够与众多药品互相协同，更好地提升人们的身体免疫力。本试验进行了人参皂苷乳剂的急性毒力试验，旨在为评价其安全性并指导临床用药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

人参皂苷购自禹州凯旋药业有限公司，人参皂苷乳剂由江苏省农业科学院制备，内毒素检测试剂盒购自湛江安度斯生物有限公司。

1.2 试验动物

ICR 小白鼠，保证小白鼠体重在18～22g，小白鼠均购买于扬州大学比较医学中心，合格证号：SCXK（苏）2018-0007。

1.3 试验方法

1.3.1 内毒素检测

人参皂苷样品用去离子水溶解后，用022 um滤器过滤，按《中国药典》2015 版附录中的内毒素检测法进行检测[4]。

1.3.2 急性毒力试验

1.3.2.1 预试验

选择40 只小白鼠，雌雄数量比为20:20，将小白鼠随机划分成为3 组，每组8 只，在0.375～1.5g/kg 范围内拟订3个剂量，分别一次腹腔注射人参皂苷乳剂，测定0%致死量（Dnin）及100%致死量（Dmax）。

1.3.2.2 正式试验

根据改良寇氏法的“分组及剂量比值表”设5个剂量组，从低到高的比例为1:1.3。取小鼠50 只，随机分为5 组，每组10 只，雌雄各半，从小到大分别按0.26、0.34、0.44、0.58、0.75g/kg 的剂量一次腹腔注射人参皂苷乳剂。给药后观察动物的反应和死亡情况，死亡动物剖检，记录病理变化。连续观察7d 统计死亡率，计算LD50[5]。

2 结果

2.1 内毒素检测结果

由表1 和图1 显示，按《中国药典》2015 版附录中的内毒素检测法进行检测，根据标准样制备出相关曲线，对照人参皂苷溶液的A545 nm 的吸光值，换算出人参皂苷的内毒素含量，结果人参皂苷不含内毒素。

表1 内毒素检测结果

图1 内毒素标准曲线

2.2 急性毒力预试验结果

表2 结果显示，0.75g/kg 和1.5g/kg 剂量组死亡数为8/8；0.375g/kg 剂量组死亡数为3/8。以0.75g/kg 组剂量作为Dmax，0.375g/kg 组剂量除以1.414 为Dmin，即0.26g/kg。

表2 小鼠急性毒力预实验结果

2.3 急性毒力正式试验结果

表3 结果显示，高剂量组给药后，小白鼠很快出现了活动量减少、烦躁不安的现象，一部分小白鼠出现神情呆滞、肌肉震颤、运动失衡等现象，并且伴随着不同程度的知觉敏感度降低、知觉过敏现象。小白鼠接受给药之后，在8～48 h 之间逐渐死亡。针对死亡小白鼠进行解剖实验，能够发现小白鼠的腹中有不同程度的积水，中低组小白鼠死亡解剖并不存在明显变化，小白鼠死亡现象在5d 之后消失，存活下的小白鼠生存状态逐渐趋于正常。不同组别的小白鼠死亡数量统计如下表。

根据文献，死亡率不含0%和100%，用以下公式计算LD50：

LD50的95%可信限= lg-1（lg LD50±1.96×SX50）

式中：i，组距，即相邻两组剂量对数剂量之差；Xm，最大剂量对数；p，死亡率；Pm，最大死亡率；Pn，最小死亡率；q，存活率，q=1－p。

计算结果：人参皂苷乳剂LD50为0.419g/kg（以多糖计），LD50的95%可信限范围为0.414～0.425g/kg。

表3 各组小鼠死亡情况及统计

3 讨论

内毒素检测为阴性的人参皂苷制备成人参皂苷乳剂，小鼠腹腔注射人参皂苷乳剂的LD50为0.41g/kg，LD50的95% 可信限范围为0.414～0.425g/kg。人参皂苷乳剂注射较为安全，可供临床研究使用。