顶空-气相色谱法测定依度沙班原料药中8 种有机溶剂

徐艳梅，郭永辉，裴丽娟，盖成，高燕霞

（1.河北省药品检验研究院，石家庄 050011； 2.河北医科大学第一医院制剂科，石家庄 050031）

依度沙班（edoxyaban）是一种新型Xa 因子抑制剂［1-2］，其特点是起效快，抗凝效果可逆，具有剂量依赖等。2011 年4 月22 日，日本第一三共公司研发的依度沙班在日本上市，2015 年以来，美国FDA、欧洲药品管理局和瑞士药品管理局相继批准依度沙班用于非瓣膜性房颤患者脑卒中及系统性栓塞、急性静脉栓塞患者深静脉血栓和肺栓塞的预防及治疗［3］，依度沙班成为继达比加群、利伐沙班和阿哌沙班之后又一个获得FDA 批准的新型口服抗凝药（NOAC）。依度沙班原料药在合成工艺中使用甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃和乙酸乙酯等有机溶剂，这些溶剂的残留会对人体健康产生较大的影响［4-14］，轻则导致皮肤损伤、头痛、食欲不振、头昏等，重则产生麻醉现象。因此严格控制原料药中有机溶剂的残留量对保障患者用药安全具有重要意义。

依度沙班在国内外药典中均未收载，查阅文献未见对依度沙班残留溶剂的研究。目前有机溶剂残留测定的主要方法为顶空-气相色谱法，笔者根据ICH 的指导原则和《中国药典》2015 年版四部气相色谱法和残留溶剂的相关规定［15-16］，采用顶空-气相色谱法对上述8 种有机溶剂量进行了研究。该方法可减少主成分对气相色谱的污染和测定结果的影响，操作简单，精密度好，结果准确，可快速检测依度沙班原料药中有机溶剂残留。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

气相色谱仪：7890B 型，美国安捷伦科技公司；

顶空进样器：7695 型，美国安捷伦科技公司；

电子天平：XS105 型，瑞士梅特勒-托利多公司；

依度沙班原料药：批号分别为161111，161112，161113，石家庄医药科技有限公司；

甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃和乙酸乙酯对照品：纯度为100%，天津精细化工有限公司；

N，N-二甲基甲酰胺：色谱纯，美国默克公司；实验用水为超纯水。

1.2 溶液的配制

混合对照品溶液：精密称取甲醇对照品1 000 mg，乙醇对照品2 000 mg，乙腈对照品200 mg，二氯甲烷对照品300 mg，正己烷对照品200 mg，三氯甲烷对照品20 mg，四氢呋喃对照品200 mg，乙酸乙酯对照品2 000 mg，置于同一100 mL 容量瓶中，加入50%N，N-二甲基甲酰胺水溶液溶解并定容至标线，摇匀，即得。

供试品溶液：精密称取依度沙班原料药样品0.5 g，置于顶空瓶中，精密加入50%N，N-二甲基甲酰胺溶剂5 mL，压盖密封，振摇溶解，即得。

空白溶液：取50%N，N-二甲基甲酰胺溶剂5 mL 置于顶空瓶中，压盖密封，即得。

1.3 色谱条件

色谱柱：DB-624 毛细管柱［30 m×0.32 mm，1.8 μm，安捷伦科技(中国)有限公司］；程序升温：起始温度40℃，保持5 min，以5℃／min 升温至150℃保持10 min；进样口温度：150℃；检测器：氢火焰离子化检测器；检测器温度：250℃；载气：高纯氮气，流量为2.0mL／min，分流比为10∶1；顶空温度：80℃；平衡时间：30 min；顶空进样体积：1 mL。

2 结果与讨论

2.1 色谱柱的选择

先后考察了HP-5，HP-FFAP，DB-624，DBWAX 型等不同极性的色谱柱，由于醇、烷烃、多环芳烃、脂类的极性不同，最终选择中等极性的DB-624型毛细管柱，各待测有机溶剂在DB-624 型毛细管柱的分离度良好。

2.2 升温程序的选择

由于甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯的沸点不同，有的又及其接近，故选择程序升温，通过改变初始温度和升温速率，以达到分离度的要求。

2.3 顶空条件的选择

由于待测有机溶剂具有挥发性，采用顶空进样法可以通过控制顶空瓶的温度和平衡时间使各待测物充分气化，省去了样品萃取、浓集等步骤，且可有效避免样品和水对进样口及色谱柱的污染，同时也减小了样品主成分对分离测定的干扰。试验先后进行了平衡温度为60，80，100℃和平衡时间为20，30，40 min 的交叉试验。结果表明，在平衡温度为60℃，平衡时间为30 min 时，各待测物在顶空瓶中能够达到汽液平衡，保证测定结果的准确性。

2.4 系统适用性试验

精密量取1.2 中的混合对照品溶液，供试品溶液各适量，配制成加标溶液按1.3 色谱条件进行测定，得到加标色谱图见图1。由图1 可知，在该色谱条件下，8 种有机溶剂及主成分之间的分离度均大于1.5。

图1 加标色谱图

2.5 溶液稳定性试验

为了考察8 种有机溶剂在N，N-二甲基甲酰胺溶液中的稳定性，取混合对照品溶液5 mL 置100 mL 容量瓶中，再精密量取5 mL 置于顶空瓶中，压盖密封，按1.3 色谱条件分别在0，1，2，3，6，12 h 进行测定，记录色谱峰面积，结果列于表1。

表1 溶液稳定性试验

由表1 可知，甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯色谱峰面积的相对标准偏差不大于3.2%，表明溶液在12 h 内稳定性 良好。

2.6 线性关系、检测限与定量限

分别精密量取1.2 混合对照品溶液1，2，5，10，25 mL 置100 mL 容量瓶中，加50%N，N-二甲基甲酰胺溶液稀释并定容至标线，摇匀，得到系列混合标准工作溶液。再分别精密量取5 mL 置于顶空瓶中，压盖密封，按1.3 色谱条件进行测定。以8 种有机溶剂的质量浓度（x）为横坐标，色谱峰面积（y）为纵坐标绘制标准工作曲线，计算线性回归方程与相关系数。以信噪比S／N=3 时的浓度作为检出限，以信噪比S／N=10 时作为定量限。8 种残留溶剂的线性关系、检出限、定量限列于表2。

表2 8 种残留溶剂的线性关系、检出限、定量限

由表2 可知，8 种有机溶剂在各自的质量浓度范围内与色谱峰面积的线性关系良好，线性相关系数r2不小于0.999 6，方法检出限均不大于15 μg／mL。

2.7 精密度试验

精密称取样品（批号：13016）0.5 g，按1.2 方法制备供试品溶液，按1.3 色谱条件重复测定6 次，结果列于表3。

表3 精密度试验结果

由表3 可知，甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯测定结果的相对标准偏差不大于3.4%，表明方法具有良好的精密度。

2.8 加标回收试验

精密称取样品（批号：13016）0.5 g，共9 份，置于顶空瓶中，分别加入混合对照品溶液0.8，1.0，1.2 mL 各3 份，压盖密封。按1.3 色谱条件测定，计算加标回收率，结果列于表4。由表4 可知，样品加标回收率为92.41%～101.60%，表明加标回收率良好。

2.9 供试品的测定

取3 批样品（批号：110111、110112、110113）适量，按1.2 制备供试品溶液，按1.3 色谱条件进样测定，记录峰面积并计算各有机溶剂残留量。结果表明，3 批样品中均只检出正己烷，残留量均为0.001%。

3 结语

建立了顶空-气相色谱法同时测定甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷、正己烷、三氯甲烷、四氢呋喃和乙酸乙酯8 种有机溶剂残留量的分析方法，该方法操作简单快速，结果准确，重复性好。能够用于测定依度沙班原料药中有机溶剂的残留，为制定指标标准提供参考。

表4 加标回收试验结果

续表4