滤泡辅助性T淋巴细胞、免疫球蛋白水平与慢性乙型肝炎患者疾病严重程度的关系

2020-07-28卢宣霖

国际检验医学杂志 2020年14期

卢宣霖,胡燃

(重庆两江新区第一人民医院检验科，重庆 401147)

慢性乙型肝炎是一种常见的传染性疾病，指乙型肝炎病毒(HBV)检测阳性，病程超过6个月或发病时间不明确但有相关症状出现的疾病[1]。临床主要表现为恶心、厌食、腹胀和乏力等。近年来慢性乙型肝炎在全球有不断流行趋势，据统计，我国慢性乙型肝炎患者已高达1.3亿[2]。由于该病难以治愈，且发展到后期能够导致肝硬化、肝癌等相关疾病的发生，对人们生命健康造成严重威胁。因此，及早诊断、及时治疗意义重大。尽管目前对慢性乙型肝炎的发病机制尚不清楚，但学术界普遍认为该病与HBV感染后肝细胞损伤、免疫应答紊乱关系密切[3]。滤泡辅助性T淋巴细胞(Tfh)是由BREITFELD等[4]在扁桃体中发现的一种新型CD4+T淋巴细胞亚群，有研究发现HBV感染者外周血Tfh不同程度升高，推测Tfh可能参与了HBV感染后的相关免疫反应[5]。免疫球蛋白(Ig)是免疫活性分子中的一类，当有病毒入侵时，机体产生免疫反应，导致Ig水平升高。目前，Tfh和Ig水平与乙型肝炎严重程度的相关性研究仍较少，因此，本研究通过检测乙型肝炎患者Tfh和Ig水平，探讨其与疾病严重程度的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料选取2016年3月至2018年10月本院收治的112例慢性乙型肝炎患者为研究对象，根据病情严重程度分为慢性非重型乙型肝炎组(69例)和慢性重型乙型肝炎组(43例)。以起病时临床表现同亚急性重型肝炎，血清总胆红素(TBIL)>10倍正常值，凝血酶原活动度低于40%判断为慢性重型乙型肝炎。另选取同期本院70例健康体检者作为对照组。3组研究对象性别、年龄比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，见表1。本研究经本院伦理委员会批准执行。纳入标准：(1)符合中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病学分会制定的《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》[6]中的诊断标准；(2)年龄18～65岁；(3)Child-Pugh评分为A级；(4)自愿参与本研究，并签署知情同意书。排除标准：(1)合并恶性肿瘤者；(2)伴有抑郁、精神疾病史者；(3)合并其他类型肝炎病毒感染者；(4)合并肾、心、肺功能异常者；(5)近期接受过免疫调节剂或抗菌药物治疗者；(6)孕妇或妊娠期女性。

表1 3组研究对象一般资料比较

1.2方法

1.2.1外周血Tfh水平测定本文中Tfh通过检测CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例来反映。于清晨空腹状态下采集研究对象静脉血1 mL，置于含有肝素锂的试管中。取100 μL，依次加入5 μL荧光抗体PerCP-anti-CD4-PerCP(美国BD公司)和5 μL FITC-anti-CXCR5(美国BD公司)，避光染色30 min，随后加入红细胞裂解液(按1∶10的比例)，混匀后避光10 min，3 000 r/min离心5 min，弃上清液。加入2 mL 磷酸盐缓冲液(PBS)重悬，1 000 r/min离心1 min，弃上清液，加入200 μL PBS重悬细胞后采用EPICS XL型流式细胞仪(美国Coulter公司)检测外周血Tfh(检测项目为CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例)水平，所有试剂购自美国Beckman公司，严格按照说明书要求操作。

1.2.2Ig水平测定于清晨空腹状态下抽取研究对象肘静脉血2 mL，3 000 r/min离心10 min，分离血浆后-80 ℃保存，采用免疫比浊法测定IgA、IgG和IgM水平。试剂盒由美国Beckman公司提供，严格按照说明书要求操作。

1.2.3其他指标检测于清晨空腹状态下抽取研究对象静脉血6 mL，取4 mL 1 500 r/min离心15 min，取上清液置于-80 ℃下保存。采用LX20全自动生化分析仪(美国Beckman公司)测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和TBIL水平，采用双缩脲法测定血清总蛋白(TP)水平。将2 mL静脉血加入含有枸橼酸钠的抗凝管中，3 000 r/min离心10 min，采用ACL7000全自动血凝仪(美国Beckman公司)测定凝血酶原时间(PT)，试剂盒均购自美国Beckman公司，严格按照说明书要求操作。采用Piko Real型实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪(美国赛默飞公司)检测慢性非重型乙型肝炎组和慢性重型乙型肝炎组患者HBV DNA水平，试剂购自上海科华生物有限公司。

2 结果

2.13组CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例，Ig、HBV DNA水平比较慢性重型乙型肝炎组患者CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例，IgA、IgG和IgM水平显著高于慢性非重型乙型肝炎组和对照组，并且慢性非重型乙型肝炎组患者CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例，IgA、IgG和IgM水平显著高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。慢性重型乙型肝炎组HBV DNA水平高于慢性非重型乙型肝炎组(P<0.05)。见表2。

表2 3组CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例，Ig、HBV DNA水平比较

2.23组生化指标水平比较对照组、慢性非重型乙型肝炎组和慢性重型乙型肝炎组ALT、TBIL水平和PT水平逐级递增，组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)；3组TP水平相近，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 3组生化指标水平比较

2.3CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例、Ig水平与ALT、TBIL、PT、HBV DNA的相关分析 Pearson相关分析表明，CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例，IgA、IgG和IgM水平与ALT、TBIL、PT和HBV DNA呈正相关(P<0.05)，见表4。

表4 慢性乙型肝炎患者CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例、Ig水平与ALT、TBIL、PT、HBV DNA的相关性分析

3 讨论

慢性乙型肝炎是由HBV感染而引起的一种肝脏炎性病变，具有传染性。慢性乙型肝炎是一种全球性疾病，全世界无症状HBV携带者超过2亿，尤其在发展中国家多见[7]。我国HBV感染者中有1/3会发生肝脏损伤。慢性乙型肝炎的早期临床症状不典型，难以及时发现患者[8]。HBV传播方式较多，近年来乙型肝炎发病率具有不断升高趋势[9]。目前尚无完全根除HBV的方法，抑制病毒蔓延是目前临床治疗乙型肝炎的主要手段。及时、有效的诊断对于乙型肝炎尤为重要。

尽管目前对乙型肝炎的发病机制尚未研究透彻，但一直以来学术界认为HBV感染后引起的肝细胞损伤并不是直接由HBV造成的，而是HBV侵入后使机体产生的一系列免疫反应，导致组织及细胞损伤。Tfh是一种新型CD4+T淋巴细胞亚群，定位于次级淋巴细胞，检测时难以取材。IgA、IgM和IgG是机体主要的Ig，是目前慢性乙型肝炎患者常规检测指标。综合以上背景，本文探讨了不同群体CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例和Ig水平，结果显示，慢性重型乙型肝炎组和慢性非重型乙型肝炎组CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例，IgA、IgG和IgM水平均显著高于对照组(P<0.05)，且慢性重型乙型肝炎组患者各指标水平显著高于慢性非重型乙型肝炎组(P<0.05)，说明慢性乙型肝炎患者CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例和Ig水平显著高于健康人群，且随着疾病程度的加重，以上指标的水平更高，提示Tfh和Ig可能参与了慢性乙型肝炎的发生和发展过程。Tfh具有独立的分化调节机制，在B淋巴细胞的活化、分化等过程中具有辅助作用。近年的研究显示，Tfh与慢性乙型肝炎的发生、发展具有一定关系。CXCR5是Tfh最重要的表面标记分子[10]，目前一般认为外周血CD4+CXCR5+T淋巴细胞具有与Tfh相似的功能，能够反映机体Tfh水平[11]。HBV属于非细胞性病毒，机体感染后免疫功能发生紊乱，从而刺激机体产生更多B淋巴细胞，转化为浆细胞后与Ig结合发挥免疫应答作用。Tfh与乙型肝炎血清学转化有关，参与了HBV介导的免疫反应。吴翠萍等[12]的研究认为，Tfh参与慢性乙型肝炎的免疫反应，且与患者高球蛋白血症紧密相关。有研究显示，慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例，IgA、IgG和IgM水平明显高于健康人群，且Ig水平与疾病严重程度关系密切[13-14]，这与本研究结果相似。

ALT是反映肝实质损伤最敏感的指标之一，肝细胞即使坏死率仅为1%，血清ALT水平即可升高1倍。胆红素在肝脏的代谢和排泄等过程中发挥重要作用，肝脏受损后，间接胆红素无法转化，导致TBIL水平升高。PT是反映肝损伤严重程度及预后的常用指标，并且凝血酶原为肝脏合成维生素的重要依赖因子。一般认为，排除其他因素后，患者ALT、TBIL水平越高，PT越长，肝脏受损越严重。因此，临床常用这些指标反映肝脏损伤程度。本研究结果显示，健康体检者ALT、TBIL和PT水平均显著低于慢性乙型肝炎患者，且随着病情进展，这些指标水平具有递增趋势，而TP水平在3组中差异无统计学意义(P>0.05)，表明ALT、TBIL和PT能够反映肝脏损伤的程度。 HBV DNA是HBV感染最直接的指标，本研究结果显示，随着乙型肝炎患者病情加重，HBV DNA水平越高，且HBV DNA水平与CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例、Ig水平呈正相关，提示乙型肝炎的恶化与机体细胞免疫和体液免疫紊乱有密切关系。

此外，本研究显示，CD4+CXCR5+T淋巴细胞比例，IgA、IgG和IgM水平与ALT、TBIL和PT呈正相关，表明Tfh和Ig水平与慢性乙型肝炎严重程度具有相关性，二者能够辅助判断疾病进展情况。