非小细胞肺癌组织中NSE的基因表达及与患者临床特征的相关性研究

彭 琦，程少鹏，陈辅萍

（商洛市中心医院a.呼吸内科；b.检验中心，陕西商洛 726000）

肺癌是我国发病率和死亡率均位居榜首的恶性肿瘤，其严重威胁人们的生命健康[1-2]，其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)占肺癌的80%以上，并且患者的5年生存率仅为15%[3-5]。由于NSCLC 的发病机理尚不明确，因此临床上缺乏针对此病的根本疗法。目前主要的治疗方法有放射性治疗、化学药物治疗和生物靶向治疗等，其虽有一定的临床疗效，但仍存在明显的局限性。因此，如何有效预测和治疗NSCLC 仍是摆在科研工作者面前的重要难题。

神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)是神经元和神经内分泌细胞中特有的酶[6]。已有文献报道其在NSCLC 中呈高表达[7-8]，但是关于其在NSCLC 中的表达鲜有报道，本研究旨在分析NSCLC 患者肿瘤组织中NSE 的基因表达及其与患者临床特征的相关性，以期为NSCLC 的临床诊疗提供合理参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2013年1月～2017年12月商洛市中心医院157 例NSCLC 患者为研究对象，其中男性94 例，女性63 例，平均年龄55.5±11.9 岁。入院时收集和整理研究对象完整的临床资料。本研究经由我院医学伦理委员会批准，并且患者均自愿参加且签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂 荧光定量PCR仪(ABI公司,7900HT型)，电化学发光仪(广州金程科学仪器有限公司,ECL-20 型)，电化学发光法所用试剂均购自北京陆桥技术公司。TRIzol Reagent 购自美国Invitrogen公司，RNA 反转录试剂盒和RT-PCR 试剂盒均购自TAKARA 公司，PCR 引物的合成和设计由生工生物工程(上海)股份有限公司完成。

1.3 方法 分别取50 ～100 mg 冻存的NSCLC 组织及其相应的癌旁正常组织，放入有液氮的研钵中研磨，加入TRIzol 试剂提取NSCLC 组织及其相应的癌旁组织中的总RNA，然后采用RNA 反转录试剂盒和RT-PCR 试剂盒将RNA 反转录为cDNA，以cDNA为模板进行PCR扩增。GAPDH作为内参基因。

本研究采用电化学发光法检测血清NSE 水平。抽取患者股静脉血2ml，于室温下静置1 h，3 000 r/min 离心15 min，取上清液，离心后2 h 加样检测，严格参照仪器和原装试剂的操作流程进行检测。另外，根据血清中NSE 的水平，分为低表达组(NSE＜15.2 ng/ml)和高表达组(NSE＞50.0ng/ml)。

1.4 统计学分析 采用SPSS 19.0 统计软件进行数据分析，NSCLC 组织和对应癌旁正常组织中NSE 表达水平的差异采用配对t检验，计量资料以均数± 标准差（+s）表示，PCR 结果采用2-ΔΔCt法进行分析。以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

图1 患者NSCLC 组织和相应癌旁正常组织中NSE 的相对表达量

2 结果

2.1 患者NSCLC 组织和相应癌旁正常组织中NSE的相对表达量 见图1。探究患者NSCLC 组织和相应癌旁正常组织中NSE 的相对表达量，结果显示NSE 在NSCLC 癌组织中的相对表达量显著高于相应癌旁正常组织，其差异具有统计学意义(P=0.0182)。

2.2 患者血清中NSE 表达水平与患者临床特征间的相关性 见表1。进一步探究NSE 表达水平与NSCLC 患者的临床特征间的相关性，结果显示NSE 表达水平与NSCLC 患者是否吸烟(P=0.002)、是否饮酒(P=0.032)、临床分期(P=0.001)、是否原位癌(P＜0.001)、有无淋巴结(P＜0.001)和远端转移显著相关(P=0.017)。

表1 患者血清中NSE 表达水平与患者临床 特征间的相关性[n(%)]

3 讨论

肺癌是我国第一大癌，其中NSCLC 占所有肺癌病例的85%左右。临床上绝大多数的NSCLC 患者在就诊时已错过了最佳手术时机，只能选择放化疗。近年来探索有效的肿瘤标志物用于NSCLC 的预测和治疗已成为科研工作者们关注的热点。肿瘤标志物作为肿瘤发生、发展过程中的特异性物质，其可在恶性肿瘤的鉴别诊断、临床分期、疗效评估以及预后判别中发挥重要的作用[9-10]。

本研究旨在分析NSCLC 患者肿瘤组织中NSE的基因表达及其与患者临床特征的相关性，以期为NSCLC 的临床预测和诊疗提供合理参考。结果显示NSE 在NSCLC 组织中的相对表达量显著高于相应癌旁正常组织，这就表明NSE 可作为NSCLC 的肿瘤标志物。另外NSE 表达水平与NSCLC 患者的吸烟和饮酒习惯有关，并且还与患者的临床分期、是否原位癌、有无淋巴结和远端转移显著相关。

综上所述，在NSCLC 患者中NSE 可作为其诊断的生物学指标，在临床实践中可考虑将NSE 作为NSCLC 早筛和诊疗的重要指标加以应用。