LC-MS/MS法测定止咳糖浆中福尔可定含量

2020-07-16徐健君

广东公安科技 2020年2期

刘娟徐健君

（1.拱北海关缉私局司法鉴定中心，广东珠海519000；2.珠海市公安局刑警支队，广东珠海519000）

福尔可定（Pholcodine），别名吗啉吗啡、福可定，化学名称为17-甲-基-3-［2-（4-吗啉基）乙氧基］-4，5α-环氧-7，8-二脱氢吗啡喃-6α-醇，分子式为C23H30N2O4。福尔可定为止咳祛痰和抗鼻粘膜充血药，临床上主要治疗剧烈干咳和中等程度的疼痛［1］，属于国家管制麻醉药品［2］。2015年版《中国药典》（二部）中用电位滴定法测定含量［3］，其他有HPLC法、流动注射微乳液化学发光法等［4，5］。本文建立了用LC-MS/MS测定福尔可定，该方法操作简单快速、重现性好、线性范围宽、灵敏度高，可用于止咳水中福尔可定成分的定性定量测定。

1 实验

1.1 仪器与试剂

Agilent Technologies 1290-6470三重四极杆液质联用系统；SIGMA®3-18K高速离心机；EYELA CUTE MIXER CM100高速振荡器；METTLERTOLEDO十万分一电子天平。

盐酸福尔可定标准品（美国Sigma公司），用甲醇配制备用浓度为0.1mg/mL福尔可定标准储备液，于-18℃冰箱中冷藏保存。实验用乙腈、甲醇、甲酸为质谱纯。

1.2 仪器条件

色谱条件：色谱柱ZORBAX Eclipse Plus C18（50mm×2.1mm，1.8μm），柱温40℃，进样量1μL，流动相：0.1%甲酸（A）-甲醇（B）-梯度洗脱（见表1），流速0.2mL/min。

表1 梯度洗脱条件

质谱条件：采用电喷雾离子源（ESI），正离子扫描下以多反应监测（MRM）模式分析，福尔可定的优化采集参数（见表2）。

表2 福尔可定的MRM条件

1.3 样品处理

取检材用乙腈（根据实际浓度稀释）稀释10000倍，经0.22m有机微孔滤膜过滤待检。

2 结果与讨论

2.1 质谱监测离子的选择

在ESI正离子模式下，用浓度1000ng/mL的福尔可定溶液不接色谱柱，进样质谱仪进行全扫描，获得福尔可定的［M+H］399.2准分子离子峰，以其作为母离子，优化碎裂电压进行轰击，获得福尔可定二级全扫描质谱，选择信号较强m/z399.2/114.2（定量离子对）和m/z399.2/70.2两对离子在MRM模式下，进一步优化子离子碰撞能量（见表2）。

2.2 方法的线性范围和检出限

在空白止咳糖浆（不含福尔可定成分的止咳糖浆）中加入系列浓度标准溶液，配成浓度为0.05，0.1，1.0，5.0，10.0，50.0，100.0，200.0，500.0ng/mL的样品，在选定的色谱和质谱条件下测定。福尔可定的浓度为横坐标，以定量离子对m/z399.2/114.2的峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程y=1915.6x+4190，R2=0.9996，表明福尔可定在0.05～500ng/mL范围内有良好的线性关系。

在空白止咳糖浆中加入系列低浓度的标准溶液，样品经前期处理，然后测定。以定量离子对3倍信噪比的响应的样品浓度为检出限（LOD），以10倍信噪比为定量限（LOQ）。止咳糖浆中福尔可定的检出限为0.02ng/mL，定量限为0.05ng/mL。如图1所示。

图1 100ng/mL福尔可定的MRM色谱图

2.3 方法的回收率

空白止咳糖浆中添加福尔可定标准品，配制成低、中、高浓度的0.01，0.1，1mg/mL的样品，按2.3的样品处理方法，稀释1000倍，进行加标回收实验，每一浓度平行6个样品。结果0.01，0.1，1mg/mL的3个样品的平均回收率分别为92.5%、96.2%、102.1%；RSD分别为6.8 %、5.7%、3.5%。

3 结论

综上，本文建立了高效液相色谱-串联质谱法检测福尔可定含量的方法。使用该方法时，福尔可定在0.05～500ng/mL范围内有良好的线性关系，检出限为0.02ng/mL，定量限为0.05ng/mL。在高、中、低三个添加浓度下，平均加标回收率为92.5%～102.1%，相对标准偏差（RSD）为3.5%～6.8%。该方法操作简单快速、重现性好、线性范围宽、灵敏度高，适用于相关案（事）件的检验鉴定。