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LC-MS/MS法测定止咳糖浆中福尔可定含量

2020-07-16徐健君

广东公安科技 2020年2期
关键词:福尔糖浆检出限

刘 娟 徐健君

(1.拱北海关缉私局司法鉴定中心,广东 珠海519000;2.珠海市公安局刑警支队,广东 珠海519000)

福尔可定(Pholcodine),别名吗啉吗啡、福可定,化学名称为17-甲-基-3-[2-(4-吗啉基)乙氧基]-4,5α-环氧-7,8-二脱氢吗啡喃-6α-醇,分子式为C23H30N2O4。福尔可定为止咳祛痰和抗鼻粘膜充血药,临床上主要治疗剧烈干咳和中等程度的疼痛[1],属于国家管制麻醉药品[2]。2015年版《中国药典》(二部)中用电位滴定法测定含量[3],其他有HPLC法、流动注射微乳液化学发光法等[4,5]。本文建立了用LC-MS/MS测定福尔可定,该方法操作简单快速、重现性好、线性范围宽、灵敏度高,可用于止咳水中福尔可定成分的定性定量测定。

1 实验

1.1 仪器与试剂

Agilent Technologies 1290-6470三重四极杆液质联用系统;SIGMA®3-18K高速离心机;EYELA CUTE MIXER CM100高速振荡器;METTLERTOLEDO十万分一电子天平。

盐酸福尔可定标准品(美国Sigma公司),用甲醇配制备用浓度为0.1mg/mL福尔可定标准储备液,于-18℃冰箱中冷藏保存。实验用乙腈、甲醇、甲酸为质谱纯。

1.2 仪器条件

色谱条件:色谱柱ZORBAX Eclipse Plus C18(50mm×2.1mm,1.8μm),柱温40℃,进样量1μL,流动相:0.1%甲酸(A)-甲醇(B)-梯度洗脱(见表1),流速0.2mL/min。

表1 梯度洗脱条件

质谱条件:采用电喷雾离子源(ESI),正离子扫描下以多反应监测(MRM)模式分析,福尔可定的优化采集参数(见表2)。

表2 福尔可定的MRM条件

1.3 样品处理

取检材用乙腈(根据实际浓度稀释)稀释10000倍,经0.22m有机微孔滤膜过滤待检。

2 结果与讨论

2.1 质谱监测离子的选择

在ESI正离子模式下,用浓度1000ng/mL的福尔可定溶液不接色谱柱,进样质谱仪进行全扫描,获得福尔可定的[M+H]399.2准分子离子峰,以其作为母离子,优化碎裂电压进行轰击,获得福尔可定二级全扫描质谱,选择信号较强m/z399.2/114.2(定量离子对)和m/z399.2/70.2两对离子在MRM模式下,进一步优化子离子碰撞能量(见表2)。

2.2 方法的线性范围和检出限

在空白止咳糖浆(不含福尔可定成分的止咳糖浆)中加入系列浓度标准溶液,配成浓度为0.05,0.1,1.0,5.0,10.0,50.0,100.0,200.0,500.0ng/mL的样品,在选定的色谱和质谱条件下测定。福尔可定的浓度为横坐标,以定量离子对m/z399.2/114.2的峰面积为纵坐标进行线性回归,得回归方程y=1915.6x+4190,R2=0.9996,表明福尔可定在0.05~500ng/mL范围内有良好的线性关系。

在空白止咳糖浆中加入系列低浓度的标准溶液,样品经前期处理,然后测定。以定量离子对3倍信噪比的响应的样品浓度为检出限(LOD),以10倍信噪比为定量限(LOQ)。止咳糖浆中福尔可定的检出限为0.02ng/mL,定量限为0.05ng/mL。如图1所示。

图1 100ng/mL福尔可定的MRM色谱图

2.3 方法的回收率

空白止咳糖浆中添加福尔可定标准品,配制成低、中、高浓度的0.01,0.1,1mg/mL的样品,按2.3的样品处理方法,稀释1000倍,进行加标回收实验,每一浓度平行6个样品。结果0.01,0.1,1mg/mL的3个样品的平均回收率分别为92.5%、96.2%、102.1%;RSD分别为6.8 %、5.7%、3.5%。

3 结论

综上,本文建立了高效液相色谱-串联质谱法检测福尔可定含量的方法。使用该方法时,福尔可定在0.05~500ng/mL范围内有良好的线性关系,检出限为0.02ng/mL,定量限为0.05ng/mL。在高、中、低三个添加浓度下,平均加标回收率为92.5%~102.1%,相对标准偏差(RSD)为3.5%~6.8%。该方法操作简单快速、重现性好、线性范围宽、灵敏度高,适用于相关案(事)件的检验鉴定。

4 案例

2018年,检查人员在包裹中发现用塑料袋包装的红色液体50包,每包5mL。经LC-MS/MS检验,该红色液体中检出福尔可定成分,含量为1.25mg/mL。

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