探讨样本吸附反应杯对临床检验结果的影响及解决办法

逯阵毫，王玉堂，李林，付光宇，吴学炜

（郑州安图生物工程股份有限公司，河南 郑州 450016）

单纯疱疹病毒（herpes simplex virus,HSV）是一类严重危害人类健康、引起皮肤病和性病的常见病原体，HSV 共有两种亚型：HSV-1、HSV-2，HSV-2 主要是通过性传播，对孕妇孕前筛查有重要的临床意义［1］。临床检测HSV-2IgG 多采用的间接法反应模式［2］，其特点是所用酶标抗体为特异性动物抗人IgG 抗体［3］。磁微粒化学发光平台的反应杯材质多为聚丙烯，此材料表面疏水性较强［4］，容易与蛋白通过疏水作用力结合，导致蛋白吸附到反应杯表面［5］，包括血浆中的免疫球蛋白［6］，最终导致酶标记的二抗特异性结合反应杯内壁的抗体球蛋白，此时，反应杯充当了固相载体，导致最终检测信号值异常偏高，出现假阳性。有文献报道，表面活性剂可起到抑制蛋白对界面的吸附作用［7］，本文利用非离子表面活性剂Triton X-100 可有效抑制吸附样本的假阳性。

1 材料与方法

1.1 标本

标本来源于妇幼保健院2017 年8～10 月优生优育筛查血浆样本，于-20℃冷冻保存，共15 份，复溶后状态为黄色澄清液体。

1.2 试剂与仪器

某厂家单纯疱疹病毒Ⅱ检测试剂盒（磁微粒化学发光法）及其配套检测仪器；Trinity 单纯疱疹病毒Ⅱ检测试剂盒［酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）］；Triton X-100 （分 子生物 学），Sigma-Aldrich；NaH2PO42H2O，分 析 纯，国 药 化 学 试 剂；Na2HPO412H2O，分析纯，国药化学试剂。

1.3 方法

1.3.1 平台对比 ELISA 法按产品说明书进行主要步骤有：加样、孵育、洗板、加酶、底物、显色、比色。磁微粒化学发光法为全自动系统，设计好标本位置、检测项目，按开始键即可。15 份标本分别在两平台进行测试，测试前标本均用生理盐水（0.9%NaCl 溶液）稀释30 倍。将平台间测试结果进行比对，确认平台间存在差异的样本。

1.3.2 拆分实验 配置0.05 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 7.4），用来替换试剂盒中磁微粒组分，试剂盒中其他组分不变，此组合标记为实验组，正常未替换的试剂盒标记为对照组，然后分别利用对照组和实验组试剂盒对15 份样本进行测试，将两组实验结果进行比对，重点关注平台差异性标本的检测结果。见表1。

表1 拆分实验方案

1.3.3 添加Triton X-100 验证 配置0.5%Triton X-100 生理盐水溶液，标本按照1∶29 稀释后，重复拆分实验的方法，比较两组检测结果。

1.3.4 结果判定 ELISA 平台＞0.15 AU/mL 为阳性，磁微粒化学发光平台＞12 AU/mL 为阳性。

2 结果

2.1 平台比对

15 例标本分别在磁微粒和ELISA 平台检测，见表2。

表2 平台比对结果 (AU/mL)

2.2 拆分实验

试剂盒中磁微粒组分替换为磷酸盐缓冲液后，15 例标本在磁微粒化学发光平台检测，拆分实验结果见表3。

表3 拆分实验结果 (AU/mL)

2.3 生理盐水添加Triton X-100

生理盐水中添加0.5% Triton X-100 后，按照1∶29 稀释15 例标本，重复拆分实验步骤，添加Triton X-100 结果见表4。

表4 生理盐水添加Triton X-100 结果 （AU/mL）

3 讨论

蛋白吸附现象普遍存在于自然界中，已有文献专门报道蛋白吸附动力学［7］，抑制蛋白在表面的吸附已成为热门研究方向。磁微粒化学发光在应用过程中存在多种干扰因素，免疫球蛋白吸附［8］已成为干扰测试结果的重要原因。磁微粒化学发光法和ELISA 法都为间接免疫分析法，但由于ELISA 法板孔内预包被了抗原，起到了封闭作用，所以标本中的免疫球蛋白无法吸附到ELISA板上；而磁微粒化学发光法中的反应杯没有经过封闭剂封闭，所以很容易与免疫球蛋白非特异性结合，同时本文提到的拆分实验也排除了酶标抗体直接吸附反应杯表面的可能，最终与酶标记的抗人免疫球蛋白抗体特异性结合，可以简单地认为是酶标记的抗体通过免疫球蛋白间接固定在反应杯表面上，导致的检测结果异常。

标本经过含有表面活性剂的生理盐水稀释后，原本假阳性的标本结果变成了阴性，说明加入的表面活性剂抑制了非特异性结合的数量，但同时也有文献报道，并非所有的表面活性剂都可以有效的降低吸附的概率［9］，也并非在任何时间加入表面活性剂都可以抑制非特异性吸附，本文提到的磁微粒化学发光试剂盒酶结合物中证实含有Triton X-100，但结果表明非特异性吸附并未得到有效阻止，这或许与蛋白吸附的不可逆性有直接关系［10］。