益生性唾液乳酸杆菌的筛选及其抑菌物质的分析与研究

刘宇超 陈雪 樊磊

【摘 要】目的：探讨益生性唾液乳酸杆菌的筛选及其抑菌物质特征。方法：经口腔检查符合《口腔健康调查基本方法》身体健康且无口腔疾病的20例18～30岁健康体检者作为采样对象，采用垂吐法采集唾液，经培养、16srDNA基因测序鉴定筛选出与嗜酸乳杆菌菌种基因相似度≥97%以上的，且抑菌效果最强菌株作为益生性唾液乳酸杆菌，同时测定其不同浓度下的抑菌效果。结果：本次研究共筛选出5株益生性唾液乳酸杆菌，分别编号为W1、W2、W3、W4、W5，与标准菌种相似度分别为98%、99%、97%、98%、98%。益生性唾液乳杆菌培养原液浓缩2倍（6.16±1.03mm）、3倍（6.98±0.97mm）和4倍（8.56±1.13mm）后抑菌圈直径均显著高于原液（4.53±1.42mm），差异具有统计学意义（p<0.05）。结论：唾液中存在的益生性唾液乳酸杆菌具有抑制变形链球菌作用，且抑菌作用随浓度增加而增加。

【关键词】益生性唾液乳酸杆菌;筛选;抑菌物质;分析;研究

近年来，临床领域关于益生菌的研究逐渐深入，而益生菌也成为临床治疗的重要药物或辅助药物。目前，临床研究已经发现口腔内益生菌对于口腔内环境稳态的维持具有重要意义，但是仍需进一步分析不同益生菌的具体抑菌（病原菌）效果[1]。为此，本次研究采集身体健康且无口腔疾病的20例18～30岁健康体检者的唾液，进行了益生性唾液乳酸杆菌的筛选，并对其抑菌情况进行了分析，现总结报道如下。

1 材料与方法

1.1材料与试剂

选择微生态技术中心保存的嗜酸乳杆菌ATCC4356;革兰染色试剂盒（索莱宝）、细菌DNA提取试剂盒（TaKaRa ）、培养基LBS培养固体基、BHI培养基。

1.2方法

1.2.1筛选与培养

经口腔检查符合《口腔健康调查基本方法》身体健康且无口腔疾病的20例18～30岁健康体检者作为采样对象，采用垂吐法采集唾液，离心后取下层悬液种植于LBS固体培养基

静置培养24h（37℃） [2]。随后，选取乳白色菌落进行划线培养并重新编号，扩增培养24 h（37℃）后，进行常规处理、基因测序，对比测序结果。随后以变形链球菌为指示菌，选出具有抑菌作用的乳酸杆菌，使用BHI双层琼脂扩散法进行抑菌，24 h后测量抑菌圈直径。16srDNA基因测序鉴定后，与嗜酸乳杆菌ATCC4356基因相似度≥97%以上的，且抑菌效果最强菌株作为后续实验菌，分别为其编号。

1.2.3抑菌浓度测定

实验菌采用旋转蒸发仪浓缩，分别进行2倍、3倍、4倍的浓缩，BHI双层琼脂扩散法进行抑菌实验;指示菌：变形链球菌。

1.3观察指标

统计本次研究筛选出的益生性唾液乳酸杆菌菌株，同时其不同浓度下的抑菌能力。

1.4统计学方法

本次研究采用SPSS20. 0 统计学软件分析所有数据，计量资料采用t检验;采用χ2检验计数资料，P<0.05 认为差异显著，有统计学意义。

2 结果

2.1筛选结果

本次研究共筛选出5株益生性唾液乳酸杆菌，分别编号为W1、W2、W3、W4、W5，与标准菌种相似度分别为98%、99%、97%、98%、98%。

2.2不同浓度益生性唾液乳杆菌抑菌效果比较

益生性唾液乳杆菌培养原液浓缩2倍、3倍和4倍后抑菌圈直径均显著高于原液，差异具有统计学意义（p<0.05），见表1。

3 讨论

益生菌是一类对宿主有益的活体微生物，其在人体内发挥了重要的生物学效应，其生物作用研究具有深刻的临床价值[4-5]。乳酸杆菌是一种人体内分布广泛的益生菌，临床研究也相对较多，目前临床研究也发现健康人群口腔中也可分离出该菌种，抑菌特性显著，但有待深入分析与研究。为此，本次研究对身体健康且无口腔疾病的受试者进行益生性唾液乳酸杆菌筛选，共筛选出了5株唾液乳酸杆菌，具有抑制变形链球菌的作用。但是，目前益生性唾液乳酸杆菌抑菌物质的特征研究相对较少;本次研究发现 ，不同浓度的益生性唾液乳酸杆菌抑菌能力存在较大差异，益生性唾液乳杆菌培养原液浓缩2倍（6.16±1.03mm）、3倍（6.98±0.97mm）和4倍（8.56±1.13mm）后抑菌圈直徑均显著高于原液（4.53±1.42mm），培养液浓度与抑菌呈正比，可知益生性唾液乳酸杆菌浓度越高，抑菌浓度越强。

综上所述，唾液中存在的益生性唾液乳酸杆菌具有抑制变形链球菌作用，且抑菌作用随浓度增加而增加。

参考文献

[1] 宋昊芮，李彦，王乐，姚一帆.乳酸杆菌产胞外多糖培养条件的优化[J].吉首大学学报（自然科学版），2019，40（05）：59-62.

[2] 黄佳明，姜宁，张爱忠.乳酸菌作为基因工程菌的研究进展[J].中国饲料，2019（13）：16-20.

[3] 黄思妺. 口腔乳酸杆菌的分离鉴定及其益生功能的研究[D].军事科学院，2018：20-21.

[4] 薛龙，王立鹤，聂红兵，等.唾液乳酸杆菌w22a和种植体周围炎致病菌体外作用的初步研究[J].口腔医学研究，2016，32（10）：1042-1046.

[5] 王立鹤，薛龙，聂红兵，等.益生性唾液乳酸杆菌的筛选及其抑菌物质的初步探究[J].口腔医学研究，2016，32（08）：819-822.