整合素α5与上皮性卵巢癌的相关性研究

穆翔 杜维民 史可心 张裕民 张萍

[摘要] 目的 研究整合素α5（integrin α5）蛋白在上皮性卵巢腫瘤中的表达情况，并分析其与上皮性卵巢癌的临床病理关系。 方法 选择2015年1月～2017年12月山东省青岛市市立医院妇科中心80例住院患者的卵巢肿瘤组织（上皮性卵巢癌40例，交界性上皮性肿瘤20例，良性上皮性肿瘤20例），采用免疫组织化学法检测integrin α5蛋白在卵巢肿瘤组织中的表达情况。 结果 上皮性卵巢癌组织中integrin α5阳性率为80.00%（32/40），显著高于交界性上皮性肿瘤组织[40.00%（8/20）]和良性上皮性肿瘤组织[20.00%（4/20）]（P < 0.01）。上皮性卵巢癌组织中integrin α5蛋白的阳性表达率在不同年龄、病理类型间比较，差异无统计学意义（P > 0.05）;而在不同病理分化程度、病理分期间比较，差异均有统计学意义（均P < 0.05）;在有无淋巴结转移之间比较，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。Spearman等级相关分析显示上皮性卵巢癌组织中integrinα5的表达与卵巢癌的手术病理分期、病理分化程度、有无淋巴结转移呈显著正相关（r = 0.854、0.765、0.895，P < 0.05）。 结论 integrin α5在上皮性卵巢癌组织中过量表达，与病理分化程度、病理分期及淋巴结转移密切相关，通过监测integrin α5的表达，可能帮助判断卵巢癌患者的远期预后以及指导临床治疗。

[关键词] 整合素α5;卵巢肿瘤;上皮性卵巢癌;免疫组织化学

[中图分类号] R737.21          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2020）05（b）-0114-04

Correlation between integrin α5 and epithelial ovarian cancer

MU Xiang1   DU Weimin1   SHI Kexin2   ZHANG Yumin3   ZHANG Ping1

1.Department of Gynaecology， Qingdao Municipal Hospital Affiliated to Qingdao University， Shandong Province， Qingdao   266000， China; 2.Medical College of Qingdao University， Shandong Province， Qingdao   266071， China; 3.Food Inspection and Testing Institute of Heze City， Shandong Province， Heze   274000， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of integrin α5 in epithelial ovarian tumors and to analyze its clinicopathological relationship with epithelial ovarian cancer. Methods From January 2015 to December 2017， Ovarian tumor tissue were collected from 80 hospitalized patients under the care of the Gynecology Center of the Qingdao Municipal Hospital （40 epithelial ovarian cancer samples， 20 borderline epithelial tumor samples and 20 benign epithelial tumor samples）. Immunohistochemistry was used to detect the expression of integrin α5 protein in ovarian tumor tissues. Results The positivity of integrin α5 in epithelial ovarian cancer samples was 80.00% （32/40）， which was significantly higher than that in borderline epithelial tumor samples （40.00% [8/20]） and benign epithelial tumor samples （20.00% [4/20]）（P < 0.01）. There was no statistically significant difference in the positive expression rate of integrin α5 protein in epithelial ovarian cancer among different ages and pathological types （P > 0.05）. There was a significant difference among different degree of pathological differentiation and different stages of operation and pathology （P < 0.05）; the difference was highly statistically significant between the presence and absence of lymph node metastasis （P < 0.01）. Spearman rank correlation analysis showed that the expression of integrin α5 in epithelial ovarian cancer tissues was significantly positively correlated with the surgical pathological stage， pathological differentiation degree and presence or absence of lymph node metastasis of ovarian cancer （r = 0.854， 0.765， 0.895， P < 0.05）. Conclusion The overexpression of integrin α5 in epithelial ovarian cancer tissues is closely related to the degree of pathological differentiation， surgical pathological stage and lymph node metastasis. Monitoring the expression of integrin α5 may help to determine the long-term prognosis of ovarian cancer patients and guide clinical treatment.

[Key words] Integrin α5; Ovarian tumor; Epithelial ovarian cancer; Immunohistochemistry

卵巢癌是妇科常见的三大恶性肿瘤之一，是病死率最高的妇科恶性肿瘤[1-2]。因卵巢位置隐匿，早期缺乏特异性症状，70%以上的患者确诊时已届晚期，直接蔓延、腹腔种植及淋巴转移是其主要的转移途径[3]。卵巢肿瘤细胞主要从原发部位脱落并种植于腹腔，肿瘤细胞可黏附到器官的间皮层上，这是形成继发性病灶和上皮性卵巢癌进展的关键步骤[4]。整合素（Integrin）为细胞黏附分子家族的重要成员之一，主要介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质（ECM）之间的相互黏附，并介导细胞与ECM之间的双向信号传导[5]。研究显示，integrin α5在多种人类肿瘤中存在过度表达，如食管癌、乳腺癌、结直肠癌、肝癌[6-9]等，但在卵巢癌中的研究相对较少。因此，本研究采用免疫组织化学法检测integrin α5蛋白在上皮性卵巢肿瘤中的表达，以期为判断上皮性卵巢癌的远期预后及为指导临床治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料来源

选择2015年1月～2017年12月在山东省青岛市市立医院妇科中心住院的80例患者的卵巢肿瘤组织（上皮性卵巢癌40例，交界性上皮性肿瘤20例，良性上皮性肿瘤20例），患者术前均未行放疗和化疗，未合并其他恶性肿瘤。术后病理组织经2名病理科专家会诊，明确诊断。良性上皮性肿瘤组织20例，年龄21～50岁，平均（38.4±11.3）岁，其中浆液性囊腺瘤10例，黏液性囊腺瘤10例;交界性上皮性肿瘤组织20例，年龄18～56岁，平均（41.7±13.6）岁，其中交界性浆液性肿瘤10例，交界性黏液性肿瘤10例;上皮性卵巢癌组织40例，年龄25～72岁，平均（57.5±14.4）岁，其中≤60岁者25例，>60岁者15例。其病理类型：浆液性癌15例，黏液性癌10例，子宫内膜样癌7例，透明细胞癌8例;病理分化程度：高级别22例，低级别18例;国际妇产科联盟（FIGO）标准[10]：Ⅰ～Ⅱ期19例，Ⅲ～Ⅳ期21例;淋巴结转移者10例，淋巴结未转移者10例，未检查20例。卵巢肿瘤病理诊断标准：《肿瘤病理诊断规范（卵巢癌及交界性上皮性肿瘤）[11]。

1.2 方法与主要试剂

采用SP免疫组化法检测卵巢组织中integrin α5的表达。所用integrin α5兔抗人单克隆抗体（稀释度1∶100）购自英国abcam公司;SP试剂盒和DAB显色剂均购自北京索莱宝科技有限公司。

1.3 评判标准

Integrin α5蛋白阳性染色定位于胞膜，DAB染色后出现棕黄色颗粒。免疫组化实验结果采用双盲法阅片，每张切片随机选择10个具有代表意义的高倍视野（200×），每个视野计数100个细胞中的阳性细胞数，根据染色强度和阳性细胞取平均数作为最终的结果。以阳性细胞数所占比例分为：<10%记为0分，10%～30%记为1分，>30%～50%记为2分，>50%记为3分;根据染色强度评分：不着色记为0分，浅黄色记为1分，棕黄色记为2分，棕褐色记为3分。两种评分的乘积为最终阳性强度的评分。最终积分≤3分计为阴性（-），>3～6分为阳性（+），>6分为强阳性（+++）。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0统计软件对所得数据进行统计学分析，计数资料采用例数或百分率表示integrin α5蛋白在各卵巢组织的表达阳性率比较采用χ2检验。integrin α5蛋白的表达强度和相对表达水平采用非参数秩和检验;integrin α5与临床病理特征间的相关性采用Spearman等级相关分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 integrin α5蛋白在不同卵巢组织中的表达情况

integrin α5蛋白在上皮性卵巢癌中表达阳性率为80%（32/40），显著高于交界性上皮性肿瘤组[40.00%（8/20）]和良性上皮性肿瘤组[20.00%（4/20）]（P < 0.01）。见图1（封四）、表1。

2.2 卵巢癌组织中integrin α5蛋白的表达与不同临床病理参数的关系

上皮性卵巢癌组织中integrin α5蛋白的阳性表达率在不同年龄、病理类型间比较，差异无统计学意义（P > 0.05）;而在不同病理分化程度、病理分期间比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）;在有無淋巴结转移之间比较，差异有高度统计学意义（P < 0.01）。Spearman等级相关分析显示上皮性卵巢癌组织中integrin α5的表达与卵巢癌的手术病理分期、病理分化程度、有无淋巴结转移呈显著正相关（r = 0.854、0.765、0.895，P < 0.05）。见表2。

3 讨论

Integrin是由α亚基和β亚基组成的跨膜异二聚体，是基质中纤连蛋白（fibronectin，Fn）的一个重要受体，integrin α5β1只识别Fn分子中的RGD序列（Arg-Gly-Asp，精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）[12]，在与配体结合后，integrin激活信号转导途径，介导细胞信号，如细胞周期的调控，细胞内细胞骨架的组成，以及新生受体向细胞膜的运动[13]。细胞与ECM之间的黏附是通过受体来决定，其中以integrin受体起主要作用，肿瘤细胞的黏附受体只有与ECM成分黏附，才能实现肿瘤细胞的浸润与转移[14]。

本研究中，integrin α5蛋白在上述组织中的表达差异提示integrin α5表达量的改变，可能与肿瘤的发生与发展相关，高表达与肿瘤的进展和恶性程度相关。根据研究结果显示integrin α5蛋白的表达与年龄及病理类型无关，一方面说明其表达可能不受年龄及病理类型的影响，另一方面可能受病例数量、抗体浓度及方法的敏感性影响。在上皮性卵巢癌的病理类型中，integrin α5蛋白的表达阳性率无差异，本研究结果显示透明细胞癌的integrin α5蛋白的表达强阳性率明显高于其他病理类型，透明细胞癌中integrin α5蛋白的特异性表达增高，使其与周围组织具有更强的黏附能力，较其他病理类型更早发生转移，预后更差，这与Chan等[15]的研究结果相符合。Spearman等级相关分析结果显示，上皮性卵巢癌患者组织中integrin α5的表达量与卵巢癌的病理分级、分期及是否存在淋巴结转移呈显著正相关，提示integrin α5的表达增加促进恶性肿瘤的进展，但是具体机制需要进一步研究。研究显示晚期卵巢癌组织中integrin α5的阳性表达要高于早期卵巢癌，integrin α5表达越高的患者，肿瘤细胞的恶性程度越高，有更早进展为卵巢癌的趋势。另外，在不同分化程度的上皮性卵巢癌中，高级别的卵巢癌组织integrin α5蛋白表达的阳性率要高于低级别的卵巢癌组织（P < 0.05），这提示肿瘤病理分级越高，分化程度越低，integrin α5蛋白的表达越高，肿瘤细胞的恶性程度就越高，这与Xiao等[16]、Zutter等[17]的研究相一致，由于卵巢癌预后与组织的分化程度密切相关，晚期卵巢癌并高级别分化通常预示预后不良，Lu等[18]研究发现，integrin α5蛋白在结直肠癌中过量表达且为肿瘤恶性进展的必要成分，并可作为癌症预后的潜在标志物，因此推测可以通过integrin α5表达量来间接判断卵巢癌的预后。

腫瘤细胞与细胞外基质黏附才能发生转移，integrin α5是主要的黏附受体，Integrin α5表达量增加，增强了卵巢癌细胞与周围组织的黏附，这可能为卵巢癌侵袭周围组织及淋巴结转移提供了前提条件。因此integrin α5的表达增加与卵巢癌盆腔淋巴结转移密切相关，这与结直肠癌中的研究相一致[19-20]。

本研究中，integrin α5表达阳性率与上皮性卵巢癌的发生、侵袭、转移密切相关，由此推断integrin α5的表达量差异在一定程度上可评估上皮性卵巢癌预后，并为卵巢癌的临床诊治提供了一定的实验理论依据。

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（收稿日期：2019-11-14  本文编辑：封   华）