荧光定量PCR在念珠菌性阴道炎诊断中的应用价值

罗翔宇

(禹州市妇幼保健院 检验科，河南 许昌 461670)

阴道炎是女性高发的一种妇科病，患者多因细菌性感染发病，多种细菌均可诱发阴道感染，因此临床治疗女性细菌性阴道炎前需鉴别出感染细菌种类[1]。临床发现念珠菌是细菌性阴道炎的主要致病菌之一，且复发率较高，对患者生活影响较大。细菌培养法是常规诊断细菌性阴道炎的方法，耗时较长，不利于及时治疗。荧光定量PCR是新型PCR检测技术，快速高效[2]。本研究旨在探讨荧光定量PCR在念珠菌性阴道炎诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2017年8月至2019年8月禹州市妇幼保健院接收的62例疑似阴道炎患者，年龄29～57岁，平均(42.86±7.26)岁，病程3～8个月，平均(5.83±1.24)个月。所有患者均接受阴道分泌物核酸杂交法检测，结果作为金标准。排除真菌感染患者。患者自愿参与本研究并签署知情同意书。本研究经禹州市妇幼保健院医学伦理委员会批准。

1.2 检测方法

1.2.1荧光定量PCR 使用无菌性棉签蘸取患者阴道分泌物，使用美国Bio-Rad伯乐实时荧光定量PCR仪(规格：CFX384 Touch)及其配套的试剂盒、器皿，将患者阴道分泌物和生理盐水混合成1 000 μL，1 500 r·min-1离心15 min，静置10 min后去除上层清液，加入组织裂解液，60 ℃水育15 min，再次1 500 r·min-1离心15 min，取上层清液进行PCR扩增。反应体系：2×蒸馏水55 μL、10×反应缓冲液(北京博尔迈生物科技有限公司)10 μL、4×dNTPs(各1.25 mmol·L-1，由赛默飞世尔科技有限公司提供)16 μL，上海博雅生物技术有限公司提供的DNA模板10 μL，Taq聚合酶0.5 μL。将反应体系配置好后置于实时荧光定量PCR仪上，设置参数：以94 ℃ 60 s；37 ℃ 60 s，72 ℃ 120 s顺序依次进行，循环30次后使用琼脂糖凝胶电泳观察结果，与阳性对照样本和阴性对照样本对比。阳性诊断标准：条带宽度≤1 mm，并在预期碱基范围内，背景无药斑或引物二聚体。在预期碱基范围之外为假阳性。

1.2.2细菌培养法 将采集的患者阴道分泌物置于干净的细菌培养皿中，加入适量的细菌培养液，然后置于细菌培养箱中，温度设置为32 ℃，湿度为50%，培养48 h后使用融智生物科技青岛有限公司提供的微生物鉴定质谱系统(规格：Quan TOFⅠ/Ⅱ)进行细菌鉴定。阳性诊断标准：48 h后器皿内出现典型菌落，鉴定为念珠菌。

1.3 统计学方法采用SPSS 20.0统计软件进行数据处理。计数资料以频数和率(%)表示，组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 检测结果62例患者经阴道分泌物核酸杂交法检测诊断出念珠菌性阴道炎48例，其他类型细菌感染14例，检出率为77.42%；荧光定量PCR检出念珠菌性阴道炎46例，其他类型细菌感染11例，误诊5例，检出率为74.19%；细菌培养法检出念珠菌性阴道炎34例，其他类型细菌感染8例，误诊20例，检出率为54.84%。荧光定量PCR检出率与核酸杂交法诊断检出率比较，差异无统计学意义(χ2=0.176，P=0.675)；荧光定量PCR检出率高于细菌培养法，差异有统计学意义(χ2=5.072，P=0.024)。见表1、2。

表1 荧光定量PCR诊断结果(n)

表2 细菌培养法诊断结果(n)

2.2 诊断价值荧光定量PCR检测的灵敏度、特异度、准确性[95.83%(46/48)、78.57%(11/14)、91.94%(57/62)]均高于细菌培养法[70.83%(34/48)、57.14%(8/14)、67.74%(42/62)](均P<0.05)。

3 讨论

念珠菌性阴道炎是临床较常见的一种阴道炎类型，常伴有外阴瘙痒、尿痛、白带增多、分泌物异味等临床症状，对患者生活影响较大[3]。细菌培养法是目前临床运用较为广泛的一种细菌鉴别技术，可以鉴别感染性疾病的菌群种类，但临床耗时较长，往往需要2～3 d才能得出诊断结果，不能满足临床治疗要求。荧光定量PCR诊断技术是由传统PCR技术发展而来的一种新型诊断技术，应用广泛，可对多种病原菌进行诊断，效果较好[4]。

本研究中荧光定量PCR检出率与核酸杂交法诊断检出率相近，荧光定量PCR检出率、灵敏度、特异度、准确性均高于细菌培养法，表明相对比细菌培养法，荧光定量PCR诊断念珠菌性阴道炎效果更好，结果更准确，临床应用价值更高。荧光定量PCR在检测过程中，将荧光基团加入PCR反应体系中，利用荧光信号积累对整个PCR进程进行实时检测，然后与标准曲线进行对比得出检测结果。荧光定量PCR对样本量要求较低，无需过多的样本容量，检测灵敏度、特异度均较高，且检测耗时短，当天即可获得检测结果，从而缩短检测结果等待时间，可及时进行治疗[5]。与传统的PCR技术相比，无PCR后续操作流程，降低产物污染的风险性，同时荧光定量PCR具有数千种细菌的荧光对照谱，对念珠菌的特异度较高；而细菌培养法易受到外部细菌的影响，造成诊断结果误差，对念珠菌的特异度并不高；而对于部分细菌培养法无法进行培养或培养要求较高的特殊菌种，荧光定量PCR检测也提供了新的思路，为临床诊断提供新的诊断方法，临床医生可灵活选择运用。因此，荧光定量PCR的诊断结果较可靠，但对操作人员的素质要求较高，需熟悉各项流程的操作事项[6]。

综上所述，荧光定量PCR诊断念珠菌性阴道炎效果较好，值得临床推广应用。