血清miR-17-5p在卵巢癌患者中的表达及预后价值

王 颖 倪健彬

卵巢癌患者的生存周期受到其早期诊断水平的直接而深刻的影响。现阶段，血清糖类抗原125(CA125)、盆腔检查是临床诊断卵巢癌过程中通常采用的常规方法，但是，由于这些检查方法具有较低的灵敏度、特异度，因此会造成患者就诊时已经处于TNM分期Ⅲ期或Ⅳ期，这时即便给予患者根治性手术、化疗等综合治疗，患者仍然有约30%的死亡率[1-3]。相关医学研究表明[4-5]，在多种肿瘤的诊断及预后判断中，循环miRNAs由于临床相关性极高，因此可以作为重要的分子指标。很多相关医学研究表明[6-7]，一系列血清miRNA在卵巢癌诊断中应用价值极高。本研究探讨了血清miR-17-5p在卵巢癌中的表达及预后价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料

随机选取2015年8月至2018年8月我院卵巢癌患者50例，患者年龄40～80岁，平均(60.2±10.5)岁。在组织学类型方面，26例严重，24例其他；在细胞核分化程度方面，23例为高分化，27例为中低分化；在TNM分期方面，21例为Ⅰ～Ⅱ期，29例为Ⅲ～Ⅳ期。将卵巢癌患者作为卵巢癌组。另随机选取同期我院健康体检女性50例作为健康对照组，年龄41～80岁，平均(61.3±10.7)岁。2组人员的一般资料比较差异均不显著(P>0.05)。

1.2 纳入和排除标准

纳入标准：①均经病理组织学检查确诊为卵巢癌；②均具有正常的肝肾功能；③均为初诊初治患者。排除标准：①合并严重内科疾病；②合并其他肿瘤；③接受过放化疗治疗。

1.3 方法

1.3.1 实验试剂与仪器 实验试剂：购买上海吉马科技有限公司生产的miR-17-5p、内参U6引物，碧云天科技有限公司生产的TRIzol细胞裂解液，北京TIANGEN科技有限公司生产的miRcute miRNA提取分离试剂盒，Ambion公司生产的miRNA反转录引物与试剂盒，TaKaRa公司生产的SYBR Premix试剂盒；实验仪器：台式低温高速离心机(美国Beckman)、-80 ℃冰箱(Thermo公司)、实时定量PCR仪(7500型，美国ABI公司)。

1.3.2 血清miR-17-5p提取与反转录 手术前后分别将2组人员的5 ml空腹血采集下来，保存在真空干燥管中，进行10 min的离心，将速率设定为1 500 r/min，在-80 ℃冰箱中保存待测。应用miRcute miRNA提取分离试剂盒提取血清miR-17-5p，采用紫外分光仪对RNA浓度、纯度进行检测。应用反转录试剂盒进行反转录，有10 mg RNA模板存在于每个反转录体系中。反转录条件为在16 ℃、42 ℃、85 ℃的温度下分别反转录30 min、30 min、5 min。

1.3.3 qRT-PCR 反应条件为在95 ℃、95 ℃、60 ℃、72 ℃的温度下分别反应3 min、12 s、35 s、35 s，循环40次。运用相对定量法将血清miR-17-5p的相对表达量(F)计算出来。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 2组人员的血清miR-17-5p表达比较

卵巢癌组患者的血清miR-17-5p表达水平为(6.14±1.44)%，显著高于健康对照组的(2.73±0.30)%(t=4.303，P<0.05)。

2.2 卵巢癌组患者手术前后的血清miR-17-5p表达比较

卵巢癌组患者手术后的血清miR-17-5p表达水平为(3.20±0.82)%，显著低于手术前(t=6.965，P<0.05)。

2.3 卵巢癌组患者血清miR-17-5p表达与临床病理参数的相关性分析

卵巢癌组TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者血清miR-17-5p高表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，但不同年龄、组织学类型、细胞核分化程度患者血清miR-17-5p高表达率之间的差异均不显著(P>0.05)。见表1。

表1 卵巢癌组患者血清miR-17-5p表达与临床病理参数的相关性分析(例，%)

2.4 卵巢癌组患者血清miR-17-5p表达与生存情况的相关性分析

卵巢癌组血清miR-17-5p高表达患者的1年、2年、3年、5年生存率[88.9%(24/27)、77.8%(21/27)、70.4%(19/27)、55.6%(15/27)均显著低于低表达患者95.7%(22/27)、87.0%(20/27)、78.3%(18/27)、69.6%(16/27)](P<0.05)。见表2。

表2 卵巢癌组患者血清miR-17-5p表达与生存情况的相关性分析(例，%)

3 讨论

miR-17-5p归属于miR-17-92家族，在多个肿瘤中将致癌性miRNA作用发挥了出来。在脑胶质瘤、胃癌、结肠癌、肝细胞癌、膀胱癌等多种肿瘤组织、细胞、血液中，miR-17-5p具有显著较高的表达。既往研究表明[8]，在肝癌、胃癌、胰腺癌、肺癌等多种肿瘤的诊断及预后判断中，可以将循环血液中的miR-17-5p作为一项重要的参考指标。在多种肿瘤的诊断中，血清中游离miR-17-5p可以作为一项有价值的检测指标。同时，其检测稳定，能够将肿瘤状态反映出来，作为一种肿瘤标志物应用前景极为广阔。本研究结果表明，卵巢癌组患者的血清miR-17-5p表达水平显著高于健康对照组，说明在对卵巢癌患者和健康人群进行区分的过程中，可以将卵巢癌患者血清miR-17-5p表达水平显著升高作为一项分子指标。本研究结果还表明，卵巢癌组患者手术后的血清miR-17-5p表达水平显著低于手术前，说明卵巢癌患者接受根治性切除术治疗情况对其血清miR-17-5p表达水平造成了直接而深刻的影响，可能为卵巢癌特异性血清miRNA[9]。

相关医学研究表明[10]，miR-17-5p在对增殖、分化进行调控的miRNA中最具代表性，其将癌基因作用发挥出来的潜在机制为对E2F1、BIM等肿瘤相关基因表达进行抑制，为肿瘤细胞增殖、分化提供良好的前提条件。相关医学研究表明[11]，卵巢癌患者的YES1表达会在过表达miR-17-5p的作用下上调，为卵巢癌细胞增殖提供良好的前提条件，对细胞凋亡进行抑制。研究表明[12]，和健康人相比，卵巢癌患者具有显著较高的血清miR-17-5p表达。从这里我们可以看出，卵巢癌的发生、进展可能和miR-17-5p关系密切。同时，卵巢癌的临床病理特征也可能和miR-17-5p关系密切。相关医学学者[13]对卵巢癌患者的临床分期、术后5年生存率和miR-17-5p的关系进行了分析，发现随着临床分期的提升，血清miR-17-5p表达水平逐渐提升，二者呈显著的正相关关系。而和血清miR-17-5p低表达患者相比，血清miR-17-5p高表达患者具有显著较低的5年生存率。相关医学研究也表明[14-15]，和健康人相比，卵巢癌患者具有显著较高的血清miR-17-5p表达水平，因此在诊断卵巢癌过程中，可以将血清miR-17-5p作为有效的分子指标。卵巢癌患者的临床分期和血清miR-17-5p表达水平呈显著的正相关关系，但患者年龄、组织学类型、细胞核分化程度和血清miR-17-5p表达水平均无相关性。和血清miR-17-5p低表达患者相比，血清miR-17-5p高表达患者具有显著较低的5年生存率。本研究结果表明，卵巢癌组TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者血清miR-17-5p高表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者，但不同年龄、组织学类型、细胞核分化程度患者血清miR-17-5p高表达率之间的差异均不显著；卵巢癌组血清miR-17-5p表达高表达患者的1年、2年、3年、5年生存率均显著低于低表达患者，和上述相关医学研究结果一致，说明miR-17-5p可能能够将癌基因作用发挥出来，为卵巢癌的发生、进展提供良好的前提条件。

总之，血清miR-17-5p在卵巢癌中的表达水平显著升高，降低了患者生存率，可以作为潜在靶点对卵巢癌进行临床诊断及预后判断。