IL-1β，IL-6，IFN-γ在甲型H1N1流感病毒性肺炎患者血清中的表达及其与疾病预后的相关性分析

樊江平 刘成 姜彩肖

甲型H1N1流行性感冒(流感)病毒是引起呼吸道感染的重要病原体，多起引起世界范围内大流行[1]。甲型H1N1流感病毒感染后可通过飞沫、气溶胶及接触传染，导致流感样症状，部分患者病情较为严重、进展迅速，若不及时干预常危及生命[2]。目前我国感染甲型H1N1流感病毒人数逐年升高，重症病例随之增多，寻找可准确评估患者病情及预测预后的血清学指标，对改善患者预后、降低病死率有重要意义。研究表明[3-4]，流感病毒入侵机体后，可刺激机体迅速产生各种细胞因子，如白细胞介素(interleukin，IL)-1β、IL-6、干扰素(interferon，IFN)-γ等，阻止病毒在机体中的复制和扩散，重建促炎、抗炎介质平衡，与疾病预后关系紧密。目前关于血清IL-1β、IL-6、IFN-γ与甲型H1N1流感病毒性肺炎预后关系的研究尚少。本研究对2017年1月—2019年1月收治的96例甲型H1N1流感病毒性肺炎患者血清IL-1β、IL-6、IFN-γ进行检测和分析，探讨其与疾病严重程度及预后的相关性。

资料与方法

一、研究对象

选取2017年1月-2019年1月本院收治的128例确诊甲型H1N1流感病毒性肺炎患者，均经咽试子培养确诊，设为疾病组，其中男80例，女48例；年龄18～67岁，平均(44.42±7.42)岁；体质量指数(23.45±2.72)kg/m2；临床症状：发热118例，咳嗽117例，咳痰87例，头痛22例，寒战15例，消化道症状38例；合并高血压4例，冠心病3例，糖尿病2例。另选取同期来本院进行健康体检的40例受试者为健康组，其中男24例，女16例；年龄21～65岁，平均(43.16±6.20)岁。健康组与疾病组性别、年龄比较，差异无统计学意义(性别：=0.081，P=0.776；年龄：t=0.973，P=0.332)，具有可比性。本研究获院伦理委员会审核批准。

二、纳入排除标准

纳入标准：①符合甲型H1N1流感病毒性肺炎诊断标准[5]，且均经咽试子培养阳性。②首次确诊患者。③签署知情同意书。④重症诊断标准[6]符合下列条件之一者即可判断：持续高热3 d以上；剧烈咳嗽伴脓痰、血痰或胸痛；呼吸困难、口唇发绀；意识改变；严重呕吐、腹泻或脱水；X线片提示肺炎征象；心肌酶迅速升高。所有符合重症诊断标准的96例患者纳入重症组，其余32例纳入轻症组。排除标准：①妊娠期哺乳期女性。②合并其他类型感染性疾病者。③近1年内接种季节性流感疫苗者。

三、方法

收集死亡组和存活组的临床资料：根据患者病情转归分为存活组112例和死亡组16例，记录2组性别、年龄、体质量指数、基础疾病、体温、临床症状、心率、平均动脉压、呼吸频率、血氧饱和度、血乳酸、血清C反应蛋白、外周血白细胞计数、外周血淋巴细胞计数、血清乳酸脱氢酶。血乳酸、血清乳酸脱氢酶均采用AU5800型全自动生化分析仪(美国BeckMan Coulter公司)及其配套试剂检测；血清C反应蛋白采用免疫比浊法检测(试剂盒购自北京九强生物技术股份有限公司)；外周血白细胞计数采用全自动五分类STKS型血细胞自动分析仪(美国BeckMan Coulter公司)及其配套试剂检测；外周血淋巴细胞计数采用CD45per-CP/CD3FITC/CD8PE/CD4APC试剂于FACSCalibur流式仪中检测(美国BD公司)。所有检测均严格按照试剂盒说明书执行。

血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平检测方法：入院确诊后立即采集甲型H1N1流感病毒性肺炎患者晨起空腹静脉血3 mL，同时采集健康受试者外周血3 mL，以3 000 r·min-1离心收集上层血清，采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平，严格按照试剂盒(上海邦奕生物科技有限公司)说明书操作。

治疗方法：甲型H1N1流感病毒性肺炎患者确诊后参照《甲型H1N1流感诊疗方案(2009年第三版)》[7]进行治疗：包括氧疗、抗病毒、应用抗生素抗感染、早期使用糖皮质激素、控制血糖、维持水电解质平衡等综合支持治疗。

四、统计学方法

结 果

一、重症组、轻症组及健康组血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平比较

重症组、轻症组及健康组血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)；与健康组比较，重症组、轻症组血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平均较高，且重症组高于轻症组，差异均有统计学意义(P<0.05)(见表1)。

表1 血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平比较

与健康组比较，△P<0.05；与轻症组比较，*P<0.05。

在选定的参数条件下，采集11次激光未剥蚀时的载气空白信号。以11次载气空白信号值的3倍标准偏差与基体元素信号值的比值计算得到各待测元素对应的检出限，公式见式(2)，结果见表3。

二、死亡组与存活组血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平及其他可能影响预后的因素比较

死亡组与存活组男性、基础疾病、临床症状分布构成比及年龄、体温、心率、平均动脉压、呼吸频率、血氧饱和度、血乳酸、血清C反应蛋白、外周血白细胞计数水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；死亡组患者体质量指数、血清乳酸脱氢酶及血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平均高于存活组，而外周血淋巴细胞计数低于存活组，差异均有统计学意义(P<0.05)(见表2)。

三、logistic回归分析

统计患者临床资料，进行赋值：性别(男性=0、女性=1)、基础疾病高血压(无=0、有=1)、冠心病(无=0、有=1)、糖尿病(无=0、有=1)、临床症状咳嗽(无=0、有=1)、咳痰(无=0、有=1)、痰液性状(白痰=0、黄痰=1、血痰=2)、头痛(无=0、有=1)、寒颤(无=0、有=1)、消化道症状(无=0、有=1)，年龄、体质量指数、体温、心率、平均动脉压、呼吸频率、血氧饱和度、血乳酸、血清C反应蛋白、外周血白细胞计数、外周血淋巴细胞计数、血清乳酸脱

表2 血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平及其他可能影响预后的因素比较

氢酶、血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平为连续变量，以上述临床资料为自变量，以预后(生存=0、死亡=1)为因变量，进行logistic回归分析。经logistic回归分析，体质量指数、外周血淋巴细胞计数、血清乳酸脱氢酶及血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平，均是导致甲型H1N1流感病毒性肺炎患者预后不良的危险因素(OR=2.134、1.689、3.725、2.351，2.535，P均<0.05)(见表3)。

讨 论

甲型H1N1流感病毒性肺炎是由单股RNA病毒引起的急性呼吸道传染性疾病，传染性强，感染人群重症转归的风险高，部分患者病情迅速恶化后发展为急性呼吸窘迫综合征或呼吸衰竭而死亡[8]。

表3 logistic回归分析

本研究发现，与健康组比较，重症组、轻症组血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平均较高，且重症组高于轻症组，提示血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平与甲型H1N1流感病毒性肺炎严重程度关系密切。研究表明，单核巨噬细胞、辅助性T淋巴细胞亚群在病毒感染性疾病病程中有重要作用[11]。甲型H1N1病毒进入机体后首先入侵呼吸道上皮细胞，募集多种免疫细胞，逐步入侵肺部引起免疫炎症损伤，继而引发间质性肺炎。甲型H1N1病毒感染后，单核巨噬细胞活化产生IL-1β因子，同时IL-1β可刺激单核巨噬细胞产生IL-6，IFN-γ由辅助性T淋巴细胞1(Th1)和杀伤性细胞分泌，与IL-1β，IL-6共同发挥调节免疫炎症反应作用[12-13]。动物实验研究表明，通过降低发热大鼠血清IL-1β，IL-6等因子释放，可有效降低疾病严重程度[14]。

本研究中死亡组患者体质量指数、血清乳酸脱氢酶及血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平均高于存活组，而外周血淋巴细胞计数低于存活组，经logistic回归分析证实，体质量指数、外周血淋巴细胞计数、血清乳酸脱氢酶及血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平均是导致甲型H1N1流感病毒性肺炎患者预后不良的危险因素，提示血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平与疾病预后关系密切。研究表明，高体质量指数患者耐受低氧能力较差，同时可能伴随代谢性疾病，影响机体免疫功能，在感染H1N1后病死风险增加[15]。血清乳酸脱氢酶对病毒性心肌炎、病毒性脑炎病情严重程度有关，其水平升高提示组织损伤程度严重，不利预后。IL-1β，IL-6，IFN-γ是病原体入侵机体后产生炎症介质，反映细胞免疫变化。范春红等[16]研究表明，慢性阻塞性肺疾病存活患者血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平显著低于死亡患者，且IL-1β与病情预后正相关，与本研究结果相似。

综上所述，血清IL-1β，IL-6，IFN-γ水平与甲型H1N1流感病毒性肺炎严重程度及预后关系密切，早期进行相应检查对判断疾病转归有重要价值。