不同产地槐米中芦丁的提取及含量测定比较

陈 璐，耿柏林，郭禄晶，苏星超，强力源,郑立颖，李 欠*

（1.甘肃农业大学农学院/甘肃省中药材规范化生产技术创新重点实验室，甘肃兰州730070；2.甘肃农业大学水利水电工程学院，甘肃兰州730070；3.甘肃农业大学植物保护学院，甘肃兰州730070；4.甘肃农业大学管理学院，甘肃兰州730070）

槐米为豆科植物槐（Sophora japonicaL.）的干燥花蕾。其性苦，微寒，具有凉血止血、清肝泻火的功效，同时血痢、崩漏、痔疮出血、吐血及头晕等症状均可用槐米入药进行医治[1]。现代药理研究表明：槐米具有保护心脑血管、改善糖尿病、抗菌、抗氧化和抑制黑色素生成等作用[2，3]。2015 年版中国药典以高效液相色谱法测定芦丁的含量及其他常规鉴别项目作为其质量控制的指标[1]，芦丁具有抗炎、抗过敏、抗心肌缺氧及缺血、抗心律失常、降低血清胆固醇、抑制血小板集聚、抗溃疡、抗肿瘤、解痉、镇咳、抗病毒和增强免疫力等功能，是预防和治疗糖尿病、心绞痛、慢性心功能不全、高血脂和预防动脉硬化心肌梗死、脑血栓等疾病的天然绿色药物[4]。医药工业中也常以槐米为主要原料提取芦丁[5-9]。除药用价值以外，槐米也是一种常用的工业染料，其有效成分有很强的吸收紫外光能力，现在经常被添加到化妆品中用作防晒护肤品；如果与一些特殊中药或者酶制剂添加在一起使用，还可以用作保健品和食品，同时开发出了槐米花茶，预计在国际上会有广阔的市场前景[10-14]，具有很高的开发价值[15，16]。近代研究表明：槐米中芦丁含量可高达23.5%，槐米价格相对便宜，产量可观，因此对槐米中有效成分的提取及含量的测定具有很高应用价值。

本实验通过采用碱溶酸沉法和超声波辅助碱溶酸沉法，提取不同产地槐米中的芦丁，采用紫外分光光度法测定其含量，为槐米药材质量控制与评价提供理论科学依据。

1 材料

1.1 仪器及用具

HH-S 数显恒温水浴锅、紫外可见分光光度计（T6 新世纪）、循环水式多用真空泵（SHB-Ⅲ）、电子万用炉、电磁炉、超声波清洗仪（PS-30A）、电热恒温鼓风干燥箱（GZX-GF101-4BS-Ⅱ）、电子天平、抽滤瓶、布氏漏斗、滤纸、玻璃棒、烧杯、量筒、容量瓶、锥形瓶、铁架台、漏斗、脱脂棉、温度计、洗耳球、研钵。

1.2 试剂及材料

10%氢氧化钠溶液、饱和石灰水、0.4%硼砂水溶液、5%硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、蒸馏水、浓盐酸、95%芦丁水合物（萨恩化学技术（上海）有限公司）。

1.3 药材

山西槐米、河北槐米、河南槐米、甘肃槐米分别购自全炬药材行、亳州市京皖药材厂、文择轩中药材、黄河药材市场。

2 实验方案

2.1 碱溶酸沉法

准确称取槐米20 g，置于研钵中研碎，加入0.4%硼砂溶液120 ml，饱和石灰水80 ml，调节pH 8～9,置于电热炉上保持微沸状态30 min，过滤，重复2 次，合并滤液，并浓缩至一定体积。将浓缩液置于70℃水浴中，加入浓盐酸调pH 为2～3，放置3～5 d，待提取液底部产生黄色或棕黄色沉淀，抽滤，得芦丁粗品。

2.2 超声波辅助碱溶酸沉法

准确称取槐米20 g，置于研钵中研碎，加入0.4%硼砂溶液120 ml，饱和石灰80 ml，调节pH 8～9，超声30 min，过滤，重复2 次，合并滤液，并浓缩至一定体积。将浓缩液置于70℃水浴中，加入浓盐酸调pH 为2～3，放置3～5 d，待提取液底部产生黄色或棕黄色沉淀，抽滤，得芦丁粗品。

3 结果与分析

3.1 提取工艺结果

传统碱溶酸沉法和超声波辅助碱溶酸沉法提取工艺结果如表1 所示。

3.2 绘制标准曲线

根据2015 版《中国药典》，绘制芦丁浓度-吸光度标准曲线。由于甲醇毒性大，本实验用乙醇替代甲醇。

精密称取芦丁标准品200 mg，置于100 ml 容量瓶中，加乙醇定容至刻度，摇匀。精密吸取10 ml 至100 ml 容量瓶中加水至刻度，摇匀备用。

精密量取对照品溶液1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml、6 ml，分别置25 ml 容量瓶中，各加水至6 ml、5%亚硝酸钠溶液1 ml，混匀放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠溶液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以相应的试剂为空白，按照紫外分光光度法（通则0401），在500 nm 波长处测吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线（见图1）。

表1 传统碱溶酸沉法和超声波辅助碱溶酸沉法提取工艺结果

3.3 测定提取率

取干燥芦丁粗品约0.25 g，精密称定，加无水乙醇定容至25 ml 容量瓶，摇匀备用。精密量取3 ml 置25 ml 容量瓶中，按照标准曲线制备项下的方法，制备供试品，在500 nm 的波长处比色测定吸光度，标准曲线法测定供试品溶液中芦丁的浓度，通过计算得槐米中芦丁的提取率，结果见表2。

表2 传统碱溶酸沉法和超声波辅助碱溶酸沉法提取率

4 结果与讨论

碱溶酸沉法提取槐米中芦丁的含量由高到低依次是甘肃、山西、河南、河北，超声波辅助碱溶酸沉法提取槐米中芦丁的含量由高到低依次是山西、甘肃、河北、河南。同时，甘肃槐米的提取率最高，山西槐米次之，河南、河北槐米相差不大。总体而言，超声波辅助提取槐米中的芦丁更加高效。

在提取槐米中芦丁的过程中，使用传统的碱溶酸沉法第一遍提取的时候试液蒸发过多，滤液较少或几乎没有，第二遍提取液较第一遍多，而超声波辅助提取的过程中，试液几乎不蒸发，提取液比传统碱溶酸沉法几乎多1 倍，除了甘肃产地外，其他3 个产地的超声波辅助提取法的芦丁粗品重和芦丁提取率都高于传统的碱溶酸沉法，可以间接说明使用超声波辅助提取槐米中的芦丁更加高效，而甘肃产地的提取率传统法高于超声波辅助提取法，可能是由于外界的因素或者其他因素导致。

本次实验项目不同产地的槐米中芦丁的含量差别较大，可能是由于不同产地的槐米品质差异或采收时间不同导致，采收时间对槐米中芦丁的含量有很大影响。